Приложение а

(справочное)

Значение рК для ионизируемых групп в аминокислотах

Таблица А 1 - Значение рК для ионизируемых групп в аминокислотах

Аминокислота	-СООН	-NН3+	Боковая группа	рК в аминокислоте	Ожидаемое значение рК в белке
Аланин	2,3	9,9	-	-	-
Аргинин	1,8	9,0	-NН-С=NН2  NН2	12,5	12,0
Аспарагин	2,0	8,8	-	-	-
Аспарагиновая кислота	2,0	10,0	-СООН	3,9	4,4-4,6
Валин	2,3	9,6	-	-	-
Глутаминовая кислота	2,2	9,7	-СООН	4,3	4,4-4,6
Глутамин	2,2	9,1	-	-	-
Глицин	2,4	9,8	-	-	-
Гистидин	1,8	9,2	NН+ NН	6,0	6,5 – 7,0
Изолейцин	2,4	9,7	-	-	-
Лейцин	2,4	9,6	-	-	-
Лизин	2,2	9,2	-NН3+	10,8	10,0 – 10,2
Метионин	2,3	9,2	-	-	-
Фенилаланин	1,8	9,1	-	-	-
Пролин	2,0	10,6	-	-	-
Оксипролин	1,92	9,73	-	-	-
Серин	2,1	9,2	-	-	-
Треонин	2,6	10,4	-	-	-
Триптофан	2,4	9,4	-	-	-
Тирозин	2,2	9,1	- -ОН	10,9	9,6 – 10,0
Цистеин	1,8	10,8	-SН	8,3	8,5 – 8,8

Приложение б

(справочное)

Методики приготовления реактивов

1. Разбавленный раствор яичного альбумина. Белок одного куриного яйца, отделенный от желтка, хорошо взбивают и смешивают в колбе при встряхивании с десятикратным объемом воды. Раствор фильтруют через двойной слой смоченной водой марли, помещенный в воронку.

2. Раствор растительного альбумина. 25 г пшеничной муки смешивают со 100 мл воды и встряхивают в течение часа с помощью встряхивателя. Взвесь муки центрифугируют. Прозрачный центрифугат содержит преимущественно альбумин.

3. Раствор глиоксиловой кислоты. К 2 г Мg в порошке, слегка увлажненному, приливают при охлаждении 50 мл заранее охлажденного до 0 ⁰С насыщенного раствора щавелевой кислоты. Осадок оксалата магния растворяют, отфильтровывают и промывают небольшой порцией воды. Фильтрат подкисляют уксусной кислотой и доводят водой до объема 200 мл. Раствор хранят в холодильнике.

4. Раствор яичного альбумина. Белки куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 15–20 кратным объемом воды и фильтруют через несколько слоев марли.

5. Раствор яичного белка, содержащего альбумины, глобулины и сульфат аммония. Белки из трех куриных яиц отделяют от желтков, смешивают с 700 мл дистиллированной воды и 300 мл насыщенного раствора сернокислого аммония и отфильтровывают через несколько слоев марли.

6. Смешанный индикатор Гроака. Отвешивают 0,14 г метилового красного и 0,07 г метилового синего и растворяют в 150 мл 95% -ного этилового спирта.

7. Титрованный 0,02 н раствор серной кислоты с индикатором Гроака и борной кислотой. 6 мл серной кислоты (относительная плотность 1,84) и 30 мл индикатора Гроака (см. приложение Б, п.6) растворяют в 10 л воды. К этому раствору добавляют 60 г борной кислоты.

Определение поправки на нормальность раствора серной кислоты: 1,9064 г пе рекристаллизованной буры растворяют в 100 мл воды и 20 мл полученного 0,1 н раствора разбавляют водой до 100 мл в мерной колбе. 10 мл точно 0,02 н раствора буры титруют раствором серной кислоты (в трех повторностях) и определяют поправку к нормальности серной кислоты путем отношения объемов 0,02 н растворов буры и серной кислоты.

8. Селеновый катализатор. В фарфоровой ступке тщательно растирают 100 г К₂SО₄, 15,64 г СиSО₄· 5 Н₂О и 1 г металлического селена до однородной смеси.

9. Метиленовый красный. 0,2 г метиленового красного растворяют в 60 мл 96 %-ного этилового спирта и добавляют 40 мл воды.

10. 0,1% раствор белка казеина по Гаммарстену на фосфатном буфере. 3,8 г Na₃PO₄ ^. 12H₂O растворяют в 80 мл дистиллированной воды при 40 ^оС, добавляют 100 мг казеина по Гаммарстену и после полного растворения последнего устанавливают рН смеси 1н НСI на уровне 6,5; объем раствора доводят дистиллированной водой до 100 мл.

11. Реактив А. 2 г NaOH и 10 г Na₂CO₃ + 500 мл дистиллированной воды.

12. Реактив В. 5 мл 1,1 % раствора К-Na виннокислого + 0,5 мл раствора СиSO₄^. 5H₂O.

13. Реактив С. 50 мл реактива А + 1 мл В. Готовится перед каждой работой.

14. Реактив Фолина. 10 г Nа₂WоО₄  2Н₂О (перекристаллизованный) и 2,5 г Nа₂МоО₄  2Н₂О помещают в круглодонную колбу на 200-250 мл, приливают 70 мл воды и хорошо перемешивают. К полученному раствору добавляют 5 мл 85 %-ного раствора фосфорной кислоты и 10 мл концентрированной НСI. Колбу на шлифе присоединяют к обратному холодильнику, после чего смесь нагревают при умеренном кипячении в течение 10 часов. После кипячения прибавляют 15 г сернокислого лития (Li₂SO₄), 5 мл дистиллированной воды, 1 каплю брома (бромной воды). Избыток брома удаляют кипячением под тягой без холодильника в течение 15 мин., после чего жидкость охлаждают и разводят дистиллированной водой до 100 мл, фильтруют через стеклянный фильтр или бумажный, разводят водой с таким расчетом, чтобы получился раствор 1 н кислоты. Для этого кислотность реактива определяют предварительно, титруя разведенный в 10 раз реактив 0,1 н щелочью в присутствии фенолфталеина до слабо-розовой окраски. Реактив может храниться в темной склянке длительное время. Перед употреблением реактив разводят водой в отношении: 1 часть реактива и 3 части дистиллированной воды.

БЕЛКИ

Методические указания

к лабораторному практикуму

по дисциплине "Биохимия"

для студентов специальностей

49 01 01, 49 01 02, 91 0101

Составители: доц. Макасеева Ольга Николаевна

асс. Ткаченко Лариса Михайловна

Рецензент: доц., к.т.н. Пискун Татьяна Ивановна

Редактор Т.Л. Бажанова

Технический редактор А.А.Щербакова



Подписано в печать_____________ Формат 60х84 1/16

Печать офсетная. Усл. печ. л _________ Уч. изд. л _________

Тираж _____ экз._______Заказ ______ Бесплатно

Лицензия № 226 от 12.02.98 г.



Отпечатано на ризографе МГУП

212027, г. Могилев, пр. Шмидта, 3