ния смешанного типа, используют среду Кларка (1 % глюкоза, 0,5 % пептон, индикатор – метиленовый красный). При рН 4,5 и выше он имеет желтый цвет, при более низких значениях рН – красный цвет.

8. Микроорганизмы, образующие амилазу, способны расщеплять крахмал. Об этом узнают, прибавив к культуре несколько капель р-ра Люголя. Если крахмал расщепляется, то цвет среды не изменяется. Если крахмал не расщепляется, среда с этим раствором дает синее окрашивание.

Задача 5. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ ПРОТЕОЛИТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ БАКТЕРИЙ.

Для этого надо знать:

1.Протеолитическая активность – это способность микроорганизмов расщеплять белки с образованием различных продуктов(H2S, NH3, индола и т.д.). Изучение этих свойств применяется для идентификации бактерий.

2.Протеолитические свойства бактерий изучают:

а) по способности разжижать желатин: делают посев изучаемой культуры бактерий уколом в столбик мясопептонного желатина (МПБ + 10-20 % желатина) и оставляют при комнатной температуре (20-22° С) на несколько дней. Через 3-5-10 дней просматривают посевы и отмечают форму разжижения желатина, характерную для различных видов микробов – S. aureus вызывает воронкообразное разжижение; Bac. antracis и синегнойная палочка – послойное разжижение; Vibrio cholerae – в виде гвоздя и т.д. Разжижать желатин способны микробы, выделяющие фермент типа коллагеназы;

б) по конечным продуктам распада белков: делают посев на МПБ и выдерживают в термостате при температуре 37°С в течение 2-3 дней; для определения продуктов распада белков (индола, аммиака, сероводорода) используют специальные индикаторные бумажки, которые помещают между горлышком и ватной пробкой в пробирку с МПБ.

Индол обнаруживают по способу Мореля, для чего используют индикаторную бумажку, смоченную насыщенным раствором щавелевой кислоты, которая розовеет при образовании индола. Для обнаружения аммиака используют лакмусовую бумажку, в присутствии которого она синеет. Для обнаружения H2S используют полоску фильтровальной бумаги, смоченную уксуснокислым свинцом, которая чернеет в присутствии H2S. Образование H2S связано с ферментацией серосодержащих аминокислот, чаще всего цистеина. Образование индола и аммиака связано с ферментацией триптофана, под влиянием фермента триптофаназы.

Задача 6. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ МИКРОБНЫХ ФЕРМЕНТОВ В МЕДИЦИНЕ И ПИЩЕВОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ.

Для этого надо знать:

1.Микробные ферменты широко используются в медицине. Из Aspergillus niger получают амилазу и протеазу; из Rhizopus - липазу; из Aspergillus orizae - диастазу, которые применяют для улучшения пищеварения. Из Streptococcus sp. получают стрептокиназу, а из Cl. histolyticum - коллагеназу, которые используют для заживления ран и ожогов.

2.Ферменты микроорганизмов используют в генной инженерии (рестриктазы и ли-

27

газы), а также в пищевой промышленности для получения уксусной, молочной и др. кислот, для получения молочнокислых продуктов, в виноделии.

Задача 7. ОХАРАКТЕРИЗОВАТЬ МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧИСТОЙ КУЛЬТУРЫ АНАЭРОБОВ.

Для этого надо знать:

1.Выделение чистой культуры анаэробных бактерий осуществляется в три этапа. При этом также получают чистую культуру из однойклетки и добиваются роста микроорганизмов в виде изолированных колоний с последующим ее пересевом.

2.Особенностью работы по выделению чистой культуры анаэробов является применение различных методов создания бескислородных условий (см. выше).

3.Три этапа заключаются в следующем:

Первый день. Исследуемый материал (земля, гной) засевают для накопления в среду Китта-Тароцци.

Второй день: а) просматривают посевы, приготавливают мазки и окрашивают по Граму (в положительном случае обнаруживают помутнение среды и пузырьки газа в ней, а также в мазках– крупные споровые грамположительные палочки); б) для получения

изолированных колоний делают посев материала из среды Китта-Тароцци по методу Цейсслера, методу Вейнберга и методу Перетца.

Третий день: а) выросшие колонии изучают при помощи лупы и пересевают намеченную колонию в пробирку со средой Китта-Тароцци, которую помещают в термостат; б) проводят исследование чистой культуры анаэробов по морфологическим, культуральным, тинкториальным, биохимическим и антигенным признакам.

4.Посев по методу Цейсслера производят следующим образом: каплю (петлю) материала со среды Китта-Тароцци наносят на кровяной сахарный агар в первую чашку Петри и растирают шпателем по поверхности среды; затем этим же шпателем втирают материал в среду второй и третьей чашек для получения изолированных колоний. Посевы помещают в анаэростат или аппарат Аристовского. На следующий день по форме колоний (при рассматривании через лупу) и микроскопии мазков из них производят ориентировочное определение вида микроорганизмов и пересев отдельных, намеченных колоний на среду Китта-Тароцци для получения чистой культуры, изучения ее свойств и точного определения вида микроорганизмов.

5.Посев по методу Вейнберга производят следующим образом: одну или две капли (петли) материала из среды Китта-Тароцци вносят в пробирку с бульоном для разведения материала. Затем пастеровской пипеткой с запаянным концом переносят материал последовательно в 3-5 узких пробирок с предварительно прокипяченным(20 мин.) и ос-

туженным до 50°С сахарным МПА, погружая капилляр пипетки в расплавленный агар до самого дна пробирки. Засеянные пробирки быстро охлаждают под струей водопроводной воды. При этом агар застывает и фиксирует разобщенное положение отдельных микробных клеток в глубине столбика агара.

Вместо узких пробирок могут быть использованы трубки Виньяля-Вейона. С их помощью можно произвести посев различных разведений почвенной взвеси для получе-

ния изолированных колоний. (Почвенную взвесь готовят следующим образом: к 1 г почвы прибавляют 100 мл стерильной воды в колбе на250 мл, встряхивают на качалке 15 мин и отстаивают 5 мин;

28

взвесь разбавляют в 10, 100 и 1000 раз, внося последовательно по 1 мл взвеси в пробирки с9 мл сте-

рильного 0,9 %-ного раствора NaCl.) В пробирки с 10 мл расплавленного и остуженного до 50°С сахарного МПА засевают по0,1 мл полученных разведений почвенной болтушки (103, 104, 105),быстро перемешивают и засасывают в стерильные трубки Виньяля-Вейона.

Посевы помещают в термостат при 37° С.

Вопросы и упражнения для самоподготовки.

1.Какие химические реакции протекают в бактериальной клетке?

2.Что такое ферменты?

3.Что представляют собой ферменты по химической природе?

4.Что такое специфичность действия фермента?

5.От чего зависит активность ферментов?

6.Как распределяются ферменты в бактериальной клетке?

7.На какие классы делятся ферменты по типу катализируемой реакции?

8.Какие ферменты называются оксидоредуктазами?

9.Какие ферменты называются трансферазами?

10.Какие ферменты называются гидролазами?

11.Какие ферменты называются изомеразами?

12.Какие ферменты называются лиазами?

13.Какие ферменты называются лигазами?

14.Что такое экзоферменты?

15.Что такое эндоферменты?

16.Какие функции выполняют экзоферменты?

17.Для чего служат ферменты агрессии?

18.Приведите примеры ферментов агрессии?

19.Почему ферменты агрессии являются фактором вирулентности патогенных бактерий?

20.Какой фермент агрессии способствует распространению микроорганизмов в тканях?

21.Какие ферменты бактерий называются конститутивными?

22.Какие ферменты бактерий называются индуцибельными?

23.Какие бактериальные ферменты используются в медицине?

24.Почему определение ферментного состава бактерий является важным для их идентификации?

25.Какие ферментативные свойства изучаются чаще всего для идентификации бактерий?

26.Какие ферментативные свойства изучаются дополнительно для идентификации бактерий?

27.Почему бактерии обладают различными биохимическими свойствами?

28.Назовите ферменты оксидоредуктазы, которые используются для идентификации бактерий?

29.Каким образом определяют наличие каталазы у бактерий?

30.Каким образом определяют наличие цитохромоксидазы у бактерий?

31.Что такое сахаролитические свойства?

32.Для чего изучают сахаролитические свойства бактерий?

33.Какие среды используются для изучения сахаролитических свойств бактерий?

34.Какие конечные продукты образуются при ферментации углеводов бактериями?

35.Опишите состав жидких сред Гисса.

36.Какой индикатор добавляется в жидкие среды Гисса?

37.Как и почему изменяется цвет индикатора в жидких средах Гисса?

38.Что наблюдается, если микроорганизм ферментирует углеводы в средах Гисса до образования кислоты?

39.Что наблюдается, если микроорганизм ферментирует углеводы в средах Гисса до образования кислоты и газа?

40.Какие сахара добавляют в среды Гисса при использовании короткого ряда?

41.Какие сахара добавляют в среды Гисса при использовании длинного ряда?

29