Глава 3. Методы исследования осморегулирующих рефлексов.

Изучение осморегулирующих рефлексов различных органов потребовало разработки специальных методических приёмов.

Здесь уместно привести краткое описание этих методик, которые, как нам кажется, сами по себе представляют определённый интерес и могут быть использованы для других исследований.

Первоначально для введения в воротную вену различных растворов применялась специальная канюля, одна из многочисленных модификаций ангиостомической канюли Лондона. Однако в дальнейшем канюля была заменена зондами, которые оказались значительно удобнее и более соответствовали требованиям эксперимента [Финкинштейн,1958].

Общим для всех операций зондирования сосудов было использование боковой веточки магистральной артерии или вены, куда вводился и где укреплялся зонд. Исключение составляли коронарные и почечные артерии, при зондировании которых зонд вводился непосредственно в просвет сосуда.

Зонды изготавливались из полиэтиленовых трубок диаметром от 1 до 3 мм и длиной от 20 до 50 см в зависимости от размера животного. Их фиксация в сосуде производилась с помощью лигатур. После фиксации зонды промывались физиологическим раствором, заполнялись гепарином(1:5000) и запаивались. Запаянный конец зонда выводился под кожей в межлопаточную область, где помещался в кожном кармане.

Для исследования осморецепторного поля печени зонд вводился в воротную вену через мезентериальные или селезёночную вены. Самый простой способ – введение непосредственно в селезёночную вену с удалением селезёнки. Селезёночная вена широкая и позволяет ввести зонд большого диаметра, однако спленэктомия оказывает нежелательное действие на изучаемые процессы, нарушая регуляцию водно-солевого обмена, в котором селезёнка принимает участие [Тишенина, Финкинштейн,1961].

Для введения зонда без спленэктомии была разработана более сложная методика. Операция выполнялась следующим образом. Животное фиксировалось в положении на спине. По средней линии живота делался разрез длиной 10-15 см, через который селезёнка извлекалась из брюшной полости. Одна из крупных вен, соединяющих её с желудком, отпрепаровывалась до места впадения в главную магистральную вену селезёнки и использовалась для проведения зонда в магистральную вену вплоть до её впадения в воротную. Успех операции обеспечивался приданием отпрепарированной вене положения, при котором она делалась кА б вы продолжением основной вены.

Чтобы точно установить зонд в воротах печени (а это обязательное условие, без которого трудно получить хорошую реакцию), необходимо нащупать пальцами левой руки конец зонда в момент его вхождения в воротную вену ми осторожно повернуть вверх к печени. Без применения этого приёма зонд почти всегда поворачивает в каудальном направлении и попадает в мезентериальные вены. Растворы, вводимые через такой зонд, разбавляются кровью, оттекающей от кишечника, в связи с чем осмотического сдвига не достигается.

Через два-три дня после операции собаку брали в опыт, который обычно начинался с высвобождения запаянного конца зонда и промывания его физиологическим раствором. Инъекция с заданной скоростью производилась с помощью шприца через иглу, укреплённую в зонде.

Операция введения зонда через мезентериальные вены технически более проста. Как и в первом случае, делался срединный разрез передней брюшной стенки, и часть кишечника извлекалась из брюшной полости. Выбиралась достаточно широкая мезентериальная вена, и в неё вводился тонкий полиэтиленовый зонд, который продвигался под контролем глаза вплоть до ворот печени.

Местоположение кончика зонда устанавливается пальпаторно. Его фиксация, заполнение и выведение не отличаются от ранее описанных.

Рецепторное поле печени можно исследовать при введении раствора как в воротную вену, так и в печёночную артерию. В этом случае зонд укрепляется в желудочно-двенадцатиперстной артерии.

Операция производилась следующим образом. После вскрытия брюшной полости желудок оттягивался вниз для получения доступа к малому сальнику. Последний осторожно разрывался и растягивался, после чего в глубине раны можно было видеть общую печёночную артерию, направляющуюся к печёночно-двенадцатиперстной связке. Здесь артерия Т-образно делится на собственно печёночную и поджелудочно-двенадцатиперстную артерии. Первая идёт вверх, к воротам печени, вторая – вниз, к двенадцатиперстной кишке. Поджелудочно-двенадцатиперстная артерия отпрепаровывается, при этом надо помнить, что она окружена сосудами и сзади за ней скрывается стенка воротной вены. Под артерию подводятся три лигатуры: первая – около разветвления, вторая – как можно дальше от первой, и третья – посередине. Вторую лигатуру сразу же завязывают и в дальнейшем используют в качестве держалки. Из третьей делают петлю, которую затягивают после введения зонда, а первую передают ассистенту для перекрывания с её помощью кровотока во время введения зонда. Эту лигатуру надо расположить так, чтобы она не позволила кончику зонда продвинуться в район разветвления и тем более попасть в печеночную артерию. Дальнейший ход операции следующий. Слегка растянув поджелудочно-двенадцатиперстную артерию между двумя крайними лигатурами, делают боковой разрез её стенки. Конец тонкого полиэтиленового зонда с помощью анатомического пинцета вводят в просвет артерии и продвигают до места её разветвления. После введения зонд фиксируется вначале средней лигатурой, а затем двумя остальными. Промывание, заполнение, запаивание и выведение зонда наружу не отличаются от ранее описанных.

Для исследования рецепторов селезёнки растворы вводились в селезёночную артерию. Срединным разрезом вскрывалась брюшная полость, селезёнка извлекалась, и обнажался её нижний угол. Здесь легко можно было найти довольно толстую ветвь общей селезёночной артерии, которая использовалась для введения зонда. Около самой селезёнки ветвь перевязывалась, отпрепаровывалась и под неё и под неё подводились две лигатуры, крайняя из которых должна была отстоять сантиметра на три от места перевязки. Эта лигатура применялась для пережатия сосуда во время введения зонда. Через боковой разрез в просвет сосуда вводился тонкий полиэтиленовый зонд и фиксировался двумя-тремя лигатурами. Дальнейший ход операции аналогичен описанным выше.

Наиболее сложной является операция введения зонда в почечную артерию. В своё время она была разработана А.С.Баргером и др.[Barger e.a.,1956], и здесь мы приводим её описание с некоторыми изменениями.

Зонд для введения в почечную артерию отличается от обычного тем, что конец его оттягивается и доводится до диаметра 0,5 мм. Делается это следующим образом. Полиэтиленовая трубка длиной 400 мм, диаметром 1, 5 мм одевается на тонкую, лучше всего балалаечную, струну. Конец трубки длиной 30-40 мм оттягивается до диаметра 0,5 мм. Струна должна легко выходить из зонда, не деформируя при этом его тонкой оттянутой части.

Зонд вводится в почечную артерию через аорту. Операцию лучше делать на левой почке, которая имеет более длинную артерию. Обязательным условием успешной операции является отсутствие ветвления почечной артерии. Если, отойдя от аорты, артерия сразу же начинает делиться, вводить зонд не имеет смысла, поскольку тромбоз сосуда в этом случае неизбежен. Подход к сосудам осуществляется классическим почечным доступом – забрюшинно.

Почку слегка оттягивают вниз и, отступя от места отхождения почечной артерии на 5-8 мм, атравматической иглой на стенку аорты накладывают кисетный шов. В его центре острой инъекционной иглой диаметром 0,8 мм делается прокол стенки, и место прокола на 3-4 мин. Закрывается тупфером. После остановки кровотечения тупфер извлекается, и тогда на белой стенке аорты ясно видно место прокола в виде красной точки. Теперь почку надо оттянуть вниз таким образом, чтобы её артерия легла почти параллельно аорте. Тонкий конец зонда на струне вводится через прокол в аорту и направляется в почечную артерию. Его положение определяется пальпаторно. Зонд продвигается на 1/3 длины артерии, после чего струна осторожно извлекается и кисетный шов затягивается. Дополнительно зонд фиксируется к стенке аорты двумя-тремя лигатурами. Дальнейший ход операции не отличается от обычного.

При изучении рецепторного поля миокарда исследователь сталкивается с необходимостью введения растворов в систему коронарных сосудов. Существующие методики зондирования этих сосудов сложны и дают большой отход экспериментальных животных, поэтому нами разработан новый метод, при котором потери минимальны: на одном животном можно провести большое количество опытов.

Суть операции состояла в том, что тонкий полиэтиленовый зонд вводился ретроградно в одну из ветвей огибающей коронарной артерии. Для изготовления зонда брали полиэтиленовую трубку диаметром 1-1,5 мм и длиной 400 мм и на одном её конце, отступя 40-50 мм, делали утолщение, необходимое для фиксации. Для этого в трубку вводился мандрен, по которому она могла свободно двигаться. На расстоянии40-50 мм от её конца производилось осторожное нагревание на небольшом участке и скользящим движением по мандрену образовывалась цилиндрическая муфточка.

Операцию удобнее всего вести под внутривенным наркозом (например,40 мг этаминала натрия на 1 кг веса животного). После интубаций и налаживания управляемого дыхания грудная клетка вскрывалась на уровне пятого межреберья слева. Рассекался перикард, и на его края накладывались зажимы, позволяющие вывести сердце в рану. Осторожно отпрепаровывалась ветвь коронарной артерии. Окончательно подготавливался зонд. Для этого он извлекался из дезинфицирующего раствора и, начиная от муфты, оттягивался до диаметра 0, 4-0, 5 мм, укорачивался до длины отпрепарованной веточки и косо срезался. С помощью атравматической иглы под веточку подводились две лигатуры, из которых одна, расположенная дистально, тут же завязывалась, отключая при этом кровообращение в небольшом участке миокарда. У собак такое отключение не вызывает инфаркта в связи с хорошо развитой системой коллатералей [Джавахишвили, Камахидзе, 1967]. Мы также не наблюдали существенных нарушений в работе сердца ни во время операции, ни после неё. Вторая лигатура служила для остановки кровотечения во время введения зонда.

Далее делался боковой надрез стенки артерии и через него вводился зонд, который продвигался ретроградно до момента, когда муфточка упиралась в края разреза. Обеими лигатурами зонд фиксировался в районе муфты. Как правило, этого бывает достаточно для его укрепления и предотвращения кровотечения. Нахождение зонда в сосуде не вызывает тромбоза. Произведённая через такой зонд наливка тушью коронарной системы показала, что инъецируемая жидкость распространяется по всему миокарду так же эффективно, как и при введении по ходу кровотока.

Нам остаётся описать ещё две операции введения зонда в полость сердца и лёгочную артерию.

В правое предсердие, желудочек и лёгочную артерию зонд можно ввести, не вскрывая грудную клетку, через яремную вену. Однако метод этот требует применения рентеноконтрастных зондов и не позволяет оставлять зонд на долгое время. По этой причине мы препдпочли метод введния зонда при вскрытой грудной клетке. В лёгочную артерию зонд вводился следующим образом. Как и в предыдущем случае, операция производилась под внутривенным наркозом(40 мг этаминала натрия на 1 кг веса) с применением управляемого дыхания. Грудная клетка вскрывалась в пятом межреберье, рассекался перикард и фиксировался зажимами. Стенка лёгочной артерии с помощью атравматической иглы прошивалась двумя поддерживающими лигатурами, и между ними накладывался кисетный шов. Для изготовления зонда бралась полиэтиленовая трубка диаметром 1, 5-2 мм, на конце которой делалось небольшое утолщение, позволяющее фиксировать её в сосуде. Зонд вводился через прокол стенки, сделанный в центре кисетного шва. Муфта углублялась в просвет сосуда, и кисетный шов затягивался. Дополнительными лигатурами зонд фиксируется к стенке лёгочной артерии.

При необходимости зондирования одной из ветвей лёгочной артерии изготавливался зонд с муфточкой, расположенной на расстоянии 60-70 мм от его конца. Введение производилось так же, как и в предыдущем случае, зонд продвигался в соответствующую ветвь под пальпаторным контролем и фиксировался с помощью кисетного шва.

Зонд для введения в сердечные полости изготавливался из полиэтиленовой трубки диаметром 1,5-2 мм, утолщение для фиксации делалось, отступ на 10-20 мм от конца зонда, который вводился через разрез в соответствующем ушке. Предварительно на месте разреза накладывались кисетный шов и две поддерживающие лигатуры. Далее делался разрез ножницами и быстро вводился зонд. Кисет затягивался таким образом, чтобы муфта находилась в ткани сердца и была им фиксирована.