ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №1

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО БЕЛКА СЫВОРОТКИ КРОВИ БИУРЕТОВЫМ МЕТОДОМ

Значение метода:

1) Нормопротеинемия 60-80г/л.

2) Гипопротеинемия:

1. Относительная (гидремия при нагрузке водой, водных отравлениях).

2. Абсолютная вследствие:

а) подавления синтеза белка (альбуминов при нарушении функции гепатоцитов, глобулинов при всех формах недостаточности РЭС).

б) потери белков преимущественно альбуминов (нарушение функции желудочно-кишечного тракта, нарушение почечного фильтра, кровоизлияния, увеличение проницаемости капилляров - отеки, обширные экссудаты, обширные выпоты в серозные полости);

в) усиление расхода альбуминов при голодании.

3) Гиперпротеинемия:

1. Относительная (обезвоживание)

2. Абсолютнаявследствии усиления синтеза глобулинов (злокачественные новообразования, ряд форм лейкозов, инфекционное или токсическое раздражение РЭС).

Принцип метода: Биуретовый метод основан на образовании в щелочной среде окрашенного комплексного соединения меди с пептидными группами белка. Характерная фиолетовая окраска раствора пропорциональна числу пептидных групп.

Норма 63-83 г/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №2

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРАНСАМИНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ.

Значение метода: Аминотрансферазы (АЛТ и АСТ) представляют собой ферменты, участвующие в переносе аминогрупп от альфа-аминокислот к альфа- кетокислотам. Коферментом в этой реакции является производная Вит В6- пиридоксальфосфат. Аминотрансферазы относятся к широко распространенным ферментам в организме, к ряду внутриклеточных. В сыворотке крови активность этих ферментов в норме не высока. Органические поражения при острых и хронических заболеваниях, сопровождаются деструкцией клеток, приводят к выходу трансаминаз из очага поражения в кровь.

АЛТ-содержится в высоких концентрациях в печени и в меньших количествах в скелетных мышцах, почках, сердечной мышце. Значительное повышение (в 10-100 раз) активности АЛТ в крови наблюдается при вирусном гепатите, токсическом некрозе печени. Особое значение имеет определение АЛТ в инкубационный период вирусного гепатита, а также для постановки диагноза при безжелтушной форме этого заболевания и эффективности лечения.

АСТ- широко распространена с высокими концентрациями в сердце, печени, скелетных мышцах, почках, эритроцитах. Повреждение любой из этих тканей может привести к повышению концентрации АСТ в сыворотке крови. Особое значение определения АСТ имеет для диагностики инфаркта миокарда и динамики заболевания. Уже через три часа после заболевания АСТ повышается, в сыворотке на 4-5 сутки наблюдается пик подъема, к 7 суткам активность АСТ должна вернуться к норме.

Активность АСТ определяется также в ротовой жидкости. Источником АСТ являются эпителиальные клетки, фибробласты, лейкоциты крови и плазма крови. В норме активность АСТ в ротовой жидкости следовая. Увеличение активности АСТ говорит о повреждении тканей парадонта и может служить одним из признаков гингивита.

Принцип метода: О трансаминазной активности сыворотки крови судят по количеству ПВК, образующейся при переаминировании из аланина или в результате декарбоксилированиящавелеуксусной кислоты, образующейся при переаминировании из аспарагиновой кислоты (АСТ). ПВК взаимодействует с 2,4-динитрофенилгидразином, с образованием 2,4-динитрофенилгидразона пировиноградной кислоты. При обработке динитрофенилгидразона щелочью образуется окрашенное в красный цвет соединение. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству ПВК.

Норма: АЛТ- 0,1-0,68 мкм/л.ч

АСТ- 0,1-0,45 мкм/л.ч

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №3

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ПСЕВДОХОЛИНЭСТЕРАЗЫ СЫВОРОТКИ КРОВИ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ.

Значение метода: определение сывороточной псевдохолинэстеразы имеет важное значение, как метод функционального исследования печени. Этот фермент синтезируется в клетках печени и относится к группе секреторных ферментов. При нарушении белоксинтезирующей активности печени, содержание фермента в сыворотке крови сокращается.

Принцин метода: метод основан на фотометрическом определении концентрации уксусной кислоты, образованной при гидролизе ацетилхолинхлоридаацетилхолинэстеразой сыворотки крови.

Норма: 160-340 мкМ./ час.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №4

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ЩЕЛОЧНОЙ ФОСФАТАЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Принцип метода: Под действием фермента сыворотки крови бета-глицерофосфат подвергается гидролизу с освобождением неорганического фосфата, по которому судят об активности данного фермента.

Ход определение: Тщательно сполостнуть дистиллированной водой пробирки и воронки. РЕАКТИВЫ	ОПЫТ	КОНТРОЛЬ
1.Раствор бета-глицерофосфата	1мл	1мл
2. Сыворотка	0,1мл инкубация 30 мин при 37градусах	-
3. ТХУ-10%	1мл	1мл
4.СЫВОРОТКА	-	0,1 мл
Тщательно перемешать и фильтровать через смоченный дистиллированной водой фильтр. К фильтрату добавить:
5. Молибденовый раствор	1мл	1мл
6. Раствор аскорбиновой кислоты	1мл	1мл
Перемешать и через 10 мин. колометрировать контроль и опыт против Н20 (красный светофильтр, кюветы 5 мл). РАСЧЕТ: Из коэффициента светопоглощения опыта (Е оп) вычесть коэффициент светопоглощения контроля (Е контр). Разность посмотреть по калибровочному графику. В норме активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови взрослых 1,0-6,0 мм/час л., у детей до 6лет 2,5-15 мм/час до 16 лет 5,0-30,0 мм/час л.

Лабораторная работа №5

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ АМИЛАЗЫ (ДИАСТАЗЫ) В МОЧЕ АМИЛОКЛАСТИЧЕСКИМ СПОСОБОМ.

Значение метода: Диастаза (альфа-амилаза) является экскреторным ферментом. Наиболее богаты амилазой поджелудочная и слюнные железы. В норме активность этого фермента в крови сравнительно невелика в связи с тем, что амилаза-низкомолекулярный белок, она проходит через почечный фильтр и определяется в моче. Повышение амилазной активности мочи прежде всего связывается с повреждением клеток поджелудочной железы (увеличение проницаемости мембран, некротизированных клеток, нарушение оттока секрета в 12-перстную кишку). Так, при остром панкреатите амилазная активность мочи может увеличиться в 10-30 раз. Повышение амилазной активности мочи, но в меньшей степени, может сопровождать воспаление слюнных желез (острый паротит). Снижение активности амилазы в плазме крови наблюдается при уменьшении синтеза фермента при снижении функции поджелудочной железы, склерозировании органа.

Принцип метода: Основан на фотометрическом измерении падения концентрации крахмала в результате ферментативного гидролиза.

Норма: 80-160 мг крахмала, гидролизованного 1мл биологической жидкости за час инкубации при 37 градусах Цельсия.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №6

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ О-ТОЛУИДИНОВЫМ МЕТОДОМ.

Принцип метода: Альдогексозы (глюкоза, галактоза, ксилоза ) при нагревании с орто-толуидином в кислой среде дают синезеленое окрашивание, интенсивность которого определяется колометрически.

Норма: кровь –70-110мг %, плазма-60-100мг %, спинномозговая жидкость-45-70мг %.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №7

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГЛЮКОЗЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ГЛЮКОЗООКСИДАЗНЫМ МЕТОДОМ (ПО ОКИСЛЕНИЮ ФЕНОЛФТАЛЕИНА).

Принцип метода:

В-d глюкоза + в-d глюкозооксидазаглюколактон + ФАДН2

-------------------------

ФАД

ФАДН2+О2 = ФАД +Н2О2

Образующаяся перекись водорода в присутствии ионов меди окисляет фенолфталин до фенолфталеина, который в щелочной среде окрашен в красный цвет.

Норма: 3,5-5,7 ммоль/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №8

КАЧЕСТВЕННАЯ РЕАКЦИЯ НА ОПРЕДЕЛЕНИЯ САХАРА В МОЧЕ - РЕАКТИВ НИЛАНДЕРА.

Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi (NO3)2 в щелочной среде. При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок

металлического висмута.

O

|| 2+ ОН

R-C-H + Bi ---------------- R- COOH + Bi

t

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №9

ТУРБИДИМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ БЕТА- ЛИПОПРОТЕИДОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ПО БУРШТЕЙНУ И САМАИ.

Значение метода: По изменению липопротеидов сыворотки можно судить о различных патологических процессах организма человека. Увеличение содержания бета-липопротеидов- наиболее часто встречающееся в липограмме отклонение от нормы. Оно отмечается при атеросклерозе, внутрипеченочном холестазе, механической желтухе, диабете, при резкихгипопротеинемиях, гликогенозах, ксантоматозе и др. Увеличение бета-липопротеидов в крови тесно связано с гиперхолестеринемией, поскольку холестерин входит в состав, главным образом, бета-липопротеидов.

Принцип метода: Метод основан на избирательном осаждении бета-липопротеидов с помощью гепарина в присутствиии ионов Са. Введение гепарина в присутствии Са вызывает связывание бета-липопротеидов и помутнение раствора, оптическую плотность которого можно измерить на ФЭКе. Степень помутнения соответствует концентрации бета-липопротеидов.

Норма 300-400мг% (3-6 г/л).

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №10

1. РЕАКЦИЯ ОБРАЗОВАНИЯ ИОДОФОРМА (НА АЦЕТОНОВЫЕ ТЕЛА).

1мл. мочи + 1мл. NаОН + 5 капель I2 в КI = желтое окрашивание.

2. ПРОБА С ХЛОРНЫМ ЖЕЛЕЗОМ.

1мл. мочи + 5 капель хлорного железа = вишнево- красное окрашивание.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №11

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(МЕТОД ИЛЬКЕ).

Значение метода: Холестерин может накапливаться в крови в больших количествах при нарушении жирового обмена. Длительнаягиперхолестеринемия при измененных условиях растворимости холестерина приводит к развитию атеросклероза. Гиперхолестеринемия наблюдается при механической желтухе, нефрите и нефрозах, гипотериозе, авитаминозе группы «В». Очень высокое содержание холестерина в крови наблюдается при сахарном диабете, липоидном нефрозе. Гипохолестеринемияобнаружена при анемиях, лихорадочных состояниях, сыпном тифе, голодании, гипертиреозе, раковой кахексии, поражении ЦНС.

Принцип метода: Холестерин в присутствии смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и конц. серной кислоты в соотношении 1:5:1 (реактив Ильке) превращается в сульфокислоту холестерина зеленого цвета.

В норме содержание холестерина 3,5-6,8 мМоль или 116-242 мг %

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №11

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(МЕТОД ИЛЬКЕ).

Значение метода: Холестерин может накапливаться в крови в больших количествах при нарушении жирового обмена. Длительнаягиперхолестеринемия при измененных условиях растворимости холестерина приводит к развитию атеросклероза. Гиперхолестеринемия наблюдается при механической желтухе, нефрите и нефрозах, гипотериозе, авитаминозе группы «В». Очень высокое содержание холестерина в крови наблюдается при сахарном диабете, липоидном нефрозе. Гипохолестеринемияобнаружена при анемиях, лихорадочных состояниях, сыпном тифе, голодании, гипертиреозе, раковой кахексии, поражении ЦНС.

Принцип метода: Холестерин в присутствии смеси ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и конц. серной кислоты в соотношении 1:5:1 (реактив Ильке) превращается в сульфокислоту холестерина зеленого цвета.

В норме содержание холестерина 3,5-6,8 мМоль или 116-242 мг %

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №12

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕЙ КИСЛОТНОСТИ, ОБЩЕЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ, СВОБОДНОЙ СОЛЯНОЙ КИСЛОТЫ В ОДНОЙ ПОРЦИИ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА.

Значение метода: При клиническом анализе желудочного содержимого важнейшее значение имеет содержание кислот. Повышенная кислотность может указывать на язвенную болезнь и (или) 12-перстной кишки, гиперацидный гастрит. Пониженная кислотность встречается при ряде желудочно-кишечных заболеваний (гипоацидный гастрит), раке желудка. Кислоты желудочного сока, всасываясь в кровь, играют большую роль в кислотно-щелочном равновесии организма.

Принцип метода: Определение общей кислотности, свободной и связаной соляной кислоты проводят титрованием желудочного содержимого щелочью, с применением индикатора, которые в зависимости от рН среды меняют окраску, индикатор фенолфталеин (индикатор на общую кислотность) в кислой среде остается бесцветным, а в щелочной окрашивается в розовый цвет. Индикатор диметиламиноазобензол в присутствии свободной НСI окрашивается в ярко-красный цвет, в ее отсутствии дает желтое или оранжевое окрашивание. Зона перехода фенолфталеина лежит в пределах рН 8,2-10, а диметиламиноазобензола рН 2,9-4,0.

Норма

Общая кислотность желудочного сока 40-60Ед

Свободная НСI-20-40 Ед

Кислотность желудочного содержимого выражается в титрационных единицах – количестве 0,1 р-раNаОН, пошедших на титрование 100мл желудочного сока.

(для опыта взято 10мл желудочного сока, поэтому умножают на 10).

ПИРАМИДОНОВАЯ ПРОБА НА ОБНАРУЖЕНИЕ КРОВИ В ЖЕЛУДОЧНОМ СОКЕ.

Принцип и значение метода: Химическое обнаружение в желудочном соке крови сводится к нахождению кровяного пигмента гемоглобина. Гемоглобин обладает «пероксидазной» активностью и способен окислять пирамидон в присутствии перекиси водорода. При этом получается окрашенный продукт реакции.

РЕАКЦИЯ УФФЕЛЬМАННА НА МОЛОЧНУЮ КИСЛОТУ.

Значение метода: В норме в желудочном содержимом находится следовые количества молочной кислоты. Она появляется при ускоренной десквамации эпителия желудка в больших количествах. Это может произойти при острых токсикоинфекциях, протекающих с явлениями тяжелого гастроэнтерита (сальмонеллез) и некоторых формах гастрита. Источником молочной кислоты в желудке могут быть грибки сапооа. Появляется она также при резком снижении кислотности желудочного сока.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №13

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ ГАММА-ГЛЮТАМИЛ-ТРАНСПЕПТИДАЗЫ (ГГТП) СЫВОРОТКИ КРОВИ.

Значение метода: Фермент ГГТП локализован в мембранах клеток разных органов и служит для транспорта всех аминокислот внутрь клетки. При патологических процессах печени, сопровождающихся разрушением клеток, повышается активность фермента в плазме крови. Фермент мембранный, поэтому появляется в плазме рано. Повышение активности ГГТП в плазме наблюдается при алкоголизме, приеме опиатов. Снижение активности отмечается при приеме эфедриновых препаратов.

Принцип метода: Заключается в фотометрическом определении концентрации нитроанилина, который образуется при взаимодействии гамма-глютамил-нитроанилида с дипептидом глицил-глицилом под действием ГГТП.

Гамма-глютамил-нитроанилид+глицил-глицил------ гамма-глютамил-глицил-глицил+ нитроанилин

Активность ГГТП выражается в международных единицах Е/Л, означающих количество микромолейнитроанилина, образующегося под действием фермента, содержащегося в 1мл сыворотки за 1мин инкубации при 37 Градус С.

НОРМА: Мужчины 15-106 Е/Л, женщины 10-66 Е/Л

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №14

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ МОЧЕВИНЫ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Значение метода: Остаточный азот – азот небелковых соединений крови.

К остаточному азоту относится: мочевина, аминокислоты, креатин, креатинин, мочевая кислота,

гиппуроновая, аммиак.

1) Норма 14-28мм/л.

2) Увеличение уровня –Азотемия

1. Относительная ( обезвоживание)

2. Абсолютная:

а) ретенционная: ренальная (нарушение фильтрации); экстраренальная (снижение оттока мочи, снижение почечного кровотока вследствие шока, острой кровопотери).

б) продуктивная: подавление синтеза белка и усиление распада белка (лечение антибиотиками, сахарный диабет, гиперкортицизм, голодание)

2) Снижение уровня остаточного азота.

1. Относительное (введение больших количеств солевых растворов).

2. Абсолютное (понижение образования мочевины).

Принцип метода: мочевина при нагревании в кислой среде взаимодействует с диацетилмоноксимом и образует красный комплекс. Интенсивность окраски пропорционально концентрации мочевины в сыворотке крови.

Содержание мочевины в сыворотке крови 20-40 мг% или 2,5-8,32 м моль /л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №15

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНА С

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

Принцип метода : количественного определения витамина С в сыворотки крови основан на его способности восстанавливать 2,6- дихлорфенолиндофенол, который в щелочной среде имеет синюю окраску, а в кислой красную.

Норма: 0,8-1,2 мг%.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №16

ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ВИТАМИНА С В МОЧЕ

Определение содержания витамина С в моче дает представление о запасах этого витамина в организме, так как наблюдается соответствие концентрации витамина С в крови и количество этого витамина, выделяемого с мочой.

Норма: 10-20 мг/сутки.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №17

КОАГУЛЯЦИОННАЯ ПРОБА ВЕЛЬТМАНА

Значение метода: Сыворотку крови можно представить как коллоидную систему, устойчивость которых зависит от содержания белковых фракций крови и соотношения между ними. Повышенной устойчивостью обладают альбумины – белки, с малыми размерами молекул, выраженным электрич. зарядом и высокой степенью гидратации. У глобулинов-большие размеры молекул сочетаются с меньшим зарядом и более низкой степенью гидратации. В связи с этими особенностями устойчивость глобулинов значительно ниже. Коллоидная устойчивость сыворотки крови уменьшается при снижении фракции альбуминов , при заболеваниях печени (гепатит, цирроз, острая желтая атрофия печени), при гемолитических состояниях. Также считают, что коагуляционная проба снижена при повышении содержания гамма-глобулинов, снижающих стабильность сыворотки. Увеличение пробы наблюдается при острых воспалительных и эксудативных процессах, когда увеличивается кол-во альфа- и бета- глобулинов, повышающих стабильность сыворотки (эксудативная фаза ревматизма, активный процесс туберкулеза легких, злокачественных опухолей, больших потерях жидкости, острых инфекционных заболеваниях). В клинико-диагностических лабораториях широко используют методы при которых реакциями коагуляции обнаруживают изменения в составе белков сыворотки крови. Одним из таких методов является коагуляционная проба Вельтмана.

Принцип метода: Устойчивость р-ров высокомолекулярных соединений (белков) зависит от 2-х факторов: величины заряда молекул и степени их сольватации. В пробе Вельтмана для получения коагуляции белков сыворотки крови используется раствор СаСI2, который как электролит снижает заряд молекул и тепловую денатурацию, в результате которой молекулы белка приобретают гидрофобные свойства и теряют гидратную оболочку.

В норме реакция наступает при добавлении 0,4- 0,5 мл СаСI2.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №18

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ГЕМОГЛОБИНА МЕТОДОМ ЩЕЛОЧНОЙ ДЕНАТУРАЦИИ

Значение метода: У детей при рождении количество гемоглобина выше, чем у взрослого (60-70%). Нв у новорожденного составляет фетальный гемоглобин и 30-40% Нв (взрослого типа). После рождения фетальный гемоглобин убывает и к 5-6 месяцам жизни составляет 1-2 % всего Нв. Фетальный Нв отличается от взрослого рядом свойств: он растворяется при более высоких концентрациях солей, более устойчив к щелочам, имеет другую электрофоретическую подвижность. Определение фетального гемоглобина имеет большое значение не только у детей, но и у взрослых при различных патологических состояниях, например при гипоксиях (пневмонии, инфаркте миокарде, гепатите, хроническом бронхите и др).

Принцип метода: Основан на большой устойчивости фетального Нв к щелочам.

Норма = 130-185г/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №20

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАЛЬЦИЯ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ТИТРОМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ С ПРИМЕНЕНИЕМ МУРЕКСИДА

Значение метода: Определение Са крови имеет большое значение (клиническое). Са определяют при рахите, при спазмофилии, при костных заболеваниях, при некоторых заболеваниях почек. При рахите также определяют коэффициент (Са/Р), в норме он равен 1,9-2 а при рахите увеличивается до 3 и более.

Принцип метода: мурексид образует с ионами Са в щелочной среде комплексное соединение, окрашенное в красно- фиолетовый или бледно-розовый цвет (в зависимости от концентрации). При титровании раствором более сильного комплексо-образователя трилона Б, этот комплекс разрушается, что приводит к изменению окраски, свойственной свободному мурексиду (бледно-сиреневой).

Норма: Са=4,5-6,0 мэкв/л

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №21

ОПРЕДЕЛЕНИЕ НЕОРГАНИЧЕСКОГО ФОСФОРА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ.

Значение метода: Гиперфосфатемия встречается при почечной недостаточности, гипопаратиреозе, акромегалии, при гипервитаминозе Д, костных заболеваниях, туберкулезе, диабете, кетозе, повышенной мышечной работе, при молочной диете. Гипофосфатемия наблюдается при гиперпаратиреозе, остеомаляции, пеллагре, длительном лечении инсулином и хлористым кальцием, при нарушении всасывания фосфатов, Д- авитаминозном рахите.

Принцип метода: Неорганический фосфор при взаимодействии с (NН4)2МоО4 образует фосфорно-молибденовую кислоту, которая восстанавливается аскорбиновой кислотой до синего фосфорно-молибденового комплекса. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации неорганического фосфора.

Норма: 1,8- 2,4 мэкв/л.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА №22

Качественные реакции на неорганические и органические составные части мочи.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ БЕЛКА В МОЧЕ. РЕАКЦИЯ ГЕЛЛЕРА

В пробирке держат 1мл НNО3 c NаСI , туда же осторожно по стенке, слегка наклонив пробирку наслаивают из пипетки мочу, на границе 2-х жидкостей при наличии белка появляется белое колечко.

ПИРАМИДОНОВАЯ ПРОБА НА ОБНАРУЖЕНИЕ КРОВИ В МОЧЕ

Химическое обнаружение крови в моче сводится к нахождению кровяного пигмента гемоглобина. Гемоглобин обладает пероксидазной активностью и способен окислять пирамидон в присутствии перекиси водорода. При этом получается окрашенный продукт реакции, фиолетовый.

Ход определения: К 0,5мл спиртового р-ра пирамидона прибавляют 5 капель конц. уксусной кислоты, 0,5 мл 3% Н2О2 и 1мл мочи. При положительной пробе получается фиолетовая окраска.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕНИЛПИРОВИНОГРАДНОЙ КИСЛОТЫ В МОЧЕ

Принцип метода: Метод основан на способности энольной формы фенилпировиноградной кислоты образовывать с ионами трехвалентного железа комплексное соединение, окрашеное в сине-зеленый цвет.

Ход работы: к 5мл мочи приливают 4 капли 5Н раствора серной кислоты, перемешивают и добавляют к смеси 4 капли 10% раствора FеСI3. При наличии в моче фенилпировиноградной кислоты через 30сек- 1мин. появляется сине-зеленое окрашивание.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АЦЕТОНОВЫХ ТЕЛ

Проба с хлорным железом: 1мл мочи + 5капель хлорного железа =вишнево-красное окрашивание.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРА- РЕАКЦИЯ НИЛАНДЕРА.

Реакция Ниландера относится к окислительно-восстановительным методам определения сахара. Она основана на окислении глюкозы солью висмута Вi(NО3)2 в щелочной среде.

R- COH + Bi ------------- R-COOH +Bi

ОН

При кипячении, в случае наличия сахара в моче, выпадает черный осадок металлического висмута.

ИНТЕРПРИТАЦИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ

Глюкоза

Универсальный источник энергии для клеток - главное вещество, из которого любая клетка человеческого организма получает энергию для жизни. Потребность организма в энергии, а значит - в глюкозе - увеличивается параллельно физической и психологической нагрузке под действием гормона стресса - адреналина, во время роста, развития, выздоровления (гормоны роста, щитовидной железы, надпочечников). Для усвоения глюкозы клетками необходимо нормальное содержание инсулина - гормона поджелудочной железы. При его недостатке (сахарный диабет) глюкоза не может пройти в клетки, ее уровень в крови повышен, а клетки голодают.

Повышение (гипергликемия):

- сахарный диабет (недостаточность инсулина)

- физическая или эмоциональная нагрузка (выброс адреналина)

- тиреотоксикоз (повышение функции щитовидной железы)

- феохромоцитома (опухоль надпочечников, выделяющая адреналин)

- акромегалия, гигантизм (повышение уровня гормона роста)

- синдром Кушинга (повышение уровня гормона надпочечников - кортизола)

- заболевания поджелудочной железы (панкреатит, опухоль, муковисцидоз)

- хронические заболевания печени, почек

Снижение (гипогликемия):

- голодание

- передозировка инсулина

- заболевания поджелудочной железы (опухоль из клеток, синтезирующих инсулин)

- опухоли (избыточное потребление глюкозы как энергетического материала опухолевыми клетками)

- недостаточность функции эндокринных желез (надпочечников, щитовидной, гипофиза (гормон роста)

- тяжелые отравления с поражением печени (алкоголем, мышьяком, соединениями хлора, фосфора, салицилатами, антигистаминами)

- состояние после гастрэктомии, заболевания желудка и кишечника (нарушение всасывания)

- врожденная недостаточность у детей (галактоземия, синдром Гирке)

- у детей, рожденных от матерей с сахарным диабетом

- недоношенность