2. Практическая работа студентов.

Задание 1. На занятии изучить морфологические признаки грибов и дрожжей, их культуральные свойства, ознакомиться с представителями отдельных классов. Освоить методику приготовления препаратов «раздавленная капля» и технику микроскопирования живых неокрашенных объектов.

Приготовление препаратов типа «раздавленная капля»

1. На предметное стекло трубочкой или пипеткой наносят большую каплю воды;

2. Зажигают спиртовку, прокаливают припаровальную иглу над пламенем горелки и отбирают небольшое количество мицелия грибов из пробирки или чашки Петри, соблюдая правила асептики;

3. Культуру аккуратно помещают в каплю, нанесенную на предметное стекло и с помощью двух игл расправляют ее в воде;

4. Препарат накрывают покровным стеклом и слегка придавливают. Излишки воды удаляют с помощью фильтровальной бумаги.

5. Микроскопируют препарат «раздавленная капля» сначала с объективом х8, а затем х40 в затемненном поле зрения (конденсор опущен, шторка ирис-диафрагмы прикрыта).

При отборе и микроскопии препаратов грибов учитывают следующие рекомендации:

а) гриб рода Mucor. Отбирают черновато-серый пушистый воздушный мицелий. При микроскопии обращают внимание на гифы с заполненными спорами спорангиями и колонки, которые образуются при освобождении спорангия;

б) гриб родаAspergillus. Отбирают немного пушистого мицелия с окрашенными конидиями, слегка углубляясь иглой в питательную среду. Обращают внимание на несептированные конидиеносцы;

в) гриб родаPenicillium. При отборе стараются взять молодой мицелий (на границе окрашенного и белого мицелия), углубляясь иглой в среду. Обращают внимание на септированные гифы с кисточками.

г) гриб рода Alternaria. Берут грибницу в черных участках, углубляясь в нее иглами. Обращают внимание на септированный мицелий, слабо развитые конидиеносцы и крупные конидии, имеющие вид округлых или заостренных многоклеточных образований, напоминающих «гранаты-лимонки».

При исследовании дрожжейна предметное стекло наносят суспензию дрожжей, накрывают покровным стеклом, излишки воды удаляют фильтровальной бумагой. Микроскопируют препарат и объективом х8 и х40.

Микроскопируют окрашенный препарат дрожжей метиленовым синим для изучения роста клеток, выявления мертвых клеток прессованных дрожжей. Рассчитать процентное содержание мертвых клеток, необходимо подсчитав их численность в 10-ти полях зрения – они окрашиваются в ярко-синий цвет.

Задание: по памяти зарисовать микроскопические картины исследованных культур грибов и дрожжей с учетом морфологических особенностей каждого микроорганизма.

Задание 2. Ознакомиться с влиянием окружающей среды на микрорганизмы

Температура.

Микробы приспосабливаются к изменениям температуры окружающей среды. Выделяют оптимальную температуру (благоприятную для роста и размножения), минимально и максимально приемлемые ( за их пределами рост прекращается). По отношению к температурным условиям микроорганизмы разделяют на мезофильные, психрофильные и термофильные.

- мезофильные виды лучше растут в пределах 20-40 ⁰С, к ним относится большинство патогенных и условно-патогенных микроорганизмов;

- термофильные виды растут при температуре выше 40 ⁰С, верхний предел 70 ⁰С;

- психрофильные виды растут в диапазоне температур 0-10 ⁰С, к ним относится большинство сапрофитов, обитающих в почве, в пресной и морской воде

Химические вещества, которые пагубно влияют на микроорганизмы, но не влияют на макроорганизмы, и которые используют лечения инфекционных болезней, называют антисептиками.

Антисептика – это комплекс мероприятий, направленных на уничтожение или угнетение их роста на объекте (рана, организм). С этой целью используют бактерицидные химические вещества.

Асептика – система профилактических мероприятий (дезинфекция, стерилизация), направленная на предупреждение микробному заражению ран, операционного поля, культуры микроорганизмов и др.

Для проведения дезинфекции и стерилизации используют разные методы в зависимости от того, какой режим стерилизации они обеспечивают.

Стерилизация — обработка объектов, при которой достигается полное уничтожение всех микроорганизмов. В результате стерилизации объект становится свободным как от патогенных, так и от сапрофитных микробов. Существуют различные методы и способы стерилизации, в основе которых лежит действие физических или химических факторов. Критерием гибели микроорганизмов является необратимая утрата способности к размножению, что можно оценить путем количественного подсчета числа колоний после высева смывов на чашки с питательными средами.

Наиболее широко применяют методы тепловой стерилизации: кипячением, сухим жаром в атмосфере горячего воздуха или влажным жаром при помощи пара, а также прокаливанием предметов в огне.

Прокаливание на огне — надежный метод стерилизации бактериологических петель, металлических и стеклянных предметов. Однако применяется ограниченно ввиду их порчи.

Стерилизация сухим жаром или горячим воздухом производится в сушильных шкафах или печах Пастера при температуре 160—170°С в течение 1—1,5 ч по достижении заданной температуры. Этим методом стерилизуют лабораторную посуду, инструменты, минеральные масла, вазелин. Жидкости и резину сухим жаром стерилизовать нельзя. Предметы, подлежащие стерилизации, заворачивают в бумагу или закладывают в металлические пеналы для предохранения от последующего загрязнения. Необходимо помнить, что при темпера-, туре выше 170°С начинается обугливание бумаги, ваты, марли, а при более низкой температуре не происходит гибели спор.

Стерилизация кипячением в течение 30 мин убивает вегетативные формы микробов. Споры многих бактерий при этом сохраняются, выдерживая кипячение в течение нескольких часов. Для уничтожения вирусов — возбудителей болезни Боткина необходимо кипячение в течение 45—60 мин. Кипячению в специальных стерилизаторах подвергают шприцы, хирургические инструменты, иглы, резиновые трубки. Для повышения точки кипения и устранения жесткости воды добавляют 2% гидрокарбоната натрия.

Стерилизация насыщенным паром под давлением (автоклавирование) является наиболее надежным и быстрым методом стерилизации. Обеспложивание достигается воздействием пара, температура которого под давлением выше, чем температура кипящей воды: при давлении 0,5 атм 112°С, при 1 атм. 121 °С , при 1,5 атм 127°С и при 2 атм 134°С.

Дезинфекция — уничтожение патогенных микробов в окружающей человека среде. Методы и способы дезинфекции. различны, но они преследуют цели уничтожения не всех микроорганизмов, а только патогенных. Уничтожение возбудителей инфекционных заболеваний в переносчиках называют дезинсекцией, а в организме грызунов — источников инфекции — дератизацией.

Дезинфекция имеет большое значение в системе профилактических и противоэпидемических мероприятий. С учетом роли дезинфекции ее делят на профилактическую и очаговую. Профилактическая дезинфекция позволяет предупредить распространение инфекционных болезней среди населения и порчи продуктов. Такой вид дезинфекции проводят в пищевых объектах, местах торговли пищевыми продуктами, на предприятиях по переработке животного сырья, в местах общественного пользования, в сооружениях водоснабжения, медицинских учреждениях, бактериологических лабораториях. При выполнении различных видов дезинфекции применяют механические, физические и химические способы и средства.

Задание 3. Проведение дезинфекции рук.

Алгоритм «Дезинфекция рук»:

- сделайте из ваты два шарика диаметром 1-2 см;

- возьмите пинцетом один шарик, смочите его в растворе дезинфектанта;

- протрите ним руки в такой последовательности: левая рука – тыльная сторона, ладонная сторона, между пальцами, ногтевая пластинка, под ногтями; правая рука – в такой самой последовательности;

- шарик опустите в контейнер с дезинфекционным раствором;

- возьмите пинцетом второй шарик и все повторите;

- вымойте руки с мылом;

- высушите руки, смажьте их кремом для рук.