
- •Лабораторный практикум микробиология
- •Тема: микробиологичесКая лабораторИя. МЕтоды микроскопии, приготовление препаратов. ПРостые и сложные методы окраски. МОрфологические особенности бактерий.
- •1.Теоретический разбор материала.
- •2. Практическая работа студентов.
- •Правила поведения в учебной лаборатории:
- •Во время работы в лаборатории категорически запрещается:
- •1. Техника отбора чистых культур микроорганизмов
- •2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
- •3.Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов простым методом
- •1. Теоретический разбор материала письменно(20 мин).
- •2. Практическая работа студентов.
- •Задание 4. Произвести контроль за обработкой посуды, инвентаря и обработки рук персонала хлорсодержащими дезинфектантами
- •1.Теоретического разбор материала:
- •Тема: определение бактериального загрязнения исследуемых объектов.
- •1.Теоретический разбор материала (30 мин).
- •2. Практическая работа студентов
- •3. Оформление и проверка протоколов.
- •Цель: Овладеть методиками лабораторного исследования молока и молочных продуктов. Научиться определять в молоке посторонние примеси.
- •1.Теоретический разбор материала.
- •2.Практическая работа студентов
- •3. Оформление и проверка протоколов.
- •Макаронных изделий и хлеба
- •1.Теоретический разбор материала.
- •2. Практическая работа студентов (50 мин)
- •3. Оформление и проверка протоколов.
- •И вкусовых товаров
- •1.Теоретический разбор материала.
- •2.Практическая работа студентов.
- •3. Оформление и проверка протоколов.
- •1.Теоретический разбор материала.
- •2.Практическая работа студентов.
- •Коэффициент буферности, град.
- •3. Оформление и проверка протоколов.
- •1.Теоретический разбор материала (30 мин).
- •2.Практическая работа студентов.
- •Показатели свежести говяжьего мяса
- •Флюоресценция отдельных видов мяса и разных тканей
- •3.Оформление и проверка протоколов.
2. Приготовление препаратов фиксированных клеток
Фиксированнымисчитают клетки микроорганизмов, в которых прерваны жизненные процессы, но полностью сохранена тонкая структура. Для получения фиксированных препаратов важно правильно подготовить предметные стекла. Они должны быть чистыми и тщательно обезжиренными. Для этого стекла, бывшие в употреблении, выдерживают 1-2 часа в хромовой смеси (в 1 л воды вносят 50 г бихромата калия и 100 г технической серной кислоты), после чего ополаскивают теплой водой и спиртом. Можно также кипятить стекла в течение 15 мин. в растворе соды или мыльной воды. Для проверки чистоты стекла на его поверхность наносят каплю воды. При достаточном обезжиривании капля растекается равномерно и не собирается в выпуклые, медленно высыхающие пузырьки. Берут стекла пинцетом или аккуратно за грани, так как пальцы оставляют на поверхности жирные пятна.
Приготовление фиксированных препаратов ведут в следующей последовательности:
На середину чистого обезжиренного предметного стекла стерильной петлей наносят небольшую каплю воды. В нее вносят исследуемый материал, отобранный по методике, описанной в разделе 1. Полученную суспензию равномерно распределяют по поверхности стекла тонким слоем таким образом, чтобы препарат распределился на площади примерно 2-3 см2.
Полученный мазок высушивают при комнатной температуре на воздухе.
Производят фиксацию мазка. Для этого стекло с высохшим мазком проводят 3-4 раза над пламенем горелки той стороной, где мазок отсутствует.
Цель фиксации:
умертвить клетки микроорганизмов и сделать их безопасными (что особенно важно при работе с патогенными микроорганизмами);
зафиксировать (закрепить) мазок на стекле (чтобы они не смывались при окрашивании);
улучшить окрашивание, поскольку мертвые клетки лучше адсорбируют на своей поверхности различные красители.
Приготовление фиксированных препаратов из естественных мест обитания микроорганизмов проводится так же, как и из чистых культур. Помимо термической обработки, применяют также фиксацию химическими веществами: погружают предметное стекло с мазком в мензурку с 96 %-ным этанолом на 15-20 мин, с ацетоном на 5 мин, со смесью 96 % -ного этанола и 40%-ного формалина (соотношение 95:5) на 2 мин. и др.
3.Окраска фиксированных препаратов микроорганизмов простым методом
Фиксированные препараты нельзя рассмотреть под микроскопом, так как они являются бесцветными и пропускают световые лучи. Поэтому их окрашивают, используя простые или сложные методы. При окрашивании фиксированных мазков простыми методами используют один краситель (фуксин, краска Муромцева, генцианвиолет, метиленовая синь и др.). Последовательность окрашивания мазка простыми методами следующая:
На фиксированный препарат наносят несколько капель красителя таким образом, чтобы он покрывал всю поверхность мазка и выдерживают в течение определенного времени. Так, при окраске фуксином на мазок наносят несколько капель красителя и выдерживают его на мазке 2-3 мин.
Краску смывают с мазка слабой струей до бесцветной смывной воды. При этом стекло держат в наклонном положении над лотком.
Мазок подсушивают фильтровальной бумагой, которую осторожно прикладывают к стеклу, и досушивают на воздухе.
На окрашенный мазок наносят каплю иммерсионного масла и рассматривают препарат с объективом х90 или х100.
Задание 3. Схематически изобразить морфологическую структуру бактериальной клетки:
Задание 4. По памяти зарисовать и подписать основные шаровидные формы бактерий (микрококки, диплококки, тетракокки, сарцины, стрептококки, стафилококки).
Задание 5. По памяти зарисовать и подписать основные палочковидные формы бактерий.
Приложение к лабораторной работе №1
Задание 6. Зарисовать и подписать расположение жгутиков у бактерий (монотрихи, лофотрихи, амфитрихи, перитрихи).
|
Монотрихи – бактерии с 1 полярно расположенным жгутиком |
|
Лофотрихи – бактерии, на одном конце которых имеется пучок жгутиков |
|
Амфитрихи – бактерии, имеющие пучки жгутиков на обоих полюсах бактериальной клетки |
|
Перитрихи – бактерии, жгутики которых расположены по всей поверхности бактериальной клетки, то есть перитрихеально |
Приложение к лабораторной работе №1
Задание 7. Зарисовать и подписать виды расположения спор в теле микроорганизма.
|
Терминальное расположение спор. Спора располоагается на полюсе бактерии, и тогда она приобретает форму барабанной палочки.
|
|
Центральное расположение спор. Если споры крупные и располагаются в центре клетки, то палочка может приобретать веретенообразную форму |
|
Субтерминальное расположение спор. Спора располагается на конце палочки, и тогда она приобретает форму булавы. |
Лабораторная работа №3-4
Тема: Морфологические признаки дрожЖей и микроскопических грибов. влияние окружающей среды на микроорганизмы. Стерилизация и дезинфекция.
Цель: Изучить основные признаки дрожжей и микроскопических грибов. Приготовление живых препаратов дрожжей и грибов. Ознакомиться с влиянием окружающей среды на микроорганизмы, изучить методы и способы стерилизации и дезинфекции.
Оборудование, материалы: Микроскоп; термостат; сухожаровый шкаф; препаровальные иглы и бактериологические петли; предметные и покровные стекла; фильтровальная бумага; спиртовка; лоток с рельсами для предметных стекол; разделочные доски, лопатки, обработанные с применением растворов хлорсодержащих препаратов; раствор йодисто-калиевого крахмала; метиленовая синь, пипетки; культуры грибов родов Mucor, Aspergillus, Penicillium, Alternaria; чистая культура дрожжей Saccharomyces cerevisiae.
ХОД ЗАНЯТИЯ: