Добавил:
Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

Физиология роста микроорганизмов. Учебное пособие для студентов специальности 050102 – «Биология» высших учебных заведений

.pdf
Скачиваний:
0
Добавлен:
07.09.2026
Размер:
1 Мб
Скачать
☆
11
веществ. Вещества не растворимые в воде, белки, не могут быть использованы клеткой. Белки могут проникнуть в клетку только после расщепления на более простые, это происходит с помощью экзоферментов микробов.
Таким образом, при осмотическом проникновении питательных веществ в клетку, движущей силой служит разность осмотических давлений между средой и клеткой. Такой пассивный перенос веществ не требует затраты энергии и протекает до выравнивания концентрации с наружным раствором.
Поступившие в клетку вещества включаются в реакцию пластического и энергетического обмена, концентрация некоторых из них будет ниже, чем в среде, и поступление данных веществ возможно до полного исчерпания их из субстрата.
Если микроорганизм попадает в субстрат, осмотическое давление которого выше, чем в клетке, то цитоплазма отдает воду во внешнюю среду. Питательные вещества в клетку не поступают, содержимое клетки уменьшается в объеме и протопласт отстает от клеточной оболочки. Это явление называетсяплазмолизомклетки. При плазмолизе протоплазма клетки теряет воду, сокращается и отходит от клеточной оболочки. Плазмолиз, вызванный состоянием внутренней среды клетки, называется спонтанным плазмолизом. Такой плазмолиз наблюдается у Грам+ и Грам- бактерий.
Если поместить живую клетку в питательную среду с низким осмотическим давлением, чем давление протоплазмы, то клетка постепенно поглощает питательные вещества из среды и после некоторого периода адаптации, в частности к осмотическому давлению, начинает расти. Осмотическое давление в клетках быстро повышается и в первые часы активного роста стоит на высоком уровне. В течение этого периода происходит падение осмотического давление. Такое падение свидетельствует о проникновении в клетку питательных веществ. В дальнейшем происходит падение осмотического давления в клетке сначала быстро, а затем медленное, при одновременном соответствующем повышении давления среды.
Слабый и непродолжительный плазмолиз не убивает клетку, но внезапный и сильный плазмолиз действует на неё губительно, возможно в силу физического нарушения её организации. При помещении клеток в среду с осмотическим давлением, значительно превышающим давление в протоплазме, некоторые из клеток
12
погибают, другие приспосабливаются к таким условиям и, наконец, начинают расти, хотя при росте на подобной среде клетки не всегда имеют типичную морфологию.
Если осмотическое давление среды значительно ниже, чем в клетке, то клетка может разбухнуть, а иногда лопнуть. Такое явление называется плазмоптизом. Плазмоптиз клетки– явление обратное плазмолизу, когда вследствие высокой разности осмотических давлений цитоплазма переполняется водой и приводит к разрыву клеточной оболочки. В некоторых случаях плазмоптиз происходит при пребывании клетки в среде, которая сначала имела осмотическое давление, превышающее давление в клетке. Это явление наблюдается, например, при росте кишечной палочки на бульоне с глюкозой или на агаре с глюкозой в присутствии MgSO4. Если произвести на такие среды пересев из обычной агаровой или бульонной культуры, то клетки обычно подвергаются плазмолизу и многие из них погибают, но некоторые выживают и растут, образуя новые клетки, которые обычно бывают утолщены в средней части и сужаются к тупым концам. Эти клетки иногда частично и полностью разбухают, образуются гигантские формы, называемые фигурами плазмоптиза. Такие клетки неспособны к дальнейшему размножению при пребывании на той же среде, они продолжают увеличиваться в размерах и наконец лопаются.
Бактерии сильно варьируют по способности переносить крайние для них величины осмотического давления и по приспособляемости к резким изменениям. Существуют бактерии, которые выживают и даже растут на обыкновенной воде, морской воде и в воде соленых озёр. Нередко встречаются бактерии, которые могут расти на искусственных средах, содержащих до 15% NaClили до 50% сахарозы. Способность бактерий к росту на средах с крайними значениями осмотического давления обуславливается адаптацией.
Необходимо всегда учитывать возможность летального действия внезапного изменения осмотического давления при разведении дистиллированной водой популяции клеток, растущих на среде с высоким осмотическим давлением. Клетки при этом могут подвергнуться плазмоптизу и лопнуть или сначала разбухнуть, потерять способность к размножению и в конце концов лопнуть. Второй путь поступления веществ в клетку - активный. Путем переноса их особыми, локализованными в цитоплазматической
13
мембране веществами ферментной природы. Эти переносчики, называемые пермеазами, обладают субстратной специфичностью. Каждый из них транспортирует только определенное вещество. На внешней стороне цитоплазматической мембраны переносчик адсорбирует вещество, вступает с ним во временную связь и отдает на внутренней стороне ее транспортируемое вещество в цитоплазму.
2.2. Электрический заряд на поверхности клетки
Известно, что бактериальная клетка движется в электрическом поле (электрофорез) и что её поверхность, подобно коллоидным частицам, несёт на себе электрический заряд. Этот заряд в нормальной клетке является отрицательным. Согласно теории Гельмгольца, поверхность, несущая на себе отрицательный заряд, притягивает из среды слой катионов, в результате чего клетка оказывается окруженной двумя электрическими слоями, называемыми двойным электрическим слоем или диффузным двойным слоем. Внутренний слой связан с поверхностью клетки, а наружный принадлежит среде.
Согласно концепции диффузного двойного слоя: поверхностный заряд притягивает не один слой ионов, а диффузную атмосферу.
Тема 3. Питание бактерий
Под питанием понимают процессы поступления и выведения питательных веществ в клетку и из клетки. Питание в первую очередь обеспечивает размножение и метаболизм клетки.
Питательные вещества, необходимые для развития микроорганизмов, можно разделить в соответствии с функциями, которые они выполняют, на две большие группы. В первую группу входят соединения, окисляемые или расщепляемые организмами с выделением энергии, необходимой для их роста. В качестве источника энергии в среды обычно вносят глюкозу.
Химический состав и концентрация вещества, служащих источником энергии, зависит от индивидуальных свойств культивируемых микроорганизмов.
Ко второй группе относятся вещества, которые служат «предшественниками» или «строительными блоками», используемыми организмами для синтеза различных компонентов протоплазмы. Эти вещества, в отличие от входящих в первую группу,
14
всегда присутствуют в протоплазме клетки в качестве её составных частей в свободной или связанной форме. Встречаются вещества, которые можно отнести к обеим группам. Например, аминокислоты служат для некоторых микроорганизмов исходным материалом для синтеза белка и вместе с тем источником энергии. Аналогично обстоит дело с веществами типа глюкозы, которая используется главным образом в качестве источника энергии, но служит также основным материалом при синтезе ряда углеродсодержащих компонентов клетки.
Среди необходимых питательных веществ выделяют органогены – это восемь химических элементов, концентрация которых в бактериальной клетке превосходит 10—4 моль. К ним относят углерод, кислород, водород, азот, фосфор, калий, магний, кальций.
Кроме органогенов, необходимы микроэлементы. Они обеспечивают активность ферментов. Это цинк, марганец, молибден, кобальт, медь, никель, вольфрам, натрий, хлор.
Для бактерий характерно многообразие источников получения питательных веществ.
В зависимости от источника получения углерода бактерии делят на:
1) аутотрофы (используют неорганические вещества – СО2);
2) гетеротрофы;
3) метатрофы (используют органические вещества неживой
природы);
4) паратрофы (используют органические вещества живой
природы).
Азотное питание
Источники азота – элемента, необходимого для синтеза белков, нуклеиновых кислот. Паразиты развиваются за счет органических азотосодержащих веществ.
В зависимости от того, какими источниками азота пользуются микроорганизмы их подразделяют на 2 группы:
1.Аминоавтотрофные микроорганизмы, синтезирующие белковые вещества за счет минеральных источников азота или простейших форм органического азота типа мочевины.
2.Аминогетеротрофные микроорганизмы способные синтезировать ряд аминокислот из простейших источников азота, но неспособные
15
самостоятельно синтезировать какую-нибудь одну аминокислоту. Аминотрофные микроорганизмы при использовании азота из ряда минеральных источников предварительно переводят его в форму аммиака, а затем используют для синтеза аминокислот.
Усвоение микроорганизмами минеральных элементов.
Потребность микроорганизмов в минеральных элементах невелика, но без минеральных элементов рост микроорганизмов невозможен.
Сера входит в состав белковых веществ, и встречаются только в восстановленном состоянии в виде групп - SH- и -S-S-. Универсальным источником серы для большинства микроорганизмов служат сернокислые соли и используются при синтезе аминокислот.
Фосфор входит в состав органических соединений протоплазмы. В отличие от серы, фосфор встречается в составе органических веществ живой клетки только в окисленном состоянии - P2O5.
Соединения фосфора используются в живых клетках в качестве аккумуляторов энергии. Наилучшим источником фосфора является соли ортофосфорной кислоты.
Магнийвходит в состав хлорофилла у зеленых и пурпурных серобактерий, является активатором ряда ферментов, образуя с ферментными белками комплексные соединения. Много соединений магния обнаружено в пленках грибов, выросших на нейтральных средах. Источниками магния являются сернокислые и другие соли магния.
Кальций участвует в процессах синтеза. Источником кальция служат водорастворимые соли кальция.
Процессы питания должны обеспечивать энергетические потребности бактериальной клетки. По источникам энергии микроорганизмы делят на:
1) фототрофы (способны использовать солнечную энергию);
2) хемотрофы (получают энергию за счет окислительно-
восстановительных реакций);
3) хемолитотрофы (используют неорганические соединения);
4) хемоорганотрофы (используют органические вещества).
Факторами роста бактерий являются витамины, аминокислоты, пуриновые и пиримидиновые основания, присутствие которых ускоряет рост.
Среди бактерий выделяют:
16
1) прототрофы (способны сами синтезировать необходимые
вещества из низкоорганизованных);
2) ауксотрофы (являются мутантами прототрофов, потерявшими
гены; ответственны за синтез некоторых веществ – витаминов, аминокислот, поэтому нуждаются в этих веществах в готовом виде).
Микроорганизмы ассимилируют питательные вещества в виде небольших молекул, поэтому белки, полисахариды и другие биополимеры могут служить источниками питания только после расщепления их экзоферментами до более простых соединений.
Метаболиты и ионы поступают в микробную клетку различными путями.
Пути поступления метаболитов и ионов в микробную клетку.
1.Пассивный транспорт (без энергетических затрат):
1)простая диффузия;
2)облегченная диффузия (по градиенту концентрации, с
помощью белков-переносчиков).
2.Активный транспорт (с затратой энергии, против градиента
концентрации; при этом происходит взаимодействие субстрата с белком-переносчиком на поверхности цитоплазматической мембраны).
Встречаются модифицированные варианты активного транспорта – перенос химических групп. В роли белков-переносчиков выступают фосфори-лированные ферменты, поэтому субстрат переносится в фосфорилированной форме. Такой перенос химической группы называется транслокацией.
Автотрофные организмы сами обеспечивают свои потребности в веществах, необходимых для питания и роста. Это относится к органическим питательным веществам, автотрофность микроорганизмов надо понимать в том смысле, что они могут синтезировать разнообразные органические составные части протоплазмы исключительно из содержащихся в среде простых неорганических веществ – воды, минеральных соединений и углекислоты, служащей единственным источником углерода.
Гетеротрофные неспособны использовать в качестве единственного источника углерода углекислоту, для их питания обязательно требуются органические формы углерода.
Некоторые организмы обладают способностью как к автотрофному, так и к гетеротрофному образу жизни. Это прежде
17
относится к некоторым бактериям, называемым факультативными автотрофами.
Процесс превращения автотрофными организмами углекислоты в органические вещества клеток связан с ее восстановлением, поскольку все органические соединения клеток в большей и меньшей мере восстановлены.
Так как автотрофные микроорганизмы способны образовывать органические вещества из неорганических, то они играют важную роль, обеспечивая потребности гетеротрофов в исходных питательных веществах. Все вещества, необходимые для питания животных и человека, получаются в результате жизнедеятельности автотрофов, и в первую очередь организмов, способных к фотосинтезу. Автотрофы синтезируют органические вещества, а гетеротрофы подвергают их дальнейшему превращению. В процессе такой переработки часть углерода органических веществ всегда выделяется в виде СО2, вновь доступной для ассимиляции автотрофами.
К хемоавтотрофам относятся организмы, получающие энергию для ассимиляции СО2 за счет окисления простых восстановленных неорганических веществ. Эта группа организмов, в свою очередь, подразделяется далее в зависимости главным образом от того, какие неорганические вещества подвергаются окислению.
Кфотоавтотрофам относятся организмы, которые вследствие наличия в них хлорофилла способны поглощать для ассимиляции углекислоты лучистую энергию, что и составляет сущность фотосинтеза. Кфотоавтотрофам относятся высшие зеленые растения, водоросли, в том числе диатомовые, некоторые простейшие и особая группа бактерий.
Облигатных хемоавтотрофов можно рассматривать как совершенно своеобразную форму жизни, поскольку неизвестны никакие другие организмы, которые могли бы жить в среде, содержащей только неорганические вещества; окислять специфическое органическое вещество для получения энергии; образовывать клеточное вещество из углерода, углекислоты и минеральных солей; быть лишены способности использовать какие­либо иные вещества в качестве источника энергии или углерода.
Серные бактерии. Эта группа бактерий включает небольшое число морфологических типов. Обеспечение автотрофного
18
существования всех этих бактерий возможно за счет получения энергии от окисления ряда восстановленных соединений серы. Первичное деление серных бактерий обычно проводится по морфологическим признакам, а дальнейшая классификация – на основе физиологического поведения бактерий в отношении использования серы в обмене. Известны две большие морфологические группы хемоавтотрофных серных бактерий: к одной из них принадлежат организмы, отличающиеся очень длинными и широкими нитчатыми формами клеток; вторая группа представлена бактериями, имеющими вид типичных коротких палочек, очень сходных между собой. Можно условно наметить и третью группу серных бактерий, объединяемые общим свойством – способностью окислять соединения серы, но неспособные расти исключительно за счет энергии этого окисления, т.е. представляющие собой типичные гетеротрофы.
Нитчатые бактерии. Бактерии этой группы отличаются очень длинными, гибкими нитчатыми формами клеток. Такие серные бактерии можно выделить из осадка сточных вод, если их аэрировать в течение нескольких дней.
Короткие палочки. К этой группе бактерий принадлежат небольшие грам-отрицательные, не образующие спор палочковидные бактерии, способные использовать энергию, освобождающуюся в результате окисления серы и ее соединений. По своей морфологии они фактически неотличимы друг от друга и относятся к роду Thiobacillus. По поведению этих бактерий в отношении соединений серы их можно разделить на четыре отдельных вида. Классификация этих видов следующая:
I.Аэробы
А. строго автотрофные организмы
1. Оптимальная реакция среды для роста близка к нейтральным
значениям рН – Thiobacillusthioparus.
2. Оптимальная реакция среды для роста при значениях рН 2,0 –
3,5 Thiobacillusthiooxidans.
Б. Факультативные автотрофные организмы –
Thiobacillusnovellus.
II. Анаэробные в присутствии в среде нитрата – Thiobacillusdenitrificans.
19
Нитрифицирующие бактерии. Пять из нитрифицирующих бактерий характеризуются способностью окислять аммоний до нитрита.
В биохимическом отношении все эти бактерии сходны. Остальные 2 рода бактерий способны к окислению нитрита до нитрата. Все эти организмы ассимилируют углекислоту за счет энергии, получаемой в результате процессов окисления, все они являются облигатными хемоавтотрофами.
Процесс нитрификации приводит к созданию основных питательных веществ растений – нитратов, которые образуется из аммония. Аммоний Nitrosomonas получает в результате жизнедеятельности гетеротрофных бактерий, в частности протеолитических форм, которые действуют на растительный и животный белок и, в конечном счете, дезаминируют аминокислоты с выделением аммония. Кроме того, в анаэробных условиях происходит выделения аммония в результате деятельности денитрифицирующих бактерий. Нитрификация протекает настолько интенсивно, что во время наполеоновских войн французы получали нитрат для пороха из компоста с конским навозом; после некоторого периода нитрификациив тонких слоях навоза нитрат из компоста вымывался водой и затем выделялся из нее высушиванием.
Зеленые пигменты фототрофных растений. Хлорофилл можно экстрагировать из пурпурных бактерий метиленовым или этиленовым спиртом. Экстракты хлорофилла обладают характерной красной флуоресценцией и имеют типичный для этого пигмента спектр поглощения с одним отличием, а именно наличием отсутствующего у хлорофилла из растений дополнительного максимума поглощения в инфракрасной области спектра. В живой клетке хлорофилл находится в соединении с белками. Возможно, что хлорофилл и каратиноиды соединяются с одними и теми же белками. Этот пигментно-белковый комплекс был выделен из клеток и назван фотосинтином. Хлорофилл пурпурных бактерий был назван бактериохлорофиллом, это пигмент был признан истинным хлорофиллом, очень сходным, но все же не идентичным хлорофиллу a и b зеленых растений. От последнего он отличается наличием ацетильной группы вместо винильной. Все пурпурные бактерии содержат один и тот бактериохлорофилл, тогда как зеленые бактерии имеют другой хлорофилл.
20
Красные и желтые пигменты. Обработка воздушно-сухих клеток пурпурных бактерий бисульфидом углерода или хлороформом дает возможность экстрагировать из них ярко окрашенные вещества, представляющие собой каратиноидные пигменты.
Известно, что у зеленых растений существует тесная связь между каратиноидами и хлорофиллом. При помощи хромотографии из пурпурных бактерий удалось выделить в чистом кристаллическом виде ряд каратиноидов. Например, из клеток Rhodospirillumrubrumбыл выделен пурпурный каратиноидный пигмент спириллоксантин, а из культур Rhodovibrio – очень близкий к нему родовиоласцин.
3.1. Различия в потребностях питания у разных видов
бактерий
Различные группы и виды бактерий сильно отличаются друг от друга по потребностям в питании. С одной стороны, существуют микроорганизмы, подобные автотрофному Thiobacillusthiooxidans, который развивается в чисто минеральной среде и синтезирует все сложные ингредиенты своей протоплазмы из углекислоты, аммиака и других неорганических солей, используя энергию окисления серы до серной кислоты. С другой стороны, существуют микроорганизмы, подобные молочно-кислым бактериям, которые нуждаются в полном наборе готовых витаминов, аминокислот, пуриновых оснований и других сложных соединений и получают энергию за счет диссимиляции ограниченного числа органических веществ, главным образом углеводов. Некоторые патогенные формы, как, например, Treponemapallidum, столь требовательные, что их не удается культивировать вне тела животного-хозяина, по-видимому, обладают ещё более сложными потребностями.
3.2. Различия в используемом источнике энергии
Источники энергии, используемые отдельными группами бактерий, весьма разнообразны. Некоторые формы, как, например, анаэробные пурпурные и зеленые серобактерии, содержат хлорофилл и способны к фотосинтезу, т.е. используют для синтеза энергию поглощенных световых лучей.
Другие, например, хемосинтезирующие микроорганизмы, получают для этой же цели энергию путем окисления одного или
Соседние файлы в предмете [НЕСОРТИРОВАННОЕ]