6.​ не выливать отходы в раковину, а собирать в специальные ёмкости; 7.​ при случайном разливе материала — немедленно сообщить

преподавателю; 8.​ после занятий привести в порядок рабочее место, сдать

инструменты, вымыть и обработать руки дезраствором.​

взятие и обработка патологического материала материал берут от больных, павших или вынужденно убитых

животных — как можно раньше после появления симптомов или в

течение 2–3 часов после смерти.

учитывают патогенез инфекции и тропизм вируса:

●​ у живых животных — кровь, моча, слюна, смывы, фекалии, везикулярная жидкость, слизь, корочки, выделения;

●​ у павших — органы с патологическими изменениями, лимфоузлы, головной и спинной мозг.

обычно берут 10–20 г материала (для бешенства — всю голову животного).

​

​ отбор проводят стерильными инструментами, материал помещают в стерильную посуду, консервируют для защиты вируса от

ферментов и внешних факторов.

весь материал должен быть этикетирован: на пробирки и флаконы

наклеивают надпись (вирус, дата, номер, пробы) и прилагают сопроводительную записку.

5.​Пути передачи вирусных инфекций.

1. воздушно-капельный путь

вирус передаётся при кашле, чихании, разговоре. поражаются в основном

органы дыхания.​

особенности:

●​ вирусы очень распространены и легко передаются; ●​ высокая восприимчивость населения → быстрые вспышки; ●​ часты осложнения бактериальными инфекциями;

●​ возможны хронические последствия; ●​ некоторые вирусы (герпес, аденовирусы) могут долго сохраняться в

организме.

примеры:​

грипп, парагрипп, аденовирусная и риновирусная инфекции, ветряная оспа, инфекционный мононуклеоз, респираторно-синцитиальная инфекция.

2. гематогенный путь

вирус попадает через кровь — при инъекциях, операциях, переливаниях, укусах, родах.​

особенности:

●​ вирус быстро достигает органов-мишеней; ●​ возможна передача от матери к ребёнку или через заражённые

инструменты.

примеры:​

вирусы гепатитов B, C, D, E, ВИЧ, вирус бешенства, вирус клещевого энцефалита.

3. алиментарный путь

заражение происходит через рот — с водой, пищей, грязными руками или предметами.​

особенности:

●​ чаще всего источник — загрязнённая вода; ●​ вирус проникает через слизистую ЖКТ.

примеры:​

вирусный гепатит А (болезнь Боткина), вирусы Коксаки, ЕСНО.

4. половой путь вирус передаётся при незащищённых половых контактах.​

особенности:

●​ распространён среди лиц молодого возраста; ●​ ряд инфекций может протекать хронически или приводить к раку.

примеры:​

ВИЧ (СПИД), гепатиты B, C, D, E, вирус простого герпеса, вирус

папилломы человека (кондиломы).

6.​Вирусы как биологические агенты. Источники вирусных инфекций.

Вирусы являются неклеточными инфекционными агентами, которые

паразитируют внутри живых клеток, используя их ресурсы для размножения. Они существуют на грани жизни, так как вне клетки неактивны, но внутри клетки имеют генетический материал, могут

эволюционировать и размножаться, но только внутри своих хозяев (от растений и животных до бактерий). Их называют облигатными внутриклеточными паразитами, и они играют важную роль в биосфере,

влияя на эволюцию и регулируя численность популяций.

Характеристики вирусов как биологических агентов Неклеточное строение: Вирусы не имеют клеточной структуры и

состоят из нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК) и белковой оболочки

(капсид).

Облигатные паразиты: Они не могут размножаться самостоятельно и нуждаются в живой клетке, которую заражают и используют её ресурсы для создания своих копий.

Две формы существования: Вирусы существуют в виде неактивных частиц (вирионов) вне клетки и в виде активных частиц внутри клетки.

Эволюция: Вирусы могут эволюционировать путём естественного отбора, что приводит к появлению новых штаммов и вирулентности.

Спектр действия: Вирусы поражают все типы живых организмов, включая растения, животных, грибы и бактерии (бактериофаги).

Разнообразие: Существуют как патогенные вирусы, вызывающие болезни у человека и животных (грипп, герпес, СПИД и др.), так и

безвредные или полезные вирусы, например, бактериофаги, которые используются в лечении инфекций.

7.​Методы вирусологической диагностики вирусных инфекций.

Источники вирусных инфекций — это зараженные люди,

животные или объекты окружающей среды (вода, почва, воздух), через которые вирусы попадают в организм человека. Основные пути передачи включают воздушно-капельный (при кашле, чихании), фекально-оральный (через грязные руки, пищу, воду) и контактный (через зараженные поверхности и при тесном контакте).

Пути передачи Воздушно-капельный: Вдыхание частиц слюны или мокроты,

выделяющихся при кашле, чихании или разговоре инфицированного человека.

Фекально-оральный: Попадание вируса в организм через грязные руки, пищу или воду. Характерен для кишечных инфекций.

Контактный:

○​ Бытовой: Прикосновение к зараженным поверхностям (дверным ручкам, мебели) с последующим контактом слизистых оболочек.

○​ Половой: Во время половых контактов (вагинального, орального или анального).

Гематогенный: Передача через кровь (например, при инъекциях, переливании крови, использовании общих шприцов).

Вертикальный: От инфицированной матери к ребенку во время

беременности или родов.

Трансмиссивный: Через укусы переносчиков, таких как

кровососущие насекомые (комары, клещи).

Пищевой: Употребление зараженных продуктов питания.

8.​Эволюция взглядов на природу и происхождение вирусов.

Взгляды на природу и происхождение вирусов эволюционировали от

представлений о них как о «жидких» формах жизни до признания их как паразитических генетических элементов, что породило три основные гипотезы: регрессивную (эволюция от свободноживущих организмов),

клеточную (происхождение из мобильных генетических элементов, вырвавшихся из-под контроля клетки) и доклеточную (эволюция из примитивных генетических структур). Позднее эти гипотезы были дополнены идеей о том, что вирусы, возможно, существовали до

появления клеточной жизни.

Основные гипотезы о происхождении вирусов

●​ Регрессивная гипотеза: Вирусы произошли от свободноживущих организмов, которые стали внутриклеточными паразитами и со временем утратили часть своих функций и систем энергообмена.

●​ Клеточная гипотеза: Вирусы произошли от фрагментов

генетического материала (ДНК или РНК), которые вырвались из-под

контроля клетки и приобрели способность к самостоятельному перемещению и репликации.

●​ Доклеточная гипотеза: Вирусы являются потомками древних генетических элементов, которые существовали до появления первых клеток. Эта гипотеза предполагает, что вирусы могли предшествовать клеточной жизни.

Эволюция взглядов Ранние представления: Изначально вирусы считались

инфекционными агентами, имеющими признаки жизни. Понимание их природы было ограничено их способностью вызывать болезни и размножаться.

Влияние открытия генома: После расшифровки геномов вирусов стало ясно, что их природа значительно отличается от клеток. Это привело к пересмотру классических теорий происхождения и эволюции.

Современный взгляд: Сейчас вирусы рассматриваются не как отдельные организмы, а как «мобильные генетические элементы», которые развиваются путем изменения своих геномов, взаимодействия с клетками-хозяевами и передачи генетического материала. В этом процессе вирусы играют важную роль, участвуя в эволюции жизни на Земле и создавая генетическое разнообразие.

9.​Элементарные тельца и тельца — внутриклеточные включения.​

Элементарные тельца — это внеклеточная, инфекционная форма вируса, то есть вирион, способный проникать в клетку и начинать новый цикл инфекции.​

Они содержат нуклеиновую кислоту (ДНК или РНК), заключённую в белковый капсид, иногда — с суперкапсидом (оболочкой).

Характеристика:

●​ существуют вне клетки; ●​ метаболически неактивны (не размножаются);

●​ устойчивы во внешней среде; ●​ служат для передачи вируса от клетки к клетке или от организма к

организму.​

Примеры:

●​ у вируса гриппа — сферические или нитевидные вирионы с суперкапсидом;

●​ у аденовируса — икосаэдрические вирионы без оболочки; ●​ у вируса герпеса — крупные сферические вирионы с оболочкой; ●​ у вируса оспы (вакциния) — сложная кирпичевидная форма.​

Элементарное тельце = “готовая к заражению форма вируса”

Тельца-включения — это структуры, видимые в цитоплазме или ядре

заражённой клетки, образующиеся в результате накопления вирусных

частиц, белков или продуктов разрушения клеток.​ Они не всегда инфекционны, но имеют диагностическое значение —

помогают определить вирус по типу включения.

Бывают:

●​ внутриядерные — при ДНК-вирусах (герпес, аденовирус, оспа); ●​ цитоплазматические — при РНК-вирусах (бешенство, оспа,

парамиксовирусы); ●​ иногда смешанные (и в ядре, и в цитоплазме) — например, у

коревых вирусов.​

Примеры:

●​ Тельца Бабеша–Негри — цитоплазматические включения при бешенстве (в нейронах головного мозга);

●​ Тельца Гварниери — цитоплазматические включения при натуральной оспе и вакцинии;

●​ Тельца Каудри — внутриядерные включения при герпесвирусах; ●​ Тельца Коуэлла — при аденовирусной инфекции;​

Тельца Пашена — при оспе и паравакцинии; ●​ Тельца Вольф–Цинкера — при оспе.​

Тельца-включения = следы “жизни вируса” внутри клетки, видимые под микроскопом.

10.​ Методы приготовления препаратов для просмотра в электронном микроскопе.​

Для приготовления препаратов вирусов для электронной микроскопии используют методы негативного контрастирования,

прямого контрастирования и иммуноэлектронной микроскопии. Негативное контрастирование с помощью растворов, таких как фосфорно-вольфрамовая кислота, позволяет увидеть вирионы на темном

фоне, а прямое контрастирование включает напыление на образец тонкого слоя металла (золото, платина).

Иммуноэлектронная микроскопия использует антитела для

специфического обнаружения вирусов и последующего контрастирования.

центрифугированием.

○​ После этого проводят контрастирование и изучают препарат.

Специфическая адсорбция:

○​ Для облегчения поиска вирусов на поверхности подложки электронной микроскопической сетки создают специальные условия для специфической адсорбции (прилипания) вирусных частиц.

11.​ Химические компоненты вирусов. Свойства вирусных белков, их функции.

состав вирусов

вирусы состоят из белков и нуклеиновых кислот. у некоторых — также

липиды и углеводы.

белки вирусов.

происхождение ●​ вирусные — кодируются геномом вируса;

●​ клеточные — могут входить в состав вириона (например, актин, гистоны).​

локализация

1.​ структурные (VP) — входят в состав вирусной частицы;

2.​ неструктурные (NS) — ферменты, регуляторы, предшественники белков, не входят в состав ВЧ.​

свойства и функции белков

●​ обеспечивают самосборку капсида;

●​ защищают нуклеиновую кислоту; ●​ участвуют в репликации и транскрипции;

●​ обеспечивают узнавание и прикрепление к клетке; ●​ могут быть ферментами (полимеразы, протеиназы и др.).​

виды вирусных белков

вирусные ферменты

ферменты нуклеинового обмена:

●​ ДНК-зависимая ДНК-полимераза — синтез ДНК (оспа); ●​ ДНК-зависимая РНК-полимераза — синтез мРНК;

●​ РНК-зависимая РНК-полимераза — синтез РНК (репликаза, транскриптаза);

●​ обратная транскриптаза — синтез ДНК на матрице РНК (ретровирусы);

●​ хеликаза — расплетает ДНК/РНК; ●​ поли-А-полимераза, кэп-энзимы — модифицируют мРНК;

●​ рибонуклеаза Н — разрушает РНК в дуплексе с ДНК.​

ферменты белкового обмена:

●​ протеиназы — процессинг полипротеинов; ●​ протеинкиназы — фосфорилируют структурные белки;

●​ лизоцим, нейраминидаза — участвуют в проникновении вируса в клетку.​

липиды вирусов ●​ содержатся у оболочечных вирусов, обычно РНК-содержащих;

●​ имеют клеточное происхождение (мембраны ЭПР, ядра и др.); ●​ состав:

○​ фосфолипиды (50–60%),

○​ холестерин (20–30%); ●​ функция — формирование суперкапсида (вирусной оболочки).​

примеры: вирусы оспы, герпеса, гепатита B.

нуклеиновые кислоты вирусов

●​ содержат только один тип нуклеиновой кислоты: ДНК или РНК; ●​ это геном вируса, несущий наследственную информацию.​

распределение:

●​ ~20% вирусов — ДНК-содержащие;

●​ ~80% — РНК-содержащие.​

формы нуклеиновых кислот

12.​ Обнаружение вирусных антигенов в люминесцентном микроскопе.​

Люминесцентная (флюоресцентная) микроскопия

Сущность метода:​

основана на способности веществ светиться (люминесцировать) при облучении ультрафиолетовыми или сине-фиолетовыми лучами (300–460 нм).

Типы люминесценции:

●​ Первичная (собственная) — свечение природных веществ (хлорофилл, витамин B , алкалоиды, некоторые антибиотики).

●​ Вторичная (наведённая) — возникает после обработки объектов флюорохромами (специальными красителями).​

Преимущества:

●​ высокая чувствительность и специфичность; ●​ получение цветного изображения на тёмном фоне;

●​ возможность экспресс-диагностики (результат за 30 мин – 6 часов,

вместо 5–30 суток при биопробе).​

Методы люминесцентной микроскопии

1. Метод простого флюорохромирования (МФ)

●​ Окраска мазков флюорохромами: акридиновый оранжевый, акридиновый жёлтый, аурамин, флюоресцеин и др.

●​ Применяется для выявления вирусов, бактерий, живых клеток. ●​ Примеры свечения:

○​ ДНК-вирусы (аденовирусы) → зелёные гранулы в ядре.

○​ РНК-вирусы (грипп) → красные гранулы в цитоплазме.​

2. Методы флюоресцирующих антител (МФА, иммунофлюоресценция)​

основаны на реакции «антиген–антитело», где антитела мечены

флюорохромом.​

виды:

●​ прямой метод — меченая сыворотка наносится прямо на мазок с

антигеном → зелёное свечение при совпадении; ●​ непрямой метод — применяется немеченая специфическая

сыворотка, а затем флюоресцирующая антивидовая или антикомплементарная сыворотка.​

Оценка свечения:​

++++ — очень яркое, +++ — яркое, ++ — слабое, + — отсутствие свечения.​

реакцию считают положительной при 3–4 плюса.

Значение метода

●​ позволяет быстро и точно диагностировать инфекционные болезни (вирусные, бактериальные);

●​ используется для индикации возбудителей во внешней среде; ●​ по точности не уступает биопробе, но значительно быстрее;

●​ требует качественных флюорохромов и специфических флюоресцирующих сывороток.​

13.​ Условия, необходимые для репродукции вируса. ЦПД.

вирус не имеет собственного аппарата синтеза белков и энергетического обмена, поэтому для размножения ему необходима живая клетка-хозяин, обладающая всеми нужными ресурсами.

1. клетка-хозяин должна быть:

●​ живой и метаболически активной; ●​ восприимчивой — иметь на поверхности специфические

рецепторы, узнаваемые вирусом; ●​ пермиссивной — содержать нужные ферменты и субстраты для

репликации вирусного генома и синтеза вирусных белков.​

этапы репродукции вирусов и их условия

цитопатическое действие вирусов (цпд)

цпд — это морфологические изменения клеток, вызванные репликацией вируса.

основные типы цпд:

1.​ дегенерация клеток — округление, вакуолизация, гибель;

2.​ образование многоядерных гигантских клеток (симпластов); 3.​ очаги клеточной пролиферации, где клетки располагаются в

несколько слоёв.​

вирусные включения

включения — это скопления вирусных белков или нуклеиновых кислот в заражённой клетке.​ они бывают:

●​ цитоплазматические (например, тельца Гварниери — оспа; тельца Бабеша-Негри — бешенство);

●​ ядерные (тельца Каудри — герпес, цитомегаловирус, аденовирус); ●​ смешанные (обнаруживаются при некоторых РНК-вирусах).

окрашивание: выявляют в мазках по Романовскому–Гимзе; различают

эозинофильные и базофильные включения.

форма включений строго специфична для вида вируса​

(например, тельца Бабеша-Негри — овальные, до 20 мкм; тельца Гварниери — округлые или серповидные).

симпласты и синцитии симпласты — гигантские многоядерные клетки (например, клетки

Цанка при герпесе); синцитии — крупные конгломераты цитоплазмы с множеством

ядер, образующиеся из-за слияния клеточных мембран под действием

вирусных гликопротеинов (характерны для парамиксовирусов)

14.​ Особенности противовирусного иммунитета.​

противовирусный иммунитет — это сложная система защиты

организма от вирусов, которая объединяет врождённые и приобретённые механизмы. она работает на разных этапах заражения: от

момента проникновения вируса в организм до уничтожения заражённых клеток.

1. естественная видовая резистентность

некоторые виды животных изначально не восприимчивы к определённым вирусам — просто потому, что их клетки не подходят вирусу для размножения (например, вирус коровьей оспы не заражает птиц).​ эта защита основана на генетических особенностях — вирус просто не может распознать «свои» рецепторы на клетках другого вида.

2. неспецифические механизмы защиты (врождённый иммунитет)

это первая линия обороны, срабатывающая при любом заражении.

барьеры: кожа и слизистые оболочки. если вирус их преодолел, включаются следующие механизмы:

●​ интерферон — особый белок, который выделяют заражённые

клетки, чтобы предупредить соседей.​

он «включает» в них защитные гены: одни ферменты подавляют синтез вирусных белков, другие разрушают вирусную РНК.​ также интерферон усиливает активность макрофагов и естественных киллеров (ЕК-клеток).

●​ макрофаги и ЕК-клетки — уничтожают заражённые клетки.​ ЕК-клетки появляются уже через 1–2 дня после заражения и способны убивать поражённые клетки с помощью перфоринов (делают дырки в мембране) и гранзимов (запускают апоптоз — программируемую смерть клетки).​ при этом одна клетка-киллер может поочерёдно уничтожить несколько заражённых клеток.​

3. специфический приобретённый иммунитет

он формируется после болезни или вакцинации и обеспечивает долговременную защиту.

участвуют:

●​ В-лимфоциты, которые создают антитела (IgG, IgM, IgA, IgE);

●​ Т-лимфоциты — хелперы (помогают другим клеткам иммунитета) и киллеры (уничтожают заражённые вирусом клетки).​

антитела нейтрализуют вирусы во внеклеточном пространстве: ●​ блокируют прикрепление к клеткам;

●​ мешают проникновению и «раздеванию» вируса; ●​ активируют комплемент, повреждая оболочку вируса;

●​ помогают ЕК-клеткам распознать заражённые клетки

(антителозависимая цитотоксичность).​

Т-киллеры уничтожают клетки, внутри которых вирус уже размножается, с помощью тех же перфоринов и гранзимов.

таким образом, иммунная система не только «ловит» вирусные частицы,

но и ликвидирует все клетки-фабрики, где они производятся.

как вирусы избегают иммунитета.

вирусы — мастера маскировки. у них есть целый арсенал трюков:

●​ антигенная изменчивость — изменяют свои поверхностные белки

(у вирусов гриппа это «дрейф» и «шифт», у ВИЧ — постоянная мутация антигенов), из-за чего антитела перестают их узнавать; ●​ удаление вирусных антигенов с мембраны клетки (например,

герпесвирусы); ●​ подавление молекул ГКГС (главного комплекса

гистосовместимости), чтобы иммунные клетки не могли распознать заражённые;

●​ вирусные “ловушки” для цитокинов — белки, связывающие и нейтрализующие сигналы иммунитета;

●​ подавление действия интерферонов — вирусные РНК или белки мешают защитным ферментам работать;

●​ влияние на макрофаги — заставляют их выделять вещества,

тормозящие иммунный ответ.​

​ Они не специфичны для конкретного вируса, но создают фон защиты организма.

Основные факторы и их значение 1. Температура тела (лихорадка):

●​ повышенная температура тормозит размножение вирусов, ●​ активирует фагоцитоз и продукцию интерферонов, ●​ усиливает активность лимфоцитов.​

умеренная лихорадка = естественный антивирусный механизм.

2. Гормональный фон:

●​ глюкокортикоиды (стрессовые гормоны) подавляют иммунитет; ●​ половые гормоны влияют на чувствительность к вирусам (например,

эстрогены повышают устойчивость, андрогены — снижают).​

3. Питание и обмен веществ:

●​ полноценное питание поддерживает синтез антител и интерферонов;

●​ дефицит белка, витаминов A, C, E, D и цинка → снижает антивирусную защиту.​

4. Нервная система и стресс:

●​ хронический стресс ослабляет иммунитет (через кортизол); ●​ положительные эмоции и достаточный сон повышают уровень

интерферонов и активность NK-клеток.​

5. Возраст и физиологическое состояние:

●​ у новорождённых — слабая продукция интерферонов, но есть пассивный иммунитет (антитела матери);

●​ у пожилых — снижена активность Т-лимфоцитов и фагоцитов;

●​ у беременных — физиологическое снижение иммунной активности.​

6. Температурные и климатические условия:

●​ переохлаждение снижает местную защиту слизистых → вирусам проще проникнуть;

●​ солнечный свет (УФ) способствует синтезу витамина D →

поддерживает иммунитет.​

17.​ Интерферон как клеточный фактор противовирусной защиты.​

Интерфероны (ИФН) — это белки, вырабатываемые клетками организма в ответ на вирусную инфекцию.​ ​ Они не уничтожают вирус напрямую, но останавливают его

размножение и активируют иммунные клетки.

Основные типы интерферонов:

Механизм действия интерферона:

1 заражённая клетка распознаёт вирусную РНК или ДНК → начинает синтезировать интерферон;​ 2 интерферон выделяется наружу и связывается с рецепторами соседних клеток;​

3 в этих клетках активируются защитные ферменты: ●​ эндонуклеаза — разрушает вирусную РНК;

●​ протеинкиназа — блокирует синтез вирусных белков; 4 соседние клетки становятся резистентными к вирусу (невосприимчивыми).​

Иммунорегулирующая роль:

●​ усиливает активность NK-клеток и макрофагов;

●​ стимулирует антиген-презентацию (повышает экспрессию MHC I и

II);

●​ регулирует баланс между Т-хелперами и цитотоксическими клетками.​

Биологическое значение:

●​ обеспечивает раннюю неспецифическую защиту при вирусных инфекциях;

●​ участвует в формировании врождённого иммунитета;

●​ используется в терапии (например, интерферон-α при гепатите B и C, герпесе, папилломавирусе).​

Интерферон — белковый сигнал тревоги, делает соседние клетки “невидимыми” для вируса и включает иммунитет.

18.​ Гуморальные факторы противовирусного иммунитета.​

Гуморальные факторы — это растворимые компоненты крови и межклеточной жидкости, которые обеспечивают защиту от вирусов во внеклеточной среде.​ ​ Главная их цель — нейтрализовать вирусы до проникновения в клетку.

Основные гуморальные факторы:

1. Антитела (иммуноглобулины, Ig):

●​ вырабатываются плазматическими клетками (В-лимфоцитами) после контакта с вирусом;

●​ связываются с вирусными антигенами → вирус теряет способность прикрепляться к клетке.​

главные эффекты антител:

●​ нейтрализация вируса — блокировка рецепторов на его капсиде или оболочке;

●​ опсонизация — облегчение захвата вируса макрофагами; ●​ активация комплемента → разрушение вирусной оболочки;

●​ антителозависимая цитотоксичность (ADCC) — NK-клетки убивают инфицированные клетки, к которым присоединились антитела.​

Типы иммуноглобулинов:

Класс Роль

IgM появляются первыми, нейтрализуют вирусы в крови;

IgG обеспечивают длительный иммунитет, переходят через плаценту;

IgA защищают слизистые (дыхательные, кишечные пути);

IgE, IgD играют вспомогательную роль.

2. Система комплемента:

●​ комплекс белков плазмы, активирующихся при взаимодействии с антителами;

●​ образует мембранно-атакующий комплекс (MAC) → разрушает оболочку вируса или инфицированной клетки;

●​ усиливает воспаление и хемотаксис иммунных клеток.​

3. Интерфероны:

●​ тоже относятся к гуморальным факторам (поскольку выделяются в

жидкую среду); ●​ блокируют размножение вирусов и активируют иммунные клетки.​

4. Лизоцим и другие ферменты:

●​ разрушают оболочку некоторых вирусов и ослабляют их способность

кадгезии.​

5.Цитокины (интерлейкины, фактор некроза опухоли):

●​ усиливают взаимодействие между клетками иммунитета; ●​ регулируют выработку антител и активность Т-лимфоцитов.​

Гуморальная защита — это «жидкая армия» организма: антитела,

комплемент, интерфероны, ферменты и цитокины работают вместе, чтобы связать, нейтрализовать и уничтожить вирусы во внеклеточной среде.

19.​ Количественное выражение интенсивности эпизоотологического процесса при вирусных заболеваниях.​

Интенсивность эпизоотологического процесса — это степень распространения и скорость развития вирусной инфекции в популяции животных. Её выражают в количественных показателях, которые позволяют оценить эпизоотическую ситуацию.

Основные количественные показатели:

1.Заболеваемость (морбидность)​

—количество заболевших животных за определённый период.​

Пример: если из 100 животных заболело 20 → заболеваемость 20%.

2. Смертность (летальность):

●​ Смертность — процент погибших от данного заболевания среди всего поголовья.

●​ Летальность — процент погибших среди заболевших.​

3.Уровень распространённости (экстенсивность заражения):

—показывает, насколько широко вирус циркулирует в популяции (включая бессимптомных носителей).

4.Интенсивность заражения (интенсивность инвазии):​

—количество вирусных частиц или титр антител у инфицированных животных;​

—оценивается лабораторно (например, в ТЦД — 50% инфекционная доза ткани, или в титрах антител).

5.Скорость распространения эпизоотии:​

—характеризует, как быстро увеличивается число случаев за

определённое время (например, количество новых случаев в день/неделю).

6.Индекс заразности (репродуктивное число R ):​

—показывает, сколько животных в среднем заражает одно больное животное.​

Если R > 1 → эпизоотия распространяется;​ если R < 1 → процесс затухает.

Для количественной оценки эпизоотического процесса используют: заболеваемость, смертность, летальность, распространённость, интенсивность заражения, скорость и индекс заразности.

Все эти показатели помогают оценить тяжесть и динамику вирусного заболевания и спланировать меры борьбы.

20.​ Характер взаимоотношения вируса с организмом (острые, хронические, персистентные, медленные инфекции).​

вирусные инфекции отличаются по длительности течения, активности вируса и реакции организма.​

в зависимости от этого выделяют острые, хронические, персистентные

и медленные формы.

1.Острые вирусные инфекции Определение:​

быстрое развитие болезни с коротким инкубационным периодом, выраженными клиническими признаками и последующим выздоровлением или смертью.

Особенности:

●​ вирус быстро размножается, ●​ иммунный ответ активный,

●​ вирус затем полностью устраняется из организма.

Примеры:​

грипп, чума собак, бешенство, ящур, инфекционный ринотрахеит КРС, вирусный гепатит у человека.

2.Хронические вирусные инфекции

Определение:​

длительно текущие инфекции, при которых вирус долгое время сохраняется в организме и периодически вызывает обострения.

Особенности:

●​ вирус продолжает размножаться, но с низкой интенсивностью; ●​ вирус и иммунная система сосуществуют;

●​ возможны фазы ремиссий и обострений.

Примеры:​

вирусный гепатит B и C, персистирующая инфекция вируса лейкемии

кошек, герпесвирусные инфекции.

3.Персистентные (латентные) инфекции Определение:​

вирус длительно сохраняется в организме в неактивной форме (без размножения), не вызывая клинических проявлений.​ при ослаблении иммунитета — реактивация вируса.

Особенности:

●​ вирусная ДНК (или провирус) интегрирована в геном клетки; ●​ вирус может существовать годами или всю жизнь; ●​ организм — носитель вируса.

Примеры:​

вирус герпеса, цитомегаловирус, вирус Эпштейна–Барр, ретровирусы (ВИЧ в латентной фазе).

4.Медленные вирусные инфекции

Определение:​

инфекции с очень длительным инкубационным периодом (месяцы–годы) и

21.​ Индикация вирусов на куриных эмбрионах.​

методы основаны на наблюдении за репродукцией вируса в развивающемся эмбрионе, а также на его влиянии на хорионаллантоисную

оболочку (ХАО) и жидкости эмбриона.

1 заражение и подготовка эмбрионов

●​ зараженные респираторные/кожные/аллантоисные ткани эмбрионов (ркэ) инкубируют при 35–37°с в течение 48–72 ч;

●​ после инкубации:

○​ вскрывают эмбрион, ○​ отсасывают амниотическую и аллантоисную жидкости,

○​ извлекают оболочки и эмбрион в стерильные чашки петри.​

2 визуальное наблюдение репродукции вируса

●​ некоторые вирусы (натуральная оспа, осповакцина, простой герпес)

вызывают бляшки на ХАО:

○​ беловатые, 1–2 мм в диаметре,

○​ количество бляшек соответствует числу инфекционных частиц.​

3 реакция гемагглютинации (РГА)

принцип: гемагглютинины на поверхности вируса склеивают эритроциты определенного вида (животных, птиц, человека).

●​ не иммунологический метод — не требует антител. ●​ проведение:

○​ готовят двукратные разведения вирусной жидкости (0,5 мл) на физиологическом растворе,

○​ добавляют 0,5 мл 1% взвеси эритроцитов, ○​ контроль: ФР + эритроциты.

●​ учет: через 30–60 мин при комнатной температуре, 37°с или 4°с.

○​ положительная реакция: осадок в виде «зонтика» с

фестончатыми краями; ○​ отрицательная: компактный осадок («пуговка»).

●​ гемагглютинационный титр: максимальное разведение жидкости, вызывающее агглютинацию = 1 ГЕ (гемагглютинирующая единица вируса).

●​ важно: некоторые бактерии (стафилококки, эшерихии, сальмонеллы, шигеллы, холерный вибрион) тоже могут вызывать агглютинацию — учитывать при интерпретации.​

4 определение титра на ХАО

●​ кусочки ХАО 11–12-дневного эмбриона помещают в лунки стерильных полистироловых пластин;

●​ добавляют вирусную жидкость в десятикратных разведениях; ●​ накрывают фольгой, инкубируют при 35–37°с 24–72 ч;

●​ после инкубации:​

○​ удаляют скорлупу,

○​ добавляют 0,5% взвесь куриных эритроцитов;

○​ по эффекту гемагглютинации определяют наличие репродукции вируса.​

куриные эмбрионы — чувствительная система для индикации вирусов,

позволяющая:

●​ визуально выявлять бляшки,​ использовать РГА для количественной оценки вирусной активности,

●​ определять титр вируса на ХАО с высокой чувствительностью.

22.​ Количественное выражение вирусов на куриных эмбрионах.​

это оценка количества активного вируса, которое может размножаться в курином эмбрионе. Используется для контроля вирусной активности и титрования вакцин.

Основные методы:

1.​ Метод конечных доз (EID )

●​ определяют, какая доза вируса вызывает заболевание или гибель у половины заражённых эмбрионов;

●​ позволяет оценить силу вируса и сравнивать разные штаммы.​

2.​ Введение вируса в аллантоисную полость или желточный мешок

●​ наблюдают за цитопатическим эффектом или гибелью эмбриона; ●​ количество вируса оценивается по тому, сколько эмбрионов

поражено.​

3.​ Метод гемагглютинации

●​ для вирусов, способных склеивать эритроциты; ●​ измеряют, при каком разведении вирус ещё вызывает склеивание

клеток, что отражает его количество.​

4.​ Иммунологические методы

●​ вирус определяют по антигенам в тканях эмбриона с помощью специфических антител;

●​ дают точное представление о количестве инфицированных клеток.​

Итог: количественное выражение вирусов на куриных эмбрионах показывает, насколько активно вирус размножается и сколько его нужно, чтобы заразить эмбрион.

23.​ Учет результатов при работе и использование в вирусологической практике.​

Учет результатов в вирусологии включает сбор и анализ данных о наличии

и характеристиках вирусов с использованием различных методов, таких как ИФА, ПЦР, культивирование и серотипирование. Полученные

результаты используются для диагностики инфекций, идентификации

патогенов и в дальнейших исследованиях, включая разработку вакцин и терапевтических средств.

Этапы учета и использования результатов

Лабораторные исследования включают:

○​ Иммуноферментный анализ (ИФА): Выявление антигенов вируса или антител к нему в биологических образцах.

○​ Полимеразная цепная реакция (ПЦР): Обнаружение генетического материала вируса (ДНК или РНК).

○​ Культивирование: Выращивание вируса в подходящих условиях (куриный эмбрион, культура клеток, лабораторные животные) для получения большего количества материала для дальнейших исследований.

○​ Титрование: Определение концентрации вируса в образце. ○​ Идентификация: Серотипирование, что позволяет точно

определить вид вируса.

Анализ результатов: