ФГБОУ ВО «Самарский государственный медицинский университет» Минздрава России

Кафедра медицинской микробиологии и иммунологии Дисциплина: «Основы микробиологии»

Занятие 6 «Микробиологический метод исследования. Методы определения чувствительности к антибиотикам. Современные нормативные документы. Фенотипы резистентности и способы их определения»

Определение чувствительности к антимикробным препаратам

•Основной целью определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам (АМП) является прогнозирование их эффективности при лечении инфекций у конкретных пациентов.

•Определение чувствительности также проводят с целью эпидемиологического наблюдения за распространением резистентности среди микроорганизмов и в процессе изучения новых препаратов.

Терминологические особенности

Наряду с наиболее корректным термином «антимикробный препарат» международные и российские нормативные документы допускают использование термина «антибиотик», к которым относит вещества природного, полусинтетического или синтетического происхождения, проявляющие избирательную активностью в отношении бактерий, и потенциально применимые для лечения инфекционных болезней.

Существует несколько методов определения чувствительности к антибактериальными препаратам:

Диско-диффузионный метод

(ДДМ)

•ДДМ является одним из первых методов определения чувствительности к антибиотикам и до настоящего времени остается наиболее распространенным в практических бактериологических лабораториях.

•Метод может применяться для исследования большинства бактериальных возбудителей, в том числе и наиболее распространенных бактерий со сложными питательными потребностями.

•Метод является универсальным для широкого круга антибиотиков и не требует использования специального оборудования.

Диско-диффузионный метод

Основан на способности антибиотика из бумажного диска диффундировать в агар и ингибировать рост бактерий в месте диффузии, наглядным выражением которого является зона задержки роста вокруг диска с препаратом.

Требования:

•Специальная питательная среда – агар Мюллера- Хинтона

•Стандартная толщина агара в чашке (20 мл на чашке, толщина около 4 мм)

•Стандартное количество микробов на чашке (мутность 0,5 по МакФарланду)

•Стандартная концентрация антибиотика в диске

Постановка чувствительности

с помощью ДДМ

1. Взять несколько морфологически сходных колоний со среды

2. Суспендировать в физрастворе с помощью петли или ватного тампона

Постановка чувствительности

с помощью ДДМ

3. Довести мутность инокулюма до 0,5 МакФарланд (МФ) добавляя физраствор или кульутру

4. Смочить ватный тампон в инокулюме и нанести на чашку в 3 направлениях (метод газона) в течение 15 минут

Постановка чувствительности

с помощью ДДМ

5. Аккуратно нанести необходимое количество дисков не ближе 3 см к друг другу, чтобы не перекрывать зоны

6. Чашки отправляют в термостат на 18-20 часов при температуре 37 градусов перевернутые вверх дном