Выявление свойства кислотоустойчивости
Гидрофобность, с одной стороны делает клетку устойчивой к действию различных химических веществ (такие бактерии называются кислотоустойчивыми), с другой стороны тормозит обмен клетки с окружающей средой и замедляет ее рост.
Такие бактерии могут длительно сохраняться в окружающей среде и менее чувствительны к различным неблагоприятным факторам внешней среды и защитным факторам организма.
Выявление свойства кислотоустойчивости
Примером таких бактерий служит возбудитель туберкулеза
– Mycobacterium tuberculosis.
Кислотоустойчивость микобактерий является важным диагностическим признаком, для ее определения пользуются окраской по методу Циля-Нильсена.
Данный метод позволяет отличить кислотоустойчивые виды бактерий от некислотоустойчивых.
Алгоритм окраски по методы Циля- Нильсена
1.Фиксированный мазок окрашивают карболовым фуксином Циля (основной краситель) при нагревании 3-5 мин.
2.Обесцвечивают раствором серной кислоты (дифференцирующее вещество) в течение 1-2 мин.
3.Промывают водой.
4.Докрашивают 3-5 мин метиленовым синим (дополнительный краситель).
Клеточная стенка кислотоустойчивых бактерий отличается высоким содержанием липидов. Они с трудом окрашиваются, но затем удерживают основной краситель при обесцвечивании кислотой. Некислотоустойчивые бактерии легко окрашиваются, а затем легко обесцвечиваются кислотой и окрашиваются дополнительным красителем.
Кислотоустойчивые бактерии при окраске по Цилю-Нильсену
В результате этой окраски кислотоустойчивые микроорганизмы окрашиваются в рубиново-красный цвет, некислотоустойчивые – в синий.
Знаете ли вы…
Знаете ли вы, что не только патогенные микроорганизмы обладают свойством кислотоустойчивости. К примеру, непатогенная
Mycobacterium smegmatis, в норме живущая на наружных половых органах у мужчин, при микроскопическом исследовании выглядит точно также, как и возбудитель туберкулеза.
Выявление зерен (гранул) волютина
Многие микроорганизмы способны образовывать внутри цитоплазмы гранулы полифосфатов, являющиеся для бактерии временным резервом питательных веществ.
Например, возбудитель дифтерии – Corynebacterium diphteriae – образует скопления этих гранул на полюсах клетки, эту особенность можно использовать как дополнительный признак для идентификации указанных бактерий.
Для выявления гранул волютина можно использовать метод окраски по Нейссеру.
Алгоритм окраски по методу Нейссера
1.Фиксированный мазок окрашивают уксуснокислой синькой в течение 2-3 мин, затем сливают краску.
2.Промывают водой и наливают раствор Люголя на 20-30 сек.
3.Не промывая водой, окрашивают везувином 1-3 мин.
4.Промывают водой, высушивают.
5.Мазок окрашивается уксуснокислым метиленовым синим 2-3 минуты, при этом происходит химическое взаимодействие красителя и волютина.
Зерна волютина окрашиваются в темно-синий цвет. При промывке водой сама клетка обесцвечивается и затем в течение 1 мин докрашивается везувином в желто-коричневый цвет.
Коринебактерии при окраске по методу Нейссера
В результате этой окраски сами бактериальные клетки окрашиваются в нежный желто-коричневый цвет, зерна волютина – в темно-синий, почти черный цвет.
Выявление спор у бактерий
Споры являются крайне устойчивыми к окружающей среде, они не содержат свободной воды и имеют липидную оболочку, позволяющую им быть более кислотоустойчивыми, по сравнению с вегетативными клетками.
Для выявления спор используется окраска по методу Ожешко.
Различие в восприятии окраски основано на свойстве
кислотоустойчивости спор.
Алгоритм окраски по методу Ожешко
1.На высушенный нефиксированный препарат наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1-2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.
2.Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.
3.Далее мазок окрашивают по методу Циля-Нильсена.
Оболочка споры плохо воспринимает красители. После нанесения раствора соляной кислоты оболочка споры разрыхляется и начинает воспринимать окраску.