8. Хроматографические методы определения сг. (?)

(?) Хроматоспектрофотометрический метод. Основан на сочетании метода хроматографии, позволяющего разделять целевые сердечные гликозиды, и метода спектрофотометрии или фотоколориметрии, позволяющего измерять оптическую плотность окрашенного комплекса.

9. Биологическая стандартизация ЛРС, содержащего СГ. Количественную оценку качества сырья, содержащего кардиотонические гликозиды, проводят методом биологической стандартизации.

Метод основан на способности кардиотонических гликозидов вызывать в токсических дозах остановку сердца животных в стадию систолы. В качестве подопытных животных используют лягушек. Чувствительность животных к кардиотоническим гликозидам определяют в сравнении со стандартными образцами: индивидуальными веществами или очищенными экстрактами, которые вырабатывают в специальных научно-исследовательских институтах.

Активность лекарственного сырья и препаратов кардиотонических гликозидов выражают в единицах действия (ЕД): ЛЕД - «лягушачьи» ЕД. 1 ЛЕД соответствует наименьшей дозе стандартного препарата, вызывающей остановку сердца стандартной лягушки (самец травяной лягушки массой 28-33 г). Сырье и препараты видов наперстянок, ландыша и горицвета весеннего должны вызывать остановку сердца лягушки в течение 1 часа, a видов строфанта и желтушника седеющего - в течение 2 часов.

В нормативной документации на лекарственное сырье, содержащее кардиотонические гликозиды, обязательно в разделе «Числовые показатели» указывается количество ЕД в 1 г сырья.

Недостатками метода биологической стандартизации являются его трудоемкость, высокая стоимость, большая ошибка опыта (до 25 %). Поэтому нормативнаядокументация на некоторые виды сырья (листья наперстянки шерстистой – Folia Digitalis lanatae) и препараты кардиотонических гликозидов требует определять их количественное содержание физико-химическими (хроматофотоэлектроколориметрическим или хроматоспектрофотометрическим) методами. Они основаны на предварительном хроматографическом разделении кардиотонических гликозидов с последующим фотоэлектроколориметрическим или спектрофотометрическим определением.

10. Физико-химические методы количественного определения сг.

Недостатками метода биологической стандартизации являются его трудоемкость, высокая стоимость, большая ошибка опыта (до 25 %). Поэтому нормативная документация на некоторые виды сырья (листья наперстянки шерстистой – Folia Digitalis lanatae) и препараты кардиотонических гликозидов требует определять их количественное содержание физико-химическими (хроматофотоэлектроколориметрическим или хроматоспектрофотометрическим) методами. Они основаны на предварительном хроматографическом разделении кардиотонических гликозидов с последующим фотоэлектроколориметрическим или спектрофотометрическим определением.

Среди других методов, которые используются для количественной оценки содержания сердечных гликозидов являются:

1. Фотоколориметрический метод. Основан на образовании различных окрашенных комплексов (см. реакции на лактонное кольцо). Например, в случае использования пикриновой кислоты в щелочной среде (реакция Балье) в анализируемом растворе примерно через 30 мин развивается оранжевая окраска, и этот окрашенный комплекс имеет максимум поглощения в области 490-500 нм. При использовании ксантгидролового реактива (10 мг ксантгидрола растворяют в 99 мл ледяной уксусной кислоты и добавляют 1 мл концентрированной HCI) образуется комплекс малинового цвета с максимумом 528-532 нм (см. методику количественного определения в НД «Листья наперстянки шерстистой»).

2. Хроматоспектрофотометрический метод. Основан на сочетании метода хроматографии, позволяющего разделять целевые сердечные гликозиды, и метода спектрофотометрии или фотоколориметрии, позволяющего измерять оптическую плотность окрашенного комплекса.

3. Флуориметрический метод. Основан на способности сердечных гликозндов флуоресцировать поддействием сильных кислот или окислителей после кратковременного облучения УФ-светом.

4. Полярографический метод. В основе данного метода лежит способность сердечных гликозндов восстанавливаться на ртутно-капельном электроде при потенциалах 1.9-2,8 В с образованием диффузных токов, волны которых пропорциональны концентрации сердечных гликозндов.

5. Денситометрический метод. Данному методу предшествует хроматографическое разделение компонентов, интенсивность окрашенных или флуоресцирующих пятен которых сканируется денситометром.