33. Антитоксические сыворотки, получение, единицы измерения и применение. Иммуноглобулины общего и направленного действия.
Антитоксические сыворотки — это препараты, содержащие готовые антитела против микробных токсинов. Их задача: быстро нейтрализовать токсины (например, при дифтерии, столбняке, ботулизме).
Получают их из крови животных (чаще лошадей), которых специально иммунизируют.
Как получают антитоксические сыворотки?
1 Лошадей многократно прививают возрастающими дозами анатоксина (обезвреженного токсина), а затем токсином. 2 Из крови лошадей выделяют сыворотку.
3 Сыворотку очищают, концентрируют, проверяют на:
—безвредность;
—отсутствие пирогенов (чтобы не вызывала лихорадку);
—активность.
Как измеряют активность сыворотки?
Активность измеряют в международных антитоксических единицах (ME) — по стандартам ВОЗ. 1 ME — это минимальное количество сыворотки, которое нейтрализует определенную смертельную дозу токсина.
Методы титрования (определения активности):
-Метод Эрлиха — опыт на животных (мышах, морских свинках):
—смешивают сыворотку с токсином, вводят животным;
—смотрят, при каком разведении сыворотки погибает 50 % животных → определяют титр.
-Метод Рамона (реакция флоккуляции) — в пробирке при смешивании токсина и антитоксина появляются хлопья или помутнение → это значит, что сыворотка активна.
Иммуноглобулины общего и направленного действия
Иммуноглобулины человеческие получают из донорской крови (обычно методом Кона —
фракционирование этанолом при низких температурах).
Их преимущество:
—не вызывают реакций (нереактогенны);
—дольше циркулируют в крови (30–40 дней).
-Иммуноглобулин общего действия (нормальный)
—получают из плацентарной, абортной или донорской крови;
—содержит антитела против вирусов кори, гриппа, гепатита, полиомиелита и др.;
—применяют для профилактики кори, гепатита А, коклюша, менингококковой инфекции и др.
-Иммуноглобулины направленного действия
—получают от людей, переболевших определенной инфекцией (например, антистолбнячный
иммуноглобулин);
—применяют для специфической профилактики и лечения конкретной инфекции.
Применение антитоксических сывороток и иммуноглобулинов
-Лечение токсикоинфекций (дифтерия, столбняк, ботулизм).
-Профилактика и лечение вирусных и бактериальных инфекций (корь, коклюш, гепатит А и др.).
34. Реакция агглютинации. О- и Н- агглютинация. Пассивная гемагглютинация. Механизм, практическое применение.
Реакция агглютинации (РА) — это иммунная реакция, при которой антитела склеивают клетки или
частицы, несущие антигены на своей поверхности. Важные условия для протекания:
—антигены должны быть на поверхности корпускул (бактерий, эритроцитов, латекса);
—нужны специфические антитела (агглютинины);
—нужен раствор электролита (обычно физиологический раствор NaCl).
Результат: склеенные клетки образуют видимый осадок в виде хлопьев или зернистого материала.
РА применяют для:
- диагностики инфекционных заболеваний (определение возбудителя);
- определения антител в сыворотке крови больного;
-серотипирования бактерий.
Виды агглютинации 1 О-агглютинация
Реакция с O-антигеном (соматическим) бактерий.
O-антиген — это термостабильный полисахаридный антиген клеточной стенки.
-Осадок мелкозернистый, тонкий, почти пылевидный.
-Реакция развивается медленнее.
Пример: диагностика брюшного тифа, когда ищут O-антитела к Salmonella typhi. 2 Н-агглютинация
Реакция с Н-антигеном (жгутиковым). Н-антиген — белок жгутиков бактерий.
-Осадок крупнохлопчатый, большие комки.
-Реакция идет быстрее.
Пример: та же диагностика тифа, но определяют Н-антитела.
Как проводят реакцию агглютинации
-Ориентировочная (на стекле) Быстрая проба.
На стекло капают каплю сыворотки + каплю бактериальной взвеси → наблюдают хлопья.
Применяется для быстрой проверки предположения (например, для подбора диагностикума).
-Развёрнутая (в пробирках)
Делают серию разведений сыворотки (например, 1:20, 1:40, 1:80 и т.д.).
В каждую пробирку добавляют стандартное количество диагностикума (убитые бактерии с известными
антигенами).
Выдерживают при 37 °C → оценивают наличие осадка.
Определяют титр: максимальное разведение сыворотки, при котором ещё есть агглютинация. (на картинке вот например 1/160 вааау)
Пассивная гемагглютинация (РПГА, РНГА) - реакция, в которой вместо бактерий используют эритроциты (или латексные шарики), на которые заранее «посадили» антиген (или антитело).
Механизм:
—эритроциты с адсорбированными антигенами добавляют к сыворотке больного;
—если в сыворотке есть антитела → происходит склеивание эритроцитов → по дну планшета
образуется фестончатый осадок.
—если антител нет → эритроциты оседают в центр в виде ровной пуговки.
Применение:
—диагностика вирусных и бактериальных инфекций;
—определение титра антител.
35. Реакция преципитации. Механизм, практическое применение. Метод двойной диффузии в агаре по Оухтерлони. Иммуноэлектрофорез.
Реакция преципитации (РП) — это иммунная реакция, при которой растворимый антиген + антитело образуют нерастворимый комплекс, который выпадает в виде мутного осадка (помутнения).
//как я понял эта хуйня отличается от прошлой, тем что там просто клетки склеивали, здесь уже мы склеиваем токсины или какие то ферменты. То есть механизм один и тот же у нас все равно идет антиген антитело…
Для образования преципитата (осадок ептвоюмать) важно, чтобы антиген и антитело были в оптимальном (эквивалентном) соотношении. Если антигена или антитела слишком много → преципитат не образуется (нет правильных «сеточек» из иммунных комплексов).
Как это видно на практике?
Когда антиген и антитело встречаются в нужных количествах → на границе их встречи появляется белая мутная зона (линия, кольцо, полоса).
Основные методы постановки реакции преципитации 1 Кольцевая реакция преципитации (реакция в пробирке)
В узкую пробирку на дно заливают антитело (сыворотку).
Аккуратно наслаивают раствор антигена сверху.
На границе их соприкосновения образуется кольцо осадка.
Пример: диагностика сибирской язвы (реакция термопреципитации для выявления сибиреязвенного гаптена).
2 Двойная иммунодиффузия в агаре (по Оухтерлони)
Тонкий слой застывшего агара вырезают
лунки.
Водни лунки заливают антиген, в другие —
антитела.
Они диффундируют навстречу друг другу в
геле.
На месте их встречи образуется линия
преципитации.
Что можно увидеть?
Если антигены идентичны → линии сливаются. Если разные → линии пересекаются.
Если частично сходные → линии соединяются с изгибом
(спур).
Применение:
- сравнение антигенов;
- диагностика инфекций; - определение антигенного состава.
3 Радиальная иммунодиффузия
Антитела замешаны в агаре.
Вгеле делают лунки → заливают антиген в разных концентрациях.
Антиген диффундирует и вокруг лунки образуется кольцо
преципитации.
Диаметр кольца пропорционален концентрации антигена.
Применение:
-измерение уровня иммуноглобулинов в сыворотке;
-определение компонентов комплемента и др.
4 Иммуноэлектрофорез
Смесь антигенов помещают в лунку агара.
При электрофорезе антигены разделяются по заряду и размеру.
В канавку рядом вносят антитела.
Антигены и антитела диффундируют навстречу друг другу → появляются линии преципитации, каждая соответствует конкретному антигену.
Применение:
-анализ сложных смесей антигенов (например, белков сыворотки);
-диагностика аутоиммунных заболеваний, иммунодефицитов.
36. Реакция связывания комплемента, цель, ингредиенты, фазы реакции, механизм, учет.
Реакция связывания комплемента (РСК) - нужна, чтобы проверить, есть ли в сыворотке больного антитела против конкретного антигена (или наоборот — есть ли антиген).
//бля вот честно я нихуя не понял отличий… ну вот жпт сказал вот так: Агглютинация: видно комки клеток.
Преципитация: видно осадок, линию, кольцо.
РСК: сам комплекс не видим, мы судим по тому, что комплемент «занят» или «свободен» (по гемолизу).
ну то есть по сути в первом мы связываем клетки, во втором типа ферменты и токсины, а в третьем антиген антитело + комплемент… НАВЕРНОЕ
Ингредиенты РСК
1 Антиген (на что мы хотим найти антитела). 2 Сыворотка больного (она может содержать или не содержать специфические антитела).
3 Комплемент (обычно берут из сыворотки морской свинки). //их то за что…
4 Гемолитическая система — эритроциты барана + гемолитическая сыворотка (с антителами к этим
эритроцитам).
Фазы РСК
1 Первая фаза — связывание В пробирку добавляют антиген + сыворотку больного + комплемент.
Если есть антитела → образуется иммунный комплекс → комплемент связывается с ним (расходуется).
Если нет антител → иммунного комплекса нет → комплемент остается свободным. 2 Вторая фаза — индикация (учёт)
Добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана + антитела против них).
Если комплемент остался свободным → он разрушает эти эритроциты → происходит гемолиз
(разрушение эритроцитов) → реакция отрицательная (нет антител к искомому антигену).
Если комплемент был связан иммунным комплексом → гемолитическая система не разрушается →
гемолиза нет → реакция положительная (антитела есть).
Практическое применение РСК
-Диагностика инфекций (сифилис — реакция Вассермана, бруцеллёз, туляремия и др.).
-Определение антител к вирусам и бактериям.
Очень простое правило запоминания
-Гемолиз есть → антител нет (комплемент был свободен и разорвал эритроциты).
-Гемолиза нет → антитела есть (комплемент ушёл на иммунный комплекс и не досталось
эритроцитам).