35. Реакция преципитации. Механизм, практическое применение. Метод двойной диффузии в агаре по Оухтерлони. Иммуноэлектрофорез.
Реакция преципитации (РП) — это иммунная реакция, при которой растворимый антиген + антитело образуют нерастворимый комплекс, который выпадает в виде мутного осадка
(помутнения).
//как я понял эта хуйня отличается от прошлой, тем что там просто клетки склеивали, здесь уже мы склеиваем токсины или какие то ферменты. То есть механизм один и тот же у нас все равно идет антиген антитело…
Для образования преципитата (осадок ептвоюмать) важно, чтобы антиген и антитело были в оптимальном (эквивалентном) соотношении. Если антигена или антитела слишком много → преципитат не образуется (нет правильных «сеточек» из иммунных комплексов).
Как это видно на практике?
Когда антиген и антитело встречаются в нужных количествах → на границе их встречи появляется белая мутная зона (линия, кольцо, полоса).
Основные методы постановки реакции преципитации 1 Кольцевая реакция преципитации (реакция в пробирке)
В узкую пробирку на дно заливают антитело
(сыворотку).
Аккуратно наслаивают раствор антигена сверху. На границе их соприкосновения образуется кольцо осадка.
Пример: диагностика сибирской язвы (реакция термопреципитации для выявления сибиреязвенного гаптена).
2 Двойная иммунодиффузия в агаре (по Оухтерлони)
Тонкий слой застывшего агара вырезают лунки.
В одни лунки заливают антиген, в другие — антитела. Они диффундируют навстречу друг другу в геле.
На месте их встречи образуется линия преципитации.
Что можно увидеть?
Если антигены идентичны → линии сливаются.
Если разные → линии пересекаются. Если частично сходные → линии соединяются с изгибом (спур). Применение:
-сравнение антигенов;
-диагностика инфекций;
-определение антигенного состава.
3 Радиальная иммунодиффузия
Антитела замешаны в агаре.
В геле делают лунки → заливают антиген в разных концентрациях.
Антиген диффундирует и вокруг лунки образуется кольцо преципитации.
Диаметр кольца пропорционален концентрации антигена.
Применение:
-измерение уровня иммуноглобулинов в сыворотке;
-определение компонентов комплемента и др.
4 Иммуноэлектрофорез
Смесь антигенов помещают в лунку агара.
При электрофорезе антигены разделяются по заряду и размеру.
В канавку рядом вносят антитела.
Антигены и антитела диффундируют навстречу друг другу → появляются линии преципитации, каждая соответствует конкретному антигену.
Применение:
-анализ сложных смесей антигенов (например, белков
сыворотки);
-диагностика аутоиммунных заболеваний, иммунодефицитов.
36. Реакция связывания комплемента, цель, ингредиенты, фазы реакции, механизм, учет.
Реакция связывания комплемента (РСК) - нужна, чтобы проверить, есть ли в сыворотке больного антитела против конкретного антигена (или наоборот — есть ли антиген).
//бля вот честно я нихуя не понял отличий… ну вот жпт сказал вот так:
Агглютинация: видно комки клеток. Преципитация: видно осадок, линию, кольцо.
РСК: сам комплекс не видим, мы судим по тому, что комплемент «занят» или «свободен» (по гемолизу).
ну то есть по сути в первом мы связываем клетки, во втором типа ферменты и токсины, а в третьем антиген антитело + комплемент… НАВЕРНОЕ
Ингредиенты РСК
1 Антиген (на что мы хотим найти антитела). 2 Сыворотка больного (она может содержать или не содержать специфические антитела).
3 Комплемент (обычно берут из сыворотки морской свинки). //их то за что… 4 Гемолитическая система — эритроциты барана + гемолитическая сыворотка (с антителами к этим эритроцитам).
Фазы РСК
1 Первая фаза — связывание В пробирку добавляют антиген + сыворотку больного + комплемент.
Если есть антитела → образуется иммунный комплекс → комплемент связывается с ним (расходуется).
Если нет антител → иммунного комплекса нет → комплемент остается свободным.
2 Вторая фаза — индикация (учёт)
Добавляют гемолитическую систему (эритроциты барана + антитела против них).
Если комплемент остался свободным → он разрушает эти эритроциты → происходит гемолиз (разрушение эритроцитов) → реакция отрицательная (нет антител к искомому антигену).
Если комплемент был связан иммунным комплексом → гемолитическая система не разрушается → гемолиза нет → реакция положительная (антитела есть).
Практическое применение РСК
-Диагностика инфекций (сифилис — реакция Вассермана, бруцеллёз, туляремия и др.).
-Определение антител к вирусам и бактериям.
Очень простое правило запоминания
-Гемолиз есть → антител нет (комплемент был свободен и разорвал эритроциты).
-Гемолиза нет → антитела есть (комплемент ушёл на иммунный комплекс и не досталось эритроцитам).
37. Иммунофлюоресценция, прямой и непрямой методы. Цель постановки, значение для диагностики инфекционных заболеваний.
Иммунофлюоресценция (РИФ) - это метод, при котором используют антитела, меченные специальным веществом — флюорохромом(светящимся красителем). Эти антитела связываются с антигенами и в люминесцентном микроскопе в УФ-свете светятся, что видно наблюдателю.
Метод позволяет быстро обнаружить микроб или его антиген в материале — поэтому его называют экспресс-диагностикой.
Цель РИФ
-Прямо на месте определить, есть ли в образце возбудитель или его антиген.
-Иногда — найти антитела к возбудителю в сыворотке.
Применяется для диагностики инфекций: например, бешенство, туляремия, хламидиоз, микоплазмоз, вирусные инфекции.
1 Прямой РИФ
Используются антитела, уже меченные флюорохромом.
Эти антитела напрямую связываются с антигеном (например, с микробом).
Мазок смотрят в люминесцентный микроскоп → микробы светятся (обычно зелёной каймой по периферии).
Когда используют: когда нужно быстро найти сам антиген или микроб в мазке.
2 Непрямой РИФ
Сначала добавляют немеченые антитела к антигену (например, кроличьи антимикробные антитела).
Эти антитела связываются с микробами → затем добавляют антиглобулиновую сыворотку (антитела против первых антител), которая уже мечена флюорохромом. //ЧТО БЛЯДЬ… ну короче, мы не ищем легких путей… сначала мы добавляем АТ к микробу они обычные не светятся, а вот потом мы добавляем АТ а ЭТИМ СУКА АТ и они уже светятся… они не бесполезные они светятся…
В итоге светится комплекс: микроб + первые антитела + вторые антитела с флюорохромом.
Когда используют: если нужно повысить чувствительность метода (непрямой метод чувствительнее прямого). // как всегда логично…
Что видно под микроскопом?
-Если антиген есть → он светится (обычно зелёным светом в УФ-лучах).
-Если антигена нет → ничего не светится.
Значение РИФ в диагностике
-Быстрая диагностика инфекций (буквально за 1-2 часа).
-Точная идентификация микробов в мазках, биоптатах, тканях.
-Высокая чувствительность и специфичность.