2. Реакция нейтрализации вирусов. Применение для идентификации вирусов и для серологической диагностики инфекций. Варианты вирусной нейтрализации.

Реакция нейтрализации вируса основана на способности специфических вируснейтрализующих антител блокировать инфекционные, гемагглютинирующие, гемадсорбирующие, цитопатические, бляшкообразующие и др. свойства вирусов.

Она применяется в двух направлениях: 1) для идентификации вирусов; 2) для серодиагностики вирусных инфекций, т.е. для определения нарастания титра вируснейтрализующих антител в «парных» сыворотках. Компоненты: 1. Исследуемый вирус (при идентификации выделенною вируса) или исследуемая сыворотка (при серодиагностике инфекции). 2. Диагностическая (группе-, видо-, типоспецифическая) сыворотка (при идентификации вируса) или известный вирус — диагностикум (при серодиагностике). 3. Индикаторный объект: животные, куриные эмбрионы, культуры тканей или эритроциты.

Реакции нейтрализации т У!УО ставят в культурах клеток, куриных эмбрионах и на лабораторных животных.

Принцип. Смесью вирус (исследуемый или известный) + сыворотка (диагностическая или исследуемая), выдержанной в течение определенного времени, заражают культуру клеток, куриный эмбрион или лабораторное животное. При (+} реакции, т.е. при нейтрализации вируса антителами индикаторные объекты продолжают нормально существовать, а в контроле — гибель или характерные изменения.

Реакция нейтрализации — реакция торможения гемагглютинации (РТГА).

РТГА применяется: -для серотипирования вирусов; -для серодиагностики инфекций. Выделяют два способа постановки: - капельный способ на стекле (ориентировочная реакция), применяется для серо копирования вирусов; - развернутый в пробирках.

Механизм. У некоторых вирусов (например, гриппа) есть гемагглютинин, вызывающий агглютинацию эритроцитов различных животных, в зависимости от вида вируса. При наличии в сыворотке антител — антигемагглютининов наблюдаются инги-бирования активности вирусов. РТГА. Цель: серотипирование вируса гриппа А

Компоненты: 1. Исследуемый материал — аллантоисная жидкость куриного эмбриона, 2. Диагностические противогриппозные типоспецифиче-ские сыворотки,

3. 5 % взвесь куриных эритроцитов. 4. Физиологический раствор.

Реакция ставится на стекле капельным способом. На стекло наносят по 1 капле диагностических сывороток и исследуемого материала, перемешивают, затем добавляют 1 каплю взвеси эритроцитов. При положительной реакции наблюдается гомогенное покраснение, а при отрицательной выпадение хлопьев красного цвета (гемагглютинация).

СЕРОЛОГИЧЕСКИЙ МЕТОД.

1. Метод парных сывороток: выявление нарастания титра противовирусных антител

не менее, чем в 4 раза

Используют реакции нейтрализации: нейтрализующим действием в данном варианте

реакций будут обладать антитела сыворотки больного.

Титром сыворотки в данных

реакциях будет являться максимальное разведение сыворотки, при котором нейтрализуется

биологический эффект вируса (вирусного диагностикума – живого эталонного штамма

вируса):

• отсутствует агглютинация эритроцитов,

1.Агглютинация эритроцитов под действием вирусов

2.Отсутствие агглютинации (торможение) за счет блокирования

вирусных гемагглютининов антителами

• отсутствует ЦПД,

• цвет среды изменяется с красного на желтый (т.к. изменяется рН среды под

действием продуктов метаболизма неповрежденных клеток ткани) и пр.

2. Выявление иммуноглобулинов класса М (IgM):с помощью иммуноферментного

анализа