3. Бруцеллы, виды бруцелл, свойства. Экология, факторы патогенности, патогенез, иммунитет при бруцеллезе. Лабораторная диагностика, специфическая профилактика.

Таксономия: Возбудители бруцеллеза B.melitensis, B.abortus, B.suis, B.canis, B.ovis относятся к отделу Gracilicutes, роду Brucella.

Морфологические и тинкториальные свойства: Мелкие, грамотрицательные палочки овоидной формы. Не имеют спор, жгутиков, иногда образуют микрокапсулу.

Культуральные свойства: облигатные аэробы. B.abortus для своего роста нуждается в присутствии 5—10 % углекислого газа. Оптимальными для роста являются температура 37С. Требовательны к питательным средам и растут на специальных средах (печеночных, кровяной агар). Их особенностью является медленный (в течение 2 нед) рост. В жидких средах – равномерное помутнение с небольшим осадком. На плотных – мелкие, круглые гладкие голубые колонии. Диссоциация от S- к R-формам колоний.

Биохимическая активность: очень низкая; содержат каталазу и оксидазу, нитраты редуцируют в нитриты, цитраты не утилизируют, продуцируют Н2S.

Антигенная структура. O-антиген – соматический, и капсульный антигены. Две разновидности О-антигена — А(абортус) и М(мелитензис).Иногда обнаруживают К-антиген.

Факторы патогенности: Образуют эндотоксин, обладающий высокой инвазивной активностью. Продуцируют один из ферментов агрессии — гиалу-ронидазу. Их адгезивные свойства связаны с белками наружной мембраны.

Резистентность. Быстро погибают при кипячении, при действии дезинфицирующих веществ, устойчивы к низкой температуре: в замороженном мясе они сохраняются до 5 мес, в молочных продуктах — до 1,5 мес.

Эпидемиология. Зоонозная инфекция. Источник - крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, овцы, выделяющие B.melitensis. Люди более восприимчивы к этому виду возбудителя. Реже заражение происходит от коров (B.abortus) и свиней (B.suis). Больные люди не являются источником заболевания.

Патогенез. Проникают в организм через слизистые оболочки или поврежденную кожу, попадают сначала в регионарные лимфатические узлы, затем в кровь, разносятся по всему организму и внедряются в органы ретикулоэндотелиальной системы (печень, селезенку, костный мозг). Там они могут длительное время сохраняться и вновь попадать в кровь. При гибели освобождается эндотоксин, вызывающий интоксикацию.

Клиника: Инкубационный период составляет обычно 1—3 нед. Длительная лихорадка, озноб, потливость, боли в суставах, радикулиты.

Иммунитет: После перенесенного заболевания формируется непрочный иммунитет. Клеточно-гуморальный, нестерильный, относительный.

Микробиологическая диагностика: Микробиологическая диагностика обычно проводится путем серологических исследований (реакция Райта и Хеддлсона).

Бактериологическое исследование. Для получения гемокультуры кровь засевают в два флакона печеночного бульона. Один из них (для выделения культуры В. melitensis) инкубируют в обычных аэробных условиях, другой (для выделения первичной культуры В. abortus) —с СО2. В первых генерациях бруцеллы растут очень медленно. На агаре бруцеллы образуют бесцветные колонии, в бульоне — помутнение и слизистый осадок. В мазках, окрашенных по Граму, обнаруживаются мелкие грамотрицательные формы. Они неподвижны, спор не образуют, в определенных условиях появляется видимая капсула. Для быстрой идентификации бруцелл ставят реакцию агглютинации со специфическими агглютинирующими сыворотками на стекле и определяют чувствительность к специфическому фагу. Все виды бруцелл не ферментируют углеводы. Их дифференцируют по образованию H2S, чувствительности к СО2, действию анилиновых красителей (основной фуксин).

Серодиагностика. Реакция агглютинации Райта с бруцеллезным диагностикумом. Положительные результаты отмечаются спустя 1 нед. после начала заболевания и сохраняются у переболевших многие годы. Диагностический титр реакции 1:200. Для ускоренной серодиагностики применяется реакция агглютинации Хеддлсона, которая ставится с неразведенной сывороткой больного и концентрированным антигеном — диагностикумом, окрашенным метиленовым синим. При положительной реакции появляются хлопья синего цвета. Реакция положительна при наличии агглютинации на «++». Для серодиагностики используют РПГА, РИФ, РСК, метод определения неполных антител. В поздние периоды заболевания процент положительных серологических реакций (агглютинации, РПГА и РСК) начинает снижаться и большее диагностическое значение приобретают кожно-аллергическая проба и реакция Кумбса.

Биопроба. Применяется для выделения чистой культуры из материала, загрязненного посторонней микрофлорой. Исследуемый материал вводят морским свинкам подкожно в паховую область. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.

Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне).На предплечье внутрикожно вводят 0,1 мл бруцеллина. При наличии аллергии уже через 6 ч. могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность. Учет реакции производят через 24 ч. Реакция обладает высокой чувствительностью.

Лечение: Антибиотики широкого спектра действия. Специфическая иммунотерапия убитой лечебной бруцеллезной вакциной или бруцеллина (фильтрат бульонных культур В. melitensis, B.abortus, В.suis, убитых нагреванием . При острых формах – бруцеллезный иммуноглобулин.

Профилактика:Живая бруцеллезная вакцина получена штамма ВА-19А, полученную из В. abortus, создает перекрестный иммунитет против других видов бруцелл.

Бруцеллезный единый диагностикум. Взвесь убитых бруцелл, окрашенных метиленовым синим, применяется при серологической диагностике бруцеллеза постановкой реакции агглютинации Райта и Хеддлсона.

Накожная сухая живая бруцеллезная профилактическая вакцина. Взвесь вакцинного штамма. В. abortus применяется для профилактики бруцеллеза.

БРУЦЕЛЛЁЗ

Бруцеллёз - инфекционная болезнь, характеризующаяся длительным течением, поражением нервной и сердечнососудистой систем, а также костно-суставного аппарата. Возбудители бруцеллёза у человека: Brucella melitensis (3 биовара) Brucella abortus (9 биоваров) Brucella suis (4 биовара) Бруцеллы относят к группе аэробных грамотрицательных палочек и коккобактерий. Род с неясным систематическим положением. Бруцеллы – это мелкие грамотрицательные неподвижные палочки, спор и капсул не образуют, по типу дыхания микроаэрофиллы

Источником инфекции для человека являются больные животные.

Основные пути передачи возбудителя – контактный (при уходе за больными животными), пищевой (при употреблении заражённых продуктов). З

аболевание носит профессиональный характер – чаще болеют работники сельского хозяйства. Бруцеллы обладают выраженной инвазивной активностью и способны к внутриклеточному паразитированию, что обуславливает патогенез заболевания. В развитии инфекционного процесса участвуют гиалуронидаза, белок наружной мембраны и эндотоксин. Бруцеллы способны выживать и размножаться в фагоцитах за счёт ингибирования слияния фагосомы с лизосомами. Это способствует диссеминации бактерий и длительной их персистенции в организме. Заболевание характеризуется хроническим течением со сменой обострений и ремиссий, развитием гранулём в опорно-двигательной системе, нервной и половой системах, сенсибилизацией организма с развитием ГЗТ.

Микробиологические методы диагностики

• Серологический (основной): - реакция агглютинации Хеддельсона (качественный метод); - развёрнутая реакция агглютинации Райта (диагностический титр 1:100); - РНГА (диагностический титр (1:100); - Реакция Кумбса (для выявления неполных антител при хроническом бруцеллёзе); - ИФА (для выявления IgM – при остром бруцеллёзе и IgG – при хронической форме заболевания). Эти реакции могут быть положительными у лиц вакцинированных. Поэтому при постановке диагноза учитывают динамику нарастания титра антител, данные клиники и эпидемиологии.

• Бактериологический – бруцеллы, выделенные от больных людей, растут очень медленно, посевы культивируют при 37 °С в атмосфере углекислого газа до 30 суток;

• Аллергический – проба Бюрне с бруцеллином (фильтрат бульонной культуры бруцелл);

• Биологический – заражение белых мышей (выделение чистой культуры, РИФ);

• Генетический метод – ПЦР–диагностика, обнаружение генома бруцелл;

• Собственно-иммунный – ИФА и РНГА с моноклональными антителами для поиска бруцеллёзных антигенов в крови. Специфическая профилактика и лечение. Бруцеллёзная живая вакцина, бруцеллёзная лечебная вакцина; с лечебной целью назначают антибиотики.

БИЛЕТ 21

Основные методы исследования морфологии бактерий: световая микроскопия с иммерсионным объективом, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная. Микроскопический метод диагностики, его достоинства и недостатки.

Иммерсионная – используют масла(кедровое, терпеновое или синтетичсекое иммерсионное). Масляная система выравнивает показатели преломления цвета. Изучаются окрашенные объекты размером больше 0,2 мкм.

Люминесцентная (или флюоресцентная) микроскопия. Осно­вана на явлении фотолюминесценции.

Люминесценция — свечение веществ, возникающее после воз­действия на них каких-либо источников энергии: световых, элек­тронных лучей, ионизирующего излучения.

Первичная люминисценция - возникает без предварительного окрашивания объекта

Вторичная люминисценция – после окраски препаратов флюорохромами.

Преимущества: можно исследовать живых микроорганизмов и обнаружение их в исследуемом материале в небольших кол-вах вследствие высокой контрастности.

Темнопольная микроскопия.

В основе лежит принцип рассеивания цвета взвешенными частичами в темном поле при боковом освещении.(Эффект Тенделя)

Эффект достигается с помощью параболоид- или кардиоидконденсора, которые заменяют обычный конденсор в био­логическом микроскопе .

Изучаются неокрашенные подвижные микроорганизмы, видимые при боковом освещении в темном поле.

Фазово-контрастная микроскопия. Фазово-контрастное приспособление дает возможность увидеть в микроскоп прозрачные объекты. Они приобретают высокую контрастность изображения, которая может быть позитивной или негативной. Позитивным фазовым контрастом называют темное изображение объекта в светлом поле зрения, негативным — светлое изображение объек­та на темном фоне.

Для фазово-контрастной микроскопии используют обычный микроскоп и дополнительное фазово-контрастное устройство, а также специальные осветители.

Электронная микроскопия. Позволяет наблюдать объекты, размеры которых лежат за пределами разрешающей способно­сти светового микроскопа (менее 0,2 мкм). Электронный микроскоп применяется для изучения вирусов, тонкого строения различных микроорганизмов, макромолекулярных структур и других субмик­роскопических объектов.

Бактериоскопический (микроскопический) метод - совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторной культуре, патологическом материале или пробах из внешней среды с помощью микроскопии. Применяют для установления диагноза инфекционного заболевания или иного вызванного микробами процесса, а также при идентификации выделенной чистойкультуры. Метод бактериоскопического исследования приобретает особое значение, если микроб имеет морфологические и тинкториальные особенности или особую локализацию в тканях, клетках организма. Только при некоторых инфекциях для постановки диагноза достаточно морфологического исследования.

Для диагностики большинства инфекций микроскопия, как первый этап микробиологического исследования, имеет лишь вспомогательное, ориентировочное значение.

Ценность бактериоскопического метода состоит в простоте, доступности методик и быстроте получения результатов (30-60 минут и менее). Однако специфичность его в связи с близостью морфологии разных видов мала, а чувствительность ограничена -разрешающая способность метода составляет в среднем 100 000 клеток в мл.

Микроскопические методы заключаются в приготовлении микроскопических препаратов для микроскопирования (нативных или окрашенных простыми и сложными способами) из исследуемого материала и их микроскопирование с применениемразличных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная. электронная). В большинстве случаев результатымикроскопических исследований носят ориентировочный характер. Тем не менее, микроскопией материала можно определить некоторые морфологические признаки возбудителей (наличие ядер, жгутиков, внутриклеточных включений и т.д.), а также установить факт наличия или отсутствия микроорганизмов в присланных образцах