2. . Реакция преципитации в диагностике инфекций. Механизмы и методы постановки, практическое применение.

Реакция преципитации (РП)

• Осаждение растворенного Аг под действием Ат

• Общая поверхность Аг (площадь) очень большая – необходима высокая концентрация Ат – сыворотки не титруют (не разводят)!

• Титр сыворотки в РП – максимальное разведение Аг, при котором ещё наблюдается преципитация

• Варианты РП:

* кольцепреципитация (термопреципитация)

* преципитация в агаре

* преципитация в геле (радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез)

* реакция флоккуляции

1. Реакция кольцепреципитации

Образование кольца преципитации на разделе сред (диагностической сыворотки и раствора Аг) в преципитационной пробирке.

Сыворотка--- раствор Аг кольцо преципитации возникает в момент эквивалентного соотношения Аг и Ат

Термопреципитация (р-ция Асколи): исследуемый материал предварительно прогревают - получают раствор Аг

Область применения:

* видовая принадлежность белка (судебная медицина; подлинность пищевых продуктов и пр.)

* определение растворенного Аг возбудителя в патологическом материале

2. Преципитация в агаре

• Область применения: бактериологический метод диагностики – определение токсигенности бактерий

• Суть метода:

* на поверхность агара наносят фильтровальную бумагу, пропитанную диагностической сывороткой (антитоксической) Ат диффундируют в агар

* рядом сеют исследуемые микроорганизмы Аг (экзотоксин) диффундирует в агар

* в зоне образования комплексов Аг-Ат появляются полосы («усы») преципитации

3.Преципитация в геле

• Радиальная иммунодиффузия (Манчини,1965 г.):

Ат (диагностическую сыворотку) вносят в агарозный гель делают лунки и в них вносят исследуемый Аг (в разных количествах)

Аг диффундирует в гель, образуя кольца (преципитат) вокруг лунок сравнивают размеры колец с эталоном определяют количество Аг

• Область применения: определение белков биологических жидкостей; иммуноглобулинов; белков микроорганизмов

Иммуноэлектрофорез (Грабар, 1956г.):

Исследуемый материал (Аг) вносят в агарозный гель и «разгоняют» в электрическом поле

Делают «траншеи» и вносят в них диагностические Ат линии преципитации образуются вдоль «траншеи»

• Область применения: выявление белков биологических жидкостей; иммуноглобулинов; бактериальных белков

4. Реакция флоккуляции

• Образование помутнения и осадка в результате взаимодействия Аг - анатоксина (или токсина) с Ат - антитоксической сывороткой в течении нескольких десятков минут при их эквивалентном соотношении

• Не является диагностической!

• Область применения: титрование анатоксинов, токсинов и антитоксических сывороток

Все указанные реакции не идут в организме!

3. Стафилококки, классификация, факторы патогенности. Заболевания, вызываемые стафилококками, эпидемиология, микробиологическая диагностик, специфическая профилактика и терапия. Госпитальные штаммы.

Наиболее известны:

• Стафилококк золотистый (Staphylococcus aureus), как наиболее патогенный для человека. Назван по способности образовывать золотистый пигмент. Может вызывать у человека гнойные воспалительные процессы почти во всех органах и тканях.

• Стафилококк эпидермальный (Staphylococcus epidermidis) — часто встречается на коже и слизистых оболочках человека, может вызывать сепсис, эндокардит, конъюнктивит, гнойную инфекцию ран и гнойные инфекции мочевыводящих путей.

• Стафилококк сапрофитный (Staphylococcus saprophyticus) — может вызывать острый цистит и уретрит.

Таксономия: относятся к от­делуFirmicutes, семейству Мicrococcacae, родуStaphylococcus. К данному роду относятся 3 вида:S.aureus,S.epidermidisиS.saprophyticus.

Морфологические свойства:Все виды стафилококков представляют собой округлые клетки. В мазке располагаются не­симметричными гроздьями. Клеточная стенка содержит большое количество пептидогликана, связанных с ним тейхоевых кислот, протеин А. Грамположительны. Спор не образуют, жгутиков не имеют. У некото­рых штаммов можно обнаружить капсулу. Могут образовыватьL-формы.

Культуральные свойства: Стафилококки — факультативные анаэробы. Хорошо растут на простых средах. На плотных средах образуют гладкие, выпуклые колонии с различным пигментом, не име­ющим таксономического значения. Могут расти на агаре с высоким содержаниемNaCl. Обладают сахаролитичес-

кими и протеолитическими ферментами. Стафилококки могут вырабатывать гемолизины, фибринолизин, фосфатазу, лактамазу, бактериоцины, энтеротоксины, коагулазу.

Стафилококки пластичны, быстро приобретают устой­чивость к антибактериальным препаратам. Существенную роль в этом играют плазмиды, передающиеся с помощью трансдуцирующих фагов от одной клетки к другой. R-плазмиды детерми­нируют устойчивость к одному или нескольким антибиотикам, за счет продукции в-лактамазы.

Антигенная структура. Около 30 антигенов, представляющих собой белки, полисахариды и тейхоевые кислоты. В составе клеточной стенки стафилококка содержится протеин А, который может прочно связываться сFc-фрагментом молекулы иммуноглобулина, при этомFab-фрагмент оста­ется свободным и может соединяться со специфическим анти­геном. Чувствительность к бактериофагам (фаготип) обусловлена повер­хностными рецепторами. Многие штаммы стафилококков явля­ются лизогенными(образование некоторых токсинов происхо­дит с участием профага).

Факторы патогенности: Условно – патогенные. Микрокапсула защищает от фагоцитоза, способствует адгезии микробов; компоненты клеточной стенки – стимулируют развитие воспалительных процессов. Ферменты агрессии: каталаза – защищает бактерии от действия фагоцитов, в-лактамаза – разрушает молекулы антибиотиков.

Резистентность.Устойчивость в окружа­ющей среде и чувствительность к дезинфектантам обычная.

Патогенез.Источником инфекции стафилококков - человек и некоторые виды животных (больные или но­сители). Механизмы передачи — респираторный, контактно-бы­товой, алиментарный.

Иммунитет: Постинфекционный – клеточно-гуморальный, нестойкий, ненажряженный.

Клиника.Около 120 клинических форм прояв­ления, которые имеют местный, системный или генерализованный характер. К ним относятся гной­но-воспалительные болезни кожи и мягких тканей (фурункулы, абсцессы), поражения глаз, уха, носоглот­ки, урогенитального тракта, пищеварительной системы (инток­сикации).

Микробиологическая диагностика.Материал для исследования – гной, кровь, моча, мокрота, испражнения.

Бактериоскопический метод:из исследуемого материала (кроме крови) готовят мазки, окрашивают по Граму. Наличие грам «+» гроздевидных кокков, располагающихся в виде скоплений.

Бактериологический метод: Материал засевают петлей на чашки с кровяным и желточно-солевым агаром для получения изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37С в течении суток. На следующий день исследуют выросшие колонии на обеих средах. На кровяном агаре отмечают наличие или отсутствие гемолиза. На ЖСАS.aureusобразует золотистые круглые выпуклые непрозрачные колонии. Вокруг колоний стафилококков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламут­ровым оттенком. Для окончательного установления вида ста­филококка 2—3 колонии пересевают в пробирки со скошенным питательным агаром для получения чистых культур с последую­щим определением их дифференциальных признаков.S.aureus– «+»: образование плазмокоагулазы, летициназы. Ферментация:глк, миннита, образование а-токсина.

Для установления источника госпитальной инфекции выде­ляют чистые культуры стафилококка от больных и бактерионо­сителей, после чего проводят их фаготипирование с помощью набора типовых стафилофагов. Фаги разводят до титра, указан­ного на этикетке. Каждую из исследуемых культур засевают на питательный агар в чашку Петри газоном, высушивают, а за­тем петлей каплю соответствующего фага наносят на квадраты (по числу фагов, входящих в набор), предварительно разме­ченные карандашом на дне чашки Петри. Посевы инкубируют при 37 °С. Результаты оценивают на следующий день по нали­чию лизиса культуры.

Серологический метод: в случаях хронической инфекции, определяют титр анти-а-токсина в сыворотке крови больных. Определяют титр АТ к риботейхоевой кислоте( компонент клеточной стенки).

Лечение и профилактика. Антибиотики широкого спектра действия (пенициллины, устойчивые к в-лактамазе). В случае тяжелых стафилококковых инфекций, не поддающихся лечению антибиотиками, может быть использована антитокси­ческая противостафилококковая плазма или иммуноглобулин, иммунизи­рованный адсорбированным стафилококковым анатоксином. Выявление, лечение больных; проведение планового обследования медперсонала, вакцинация стафилококковым анатоксином.

Стафилококковый анатоксин:получают из нативного анатоксина путем осаждения трихлоруксусной кислотой и адсорбцией на гидрате оксида алюминия. Анатоксины применяют для создания искусственного антитоксического иммунитета. Подобные вакцины используют для профилактики дифтерии, столбняка, газовой гангрены, стафилококковой инфекции и др

Стафилококковая вакцина:взвесь коагулазоположительных стафилококков, инактивированных нагреванием. Применяют для лечения длительно текущих заболеваний.

Иммуноглобулин человеческий противостафилококковый: гамма-глобулиновая фракция сыворотки крови, содержит стафилококковый анатоксин. Готовят из человеч. крови, с высоким содержанием антител. Применяется для специфического лечения.

БИЛЕТ 3