Процессы в ходе этого времени
|
|
|
|
Внеклеточный продукт |
Внутриклеточный продукт |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Выращивание культуры клеток |
|
|
|
|
|
в ферментере |
|
|
Разрушение клеток |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Гомогенизатор |
|
|
|
|
|
|
|
Первичная очистка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Центрифугирование, |
|
|
|
|
|
фильтрация |
|
Процесс наработки |
и предочистки
|
|
|
Очистка |
|
|
|
Сорбция, переосаждение, |
|
|
Тонкая очистка |
|
|
|
полировка |
|
|
|
|
|
антигена |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Коньюгация |
|
|
Инактивация |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Партия |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
антигена |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
До 12 месяцев
До 18 месяцев
Составление ГЛФ, стерильная фильтрация
Упаковка, маркировка
Подготовка документации, отгрузка
Изготовление и упаковка
ГЛФ
© 3 
Возможные варианты применения глубинной фильтрации для осветления культур клеток
Биореактор Центрифуга
Биореактор Тангенц. фильтр
Глубинный Биореактор фильтр
(этап 1)
Биореактор Флоккуляция
Глубинный
фильтр
Глубинный
фильтр
Глубинный
фильтр
(этап 2)
Глубинный фильтр
Обеспложивание на мембране
0.2 или 0.45 мкм
Обеспложивание на мембране
0.2 или 0.45 мкм
Обеспложивание на мембране
0.2 или 0.45 мкм
Обеспложивание на мембране
0.2 или 0.45 мкм
Х/г очистка
Х/г очистка
Х/г очистка
Х/г очистка
© 3M 2010. All Rights Reserved.
Сравнение тупиковых глубинных фильтров с дзетта-потенциалом, систем фильтрации с тангенциальным
потоком (TFF) и центрифужных систем
|
Проблема |
Глубинная фильтрация с |
TFF |
Центрифуга |
|
дзетта-потенциалом |
|
|
|
|
|
Масштабируемость |
Да, линейная |
Да, линейная |
Затруднена |
|
|
|
|
|
|
Качество фильтрата |
Превосходное |
Может потребоваться доп. ф-ция |
Требуется доп. ф-ция |
|
|
|
|
|
|
Выход |
Превосходный, > 95% |
Хороший, может потребоваться |
Зависит от достижимого |
|
диафильтрация |
осушения твердого осадка |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Гибкость системы: |
Легко масштабировать в обоих |
Трудно масштабировать в сторону |
Нет, фиксированная |
|
направлениях |
увеличения |
технологическая конструкция |
|
|
|
|
|
|
|
|
Фиксированность |
Нет |
Да |
Да |
|
технологической конструкции |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Разрушение клетки |
Низкое |
Умеренное |
Высокое |
|
|
|
|
|
|
Контроль качества CIP |
Простая, одноразовые фильтры |
Сложная, требуется повторное |
Сложная, может потребоваться |
|
использование мембраны |
разборка оборудования |
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Перекрестное загрязнение партий |
Нет, одноразовые фильтры |
Да, повторное исп. мембраны |
Да, сложности для CIP- |
|
оборудования |
|
|
|
|
|
Возможность стерилизации паром |
Да |
Нет |
Да |
|
на месте |
|
|
|
|
|
Капитальные затраты |
Низкие |
Высокие |
Высокие |
|
Затраты на обслуживание |
Низкие |
Умеренные |
Высокие |
|
Расходные материалы |
Умеренные, замена фильтров |
Низкие/высокие, зависит от срока |
Умеренные, потребление |
|
службы мембраны |
электроэнергии |
|
|
|
|
|
|
|
|
Типичная схема современного производства
моноклональных антител
Применение мембранной фильтрации (гофрированных фильтров)
в процессах дальнейшей очистки продукта
(down-stream)
Организация фильтрации питательных сред и добавок при подаче в ферментер
Компоненты
ростовых сред и буферов
Стерильная |
Стерильная |
вентиляция |
вентиляция |
емкости |
емкости |
0,2 мкм |
0,2 мкм |
Предфильтрация
1,0 - 0,45 мкм
Финальная
стерилизующая
фильтрация
0,2 мкм
Стерильная
аэрация
ферментера
0,2 мкм
Схема подготовки воды для инъекций
Основная проблема в биотехнологическом процессе: слишком широкий размах размеров частиц
Безоболочечные вирусы/ фаги
/MvM/ PPV/ AAV
IgG Антитела
Ферменты/ цитокины/ баластные белки (HCP)
Малые молекулы/ Компоненты питательных сред
|
|
IgM Антитела |
0.1 нм |
1 нм |
10 нм |
|
|
Оболочечные вирусы
X-MuLV, Reo-3
HIV, Лентивирусы
Клетки млекопитающих
(CHO, PER.C6, CAR T)
Бактериальные клетки
ДНК и хроматин
Клетки микоплазм
Общепринятые технологии осветления КЖ
1 г белка – 69 533 руб
Культура клеток |
Первичное |
Тонкое |
Мембрана, защищающая |
( 2- 4 %PCV) |
осветление |
осветление |
стерилизующую |
< 3 м 3
>5 м 3
Стерилизующая
мембрана
85-90%
Выход Целевого белка
75-80%
Выход целевого белка
Гораздо более серьезные потери при более высоких плотностях культур
(>5% объем клеток в общем объеме культуры)
