49. Реакции агглютинации и преципитации, применяемые в биологии и медицине.

Реакции агглютинации применяются для качественного и количественного определения корпускулярных антигенов или соответствующих им антител в анализируемых суспензиях.

Для ее постановки на поверхность обычного предметного стекла (или в лунки специальных стекол) наносят капли цельной или незначительно разведенной сыворотки и затем вносят в каждую каплю корпускулярный антиген в растворе электролита (например, физиологическом растворе). В качестве контролей на стекло должны быть нанесены отдельные капли, содержащие только антиген или только сыворотку. В случае соответствия антигена антителам сыворотки в опытных каплях в течение 5–15 мин образуется видимый глазом осадок, который не наблюдается в контрольных каплях.

Реакции преципитации используются для так называемых высокодисперсных антигенов, представляющих собой отдельные молекулы. Основные отличия их от реакций агглютинации заключаются в более медленном (как правило) образовании осадка (преципитата), меньшей его плотности и способности со временем диссоциировать.

Наиболее быстрый вариант (экспресс-метод) преципитации – это реакция кольцепреципитации. Для ее постановки используют специальные узкие пробирки, обычно называемые преципитационными. Небольшой диаметр таких пробирок должен препятствовать смешиванию двух растворов, содержащих соответственно антиген и антитела. Необходимо, чтобы оба раствора были прозрачны и не содержали видимых взвешенных частиц. Сначала в пробирку до половины объема наливают один из растворов, а затем медленно по стенке, не допуская перемешивания с уже налитым раствором, приливают второй в таком же объеме. В результате диффузии молекул антигена и антител будут создаваться меняющиеся соотношения концентраций, и, когда они окажутся эквивалентными, образуется располагающийся на границе двух растворов осадок, обычно имеющий форму кольца, что и дало название реакции.

С целью избежать диссоциации образующихся осадков были разработаны варианты реакций преципитации в гелях, получившие название реакций иммунодиффузии. Одним из наиболее распространенных вариантов таких реакций является двойная радиальная иммунодиффузия (Оухтерлони). Иммунодиффузия получила название двойной в силу того, что оба компонента движутся в геле навстречу друг другу. Метод позволяет анализировать сыворотки на содержание антител различной специфичности. В этом случае вокруг одной заполняемой сывороткой лунки располагаются лунки, в которые вносятся различные антигены. Определенными недостатками преципитации в гелях являются длительность проведения, нечеткость результатов при невысоких концентрациях антигенов. С целью преодолеть эти недостатки во второй половине ХХ века были разработаны методы, сочетающие белковый электрофорез и иммунопреципитацию, которые получили общее название иммуноэлектрофорез. Помимо выигрыша во времени и повышения разрешающей способности такие методы дают возможность более четко отличить белковые антигены, имеющие одинаковые антигенные детерминанты, но отличающиеся по молекулярной массе