45.Иммунизация, факторы, влияющие на успех иммунизации: вид взятых для иммунизации животных, способ иммунизации, использование адъюванта

Иммунизация — возникновение специфического иммунного ответа иммунной системы организма против возбудителя инфекции у конкретного индивидума и в целом возникновение устойчивости к инфекционным заболеваниям групп людей (животных) путём формирования популяционного иммунитета.

1. Вид животных, используемых для иммунизации:

- Наиболее распространенные животные-хозяева: кролики, козы, овцы, лошади, морские свинки.

- Выбор вида животного зависит от требуемого количества антител, совместимости с антигеном, а также возможности получения.

- Некоторые животные (например, кролики) дают более высокий иммунный ответ, чем другие.

2. Способ введения антигена (иммунизация):

- Подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрибрюшинное введение антигена.

- Выбор пути введения зависит от физико-химических свойств антигена и требуемого уровня иммунного ответа.

- Некоторые пути введения (например, внутривенный) позволяют получить более быстрый, но менее продолжительный ответ.

3. Использование адъювантов:

- Адъюванты - вещества, усиливающие иммунный ответ на антиген.

- Наиболее распространенные адъюванты: полный и неполный адъювант Фрейнда, гидроокись алюминия, монофосфорилированный липид А.

- Адъюванты способствуют более эффективной презентации антигена иммунной системе, вызывая продолжительный иммунный ответ.

46. Моноклональные антитела.

Моноклональные антитела – антитела, вырабатываемые иммунными клетками, принадлежащими к одному клеточному клону, то есть произошедшими из одной плазматической клетки-предшественницы. Моноклональные антитела могут быть выработаны против почти любого природного антигена (в основном белки и полисахариды), который антитело будет специфически связывать. Они могут быть далее использованы для детекции (обнаружения) этого вещества или его очистки.

Принцип: В-лимфоциты индивидуальны по своим клеточным рецепторам для антигена.После их активации Т-клетками они дают клон плазматических клеток, образующих антитела одной специфичности.

В отличие от обычных клеток млекопитающих злокачественно измененные (раковые) клетки обладают способностью продолжительное время делиться на питательных средах. Среди раковых заболеваний есть и такие, которые являются следствием злокачественного изменения клеток красного костного мозга – множественной миеломы. Одним из симптомов этой болезни является накопление в крови белков глобулиновой фракции, которые представляют собой однородные по составу иммуноглобулины.

Получения моноклональных антител:

• иммунизация животных; подготовка клеток к слиянию;

• слияние;

• отбор индуцирующих специфические антитела клонов;

• клонирование и реклонирование;

• массовая наработка гибридомных клеток;

• получение культуральной жидкости или асцита, содержащих антитела;

• выделение антител.

1-й этап: иммунизация животного (белой мыши) тем антигеном, к которому необходимо получить моноклональные антитела. После развития иммунного ответа (что контролируется по появлению в сыворотке крови животного антител к выбранному антигену) из селезенки животного отбирают лимфоциты, смешивают с суспензией ГАТ-чувствительных миеломных клеток мыши, добавляют вещество, способствующее слиянию клеток (полиэтиленгликоль) и выдерживают необходимое для слияния время.

Затем получившуюся смесь высевают на ГАТ-среду: гибридомы, являющиеся результатом слияния В-лимфоцитов из селезенки и миеломных ГАТ-чувствительных В-лимфоцитов: объединенные клетки, потомки которых унаследуют от миеломной клетки способность постоянно делиться, а от нормального, не ракового, В-лимфоцита – нечувствительность к ГАТ-среде.

Сформировавшиеся клоны проверяют на способность продуцировать антитела и отбирают те из них, которые дают антитела к использованному для иммунизации антигену. Полученные стабильные, не дающие расщепления клоны являются источниками гибридом, пригодных для получения абсолютно однородных по специфичности и изотипу антител, которые и называют моноклональными.

Наработку нужного количества антител осуществляют

– либо побуждая гибридомные клетки к продукции антител в культуре

– либо вводя суспензию таких гибридом в организм специально подготовленных лабораторных животных.