47. Поликлональные антитела.

Поликлональные антитела – антитела, образующиеся в сыворотке крови в разных клонах B-лимфоцитов и связываются с различными антигенными детерминантами (эпитопами) молекулы-мишени (антигена).

Смесь антител, выделенную из сыворотки крови, называют поликлональным препаратом. Поликлональные антитела ранее широко использовались в иммунодиагностике, для их получения использовались иммунизированные животные (обычно кролики).

Использование поликлональных антител имеет два недостатка, существенных для некоторых методов диагностики:

– содержание отдельных антител в поликлональном препарате может варьировать от одной партии к другой;

– поликлональные антитела нельзя применять, если необходимо различить две подобные мишени, например, когда патогенная (мишень) и непатогенная (не-мишень) формы различаются единственной детерминантой.

На смену поликлональным были разработаны препараты антител, специфичные к одной определённой антигенной детерминанте, то есть препараты моноклональных антител. Однако поликлональные антитела сохраняют некоторое использование в иммунодиагностике и лабораторных исследованиях – прежде всего из-за низкой стоимости их получения.

48. Агглютинация и преципитация.

1. Реакция агглютинации (от лат. Agglutinatio – склеивание) – склеивание антителами корпускул (бактерий, эритроцитов и других антигенов). Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например, бактерий), "склеенных" антителами.

Существует множество разновидностей реакций агглютинации, которые применяются в зависимости от поставленной цели. Наиболее распространенным вариантом таких экспресс-реакций является ориентировочная реакция агглютинации на стекле. Для ее постановки на поверхность обычного предметного стекла (или в лунки специальных стекол) наносят капли цельной или незначительно разведенной сыворотки и затем вносят в каждую каплю корпускулярный антиген в растворе электролита (например, физиологическом растворе). В качестве контролей на стекло должны быть нанесены отдельные капли, содержащие только антиген или только сыворотку. В случае соответствия антигена антителам сыворотки в опытных каплях в течение 5-15 мин образуется видимый глазом осадок, который не наблюдается в контрольных каплях

В такой реакции неизвестным может быть антиген (например, выделенные в ходе исследования бактерии), и в этом случае используются промышленно производимые антисыворотки, содержащие антитела к антигенам бактерий конкретных видов или сероваров (серотипов, серогрупп

Также особое значение имеют такие разновидности реакций агглютинации:

- Макроскопическая (развернутая) агглютинация в пробирках.

Цель реакции: обнаружение антител в сыворотке больного.

Реакции агглютинации используют для:

- определения возбудителя, выделенного от больного человека или животного;

-определения антител в анализируемых сыворотке крови больного человека или животного.

Эту реакцию применяют при диагностике многих инфекционных заболеваний (брюшного и сыпного тифа, паратифов, туберкулеза и др.).

2. Реакция преципитации (от лат praecipilo – осаждать) – это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса. Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др.

Наиболее быстрый вариант (экспресс-метод) преципитации – это реакция кольцепреципитации. Для ее постановки используют специальные узкие пробирки, обычно называемые преципитационными. Реакцию ставят в пробирках наслоением раствора антигена на иммунную сыворотку. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих растворов образуется кольцо преципитата (обычно кольцо образуется в течение 5-15 мин, но затем из-за продолжающейся диффузии концентрации выйдут из зоны эквивалентности, комплексы антиген-антитело начнут диссоциировать и кольцо осадка может исчезнуть. Поэтому учитывать результат такой реакции следует не позже, чем через час после ее постановки, что в целом считается одним из ее недостатков).