сложные методы окраски
.docxСокращения
ФП -- фиксированный препарат
Методика окрашивания бактерий по Граму на КС
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
На ФП нанести несколько капель генцианвиолет/кладут сухую, пропитанную генцианвиолетом бумажку. 1-2 мин, лишний краситель выливают/снимают бумагу (не смывать) |
Синие |
раствора Люголя на 1-2 мин до почернения. Избыток сливают. |
|
этилового спирта (96%) и выдерживают в течение 30 секунд. После этого спирт сливают, препарат промывают водой, избыток воды сливают. |
Грам+ синие Грам- безцвета |
фуксина и выдерживают в течение 1-2 минут. Препарат высушивают фильтровальной бумагой и досушивают на воздухе. |
Грам+ синие Грам- красные |
Метод Грама в модификации А.В. Синева
Все тоже самое просто с бумажкой, а не прямым красителем.
Метод Циля-Нельсона на кислотоустойчивые бактерии
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
|
Красный |
|
|
|
Кислотоустойчивые – красные, другие – безцветные |
|
Кислотоустойчивые – красные, другие – синие |
|
Метод Здродовского (облегченная модификация метода Циля-Нильсена).
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
|
риккетсии окрашиваются в рубиново-красный цвет цитоплазма -- голубая ядро клетки-хозяина имеет синий цвет. |
|
|
|
|
|
|
|
Окраска по Леффлеру.
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
на фиксированный препарат наливают щелочной раствор метиленовой синьки на 3–5 мин |
палочки (протоплазма) окрашиваются в светло-голубой цвет зерна волютина (гранулы полифосфата) — в темно-синий |
промывают водой, высушивают, |
|
наносят иммерсионное масло, микроскопируют |
Окраска по Нейссеру (Зерна волютина).
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
на фиксированный препарат наливают уксусно-кислую метиленовую синьку на 1–2 мин |
зерна волютина в темно-синий (без раствора Люголя) или черный (с раствором Люголя);
ЦП клетки окрашивается в нежно-желтый цвет |
краситель сливают, препарат промывают водой |
|
наносят раствор Люголя на 30–60 с (иногда); |
|
промывают водой |
|
докрашивают хризоидином 10–15 с или везувином 30 с – 3 мин |
|
мывают водой, высушивают, микроскопируют |
Окраска по методу Ожешко для выявления кислотоустойчивых спор
-
Этапы окраски
Цвет бактерий
На высушенный нефиксированный препарат (мазок готовится толстым и на краю стекла) наливают несколько капель 0,5%-ного раствора соляной кислоты и подогревают 1 – 2 мин. над пламенем горелки до закипания, после чего остатки кислоты сливают.
Споры, окрашенные фуксином, имеют рубиново-красный цвет, вегетативные тела микробных клеток при докрашивании синькой Леффлера – синий цвет, при применении малахитовой зелени – зеленый цвет.
Остывший препарат промывают водой, подсушивают на воздухе и фиксируют на пламени горелки.
Окрашивают карболовым фуксином Циля (фуксин наливают на фильтровальную бумажку) с подогреванием до появления паров.
Обесцвечивают 5%-ным раствором серной кислоты в течение нескольких секунд
Промывают водой.
Докрашивают синькой Леффлера или 1%-ным водным раствором малахитовой зелени в течение 3 – 5 мин.
Метод Романовского-Гимзы (нуклеоида бактерий, спирохет, хламидий, риккетсий, простейших и мазков крови)
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
На мазок нанести рабочий раствор красителя (2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды), состоящего из смеси основного метиленового синего, азура и кислого эозина на 10-20 минут. |
ДНК нуклеоида окрашивается метиленовым синим и азуром в сине-фиолетовый цвет, цитоплазма клетки - эозином в розовый цвет. |
Препарат промыть и высушить |
Метод окрашивания по Бурри-Гинсу (жгутики, капсулы)
Этапы окраски |
Цвет бактерий |
Для этого на предметное стекло наносят каплю туши, а рядом с ней - каплю исследуемого материала. Обе капли тщательно перемешивают и с помощью стекла со шлифованным ребром из полученной смеси готовят толстый мазок. |
Капсула бесцветная Микробная клетка - красная |
Мазок высушивают, фиксируют на пламени спиртовки и окрашивают фуксином или сафранином в течение 2-3 минут. |
|
Краситель сливают, мазок высушивают и микроскопируют с иммерсионной системой. |