- •Організація бактеріологічної лабораторії. Мікроскопія
- •1. Будова біологічного мікроскопа з імерсійним об'єктивом. Порядок роботи з мікроскопом, розрахунок збільшення і дозволу.
- •2. Відмінності темнопольної мікроскопії, її призначення.
- •3. Принцип фазово-контрастної мікроскопії, необхідне обладнання.
- •4. Принцип дії люмінесцентної мікроскопії.
- •5. Будова електронного мікроскопа і принципи електронної мікроскопії.
- •Морфологія бактерій. Прості методи фарбування
- •1. Принципи класифікації мікроорганізмів.
- •2. Класифікація прокаріотів за Берджі.
- •4. Прості методи забарвлення.
- •Морфологія і структура бактерій. Фарбування бактерій за грамом
- •1. Капсула, будова і функції
- •2. Клітинна стінка - будова і функції
- •3. Цитоплазматична мембрана - будова і функції.
- •4. Будова і значення джгутиків.
- •5. Як класифікуються бактерії в залежності від кількості та розташування джгутиків.
- •6. У чому полягає явище плазмолізу? Практичне використання.
- •7. Принцип методу забарвлення по Граму.
- •1. Спірохети (трепонеми, борелії, лептоспіри). Особливості морфології і будови (оболонка, фімбрії, блефаропласт, рухливість). Забарвлення за Романовським - Гімзою.
- •2. Морфологічні особливості рикетсій,
- •3. Актиноміцети, морфології. Повітряний і субстратної міцелій, друзи.
- •4. Спороутворення. Поняття про бацилу і клостридії. Виявлення спор за методом Ожешко.
- •5. Структура клітини грибів. Особливості структури цитоплазматичної мембрани і клітинної стінки.
- •6. Вегетативні спори, ендоспори, екзоспори, статеві спори.
- •7.Методи вивчення морфології грибів.
- •8.Кислотостійкі бактерії - методи вивчення.
- •Фізіологія мікроорганізмів. Виділення чистих культур аеробних та анаеробних бактерій
- •3. Дихання бактерій. Енергетичні потреби бактерій. Джерела і шляхи отримання енергії у фотоаутотрофів, хемоаутотрофів.
- •Муравьинокислое брожение
- •6. Ріст і розмноження мікроорганізмів. Способи розмноження мікроорганізмів. Фази розвитку мікроорганізмів у періодичній культурі.
- •7. Біоплівки, їх значення у медичній практиці. Асоціації мікроорганізмів та чисті культури.
- •8. Методи культивування анаеробних бактерій.
- •9. Значення бактеріологічного (культурального) методу у діагностиці інфекційних захворювань.
- •10. Особливості культивування рикетсій, хламідій, спірохет.
- •11. Среды для культивирования
- •Загальна вірусологія. Бактеріофаги
- •1. Визначення вірусів, як особливих форм організації живого.
- •2. Відмінність структурної організації та хімічного складу віріонів від бактерій.
- •3. Репродукція вірусів. Основні типи взаємодії вірусу з клітиною хазяїна.
- •4. Бактеріофаги, особливості їх взаємодії з бактеріальною клітиною.
- •Явище лізогенії. Фагова конверсія
- •5. Практичне застосування фага. Фагодіагностика (рнтф, фаготипування), фагопрофілактика і терапія.
- •6. Методи культивування вірусів в клітинних культурах, в курячому ембріоні і в організмі тварин.
- •7. Методи виявлення (індикації) вірусів за цитопатичної дії (цпд). 8. Реакції гемаглютинації і гемадсорбції, бляшкоутворення, внутрішньоклітинні включення. 9. Методи ідентифікації вірусів
- •Мікробіологічні основи стерилізації і дезінфекції. Поняття про асептику і антисептику
- •1. Механізм дії на мікроби високих і низьких температур, тиску, ультразвуку, різних видів променевої енергії, рН, рО, рСо2, осмотичного тиску і різних груп хімічних сполук.
- •2. Поняття про стерилізацію та її види.
- •3. Одноразові, дрібні і комбіновані способи стерилізації.
- •4. Сучасна апаратура для стерилізації.
- •5. Поняття про асептику, її зміст.
- •6. Поняття про антисептику. Розробка наукових принципів антисептики (і. Земмельвейс, д. Лістер).
- •7. Поняття про дезінфекцію, її зміст.
- •Химическая дезинфекция
- •8. У чому відмінність понять асептики, антисептики, стерилізації та дезінфекції, хоча всі вони спрямовані проти мікроорганізмів?
- •9. Як визначити ефективність стерилізації, асептики, антисептики та дезінфекції?
- •Хіміотерапевтичні препарати. Антибіотики
- •1. Поняття про хіміотерапію і хіміопрофілактику.
- •2. Властивості хіміотерапевтичних препаратів. Хіміотерапевтичний індекс.
- •3. Визначення поняття «антибіотики». Історія відкриття антибіотиків.
- •4. Класифікація антибіотиків за походженням. Приклади.
- •5. Класифікація антибіотиків за механізмом дії. Навести приклади.
- •6. Класифікація антибіотиків за спектром дії.
- •7. Лікарська стійкість мікроорганізмів.
- •8. Методи визначення чутливості бактерій до антибіотиків.
- •8. Мікробіологічні основи раціональної антибіотикотерапії.
- •9. Негативні наслідки застосування антибіотиків.
- •1. Осложнения со стороны макроорганизма:
- •2. Побочные действия на микроорганизмы:
- •Мікробіом організму людини. Дисбіоз. Пробіотики
- •1. Поняття про мікробіом тіла людини, його роль і функції в організмі.
- •2. Поняття про біотоп, мікробіоценоз, мікроекологічну систему організму людини.
- •4. Гнотобіологія. Її значення в медичній мікробіології і імунології.
- •5. Поняття про біотехнології.
- •6. Автохтонна і алохтонна мікрофлора тіла людини.
- •7. Мікробіом ротової порожнини. Асоціативна взаємодія різних груп мікроорганізмів. Утворення біоплівок.
- •8. Мікробіом шкіри
- •Дихальних шляхів
- •Травної
- •Сечостатевої систем.
- •9. Поняття про колонізаційну резистентність та її роль в інфекційній патології.
- •10. Дисбіоз (умови виникнення, наслідки розвитку, класифікація за збудником і локалізацією).
- •11. Методи діагностики, корекції дисбіозів.
- •12. Еубіотики і пробіотики - препарати для відновлення нормального мікробіому організму людини. Механізм дії
- •Санітарна вірусологія та бактеріологія
12. Еубіотики і пробіотики - препарати для відновлення нормального мікробіому організму людини. Механізм дії
Пробиотики -- живые микроорганизмы и вещества микробного происхождения, которые оказывают при естественном способе введения положительные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма хозяина через стабилизацию и оптимизацию его нормальной микрофлоры.
Пребиотики -- препараты немикробного происхождения способны оказывать положительный эффект на организм хозяина путем селективной стимуляции роста или усиления метаболической активности нормальной микрофлоры кишечника.
Синбиотики -- препараты, полученные в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков
Функциональное питание (эубиотики) -- систематическое использование продуктов природного происхождения (пищевые волокна, эйкозапентаеновая кислота, бифидобактерии, олигосахариды), оказывающих регулирующее влияние на функции определенных органов, систем или организма в целом
Санітарна вірусологія та бактеріологія
1. Санітарна мікробіологія, предмет, завдання. Значення санітарної мікробіології в діяльності лікаря.
Санитарная микробиология изучает микрофлору окружающей среды, влияние микрофлоры на здоровье человека, разрабатывает мероприятия по предупреждению неблагоприятного воздействия микроорганизмов на организм человека.
Изучение микробных биоценозов во внешней среде
Обнаружение во внешней среде патогенны микробов или их токсинов
Обнаружение во внешней среде некоторых условно-патогенных микроорганизмов, являющихся косвенным показателем загрязнения изучаемых объектов патогенными микробами.
Объекты санитарно-микробиологического исследования:
• Вода (питьевая, открытых водоемов, бассейнов и т.д.)
• Воздух закрытых помещений
• Почва
• Пищевые продукты
• Смывы с оборудования пищеблоков, рук персонала
• Объекты госпитальной среды (хирургический инструментарий, шприцы, лекарственные препараты, кожа и слизистые оболочки дыхательных путей мед.персонала и т.д.)
• Парфюмерно-косметическая продукция
2. Санітарно-показові мікроорганізми, вимоги до них, їх значення для характеристики об'єктів навколишнього середовища.
ОМЧ определяют путем подсчета всех микробов в 1 г или 1 мл субстрата
Санитарно-показательные микроорганизмы: некоторые - условно-патогенные микробы - представители облигатной нормальной микрофлоры человека и животных, обнаружение которых во внешней среде свидетельствует о фекальном или воздушно-капельном загрязнении ее выделениями человека.
Основные требования к СПМ
1. СПМ должны постоянно обитать в естественных полостях человека и животных и постоянно выделяться во внешнюю среду.
2. СПМ не должны размножаться во внешней среде (исключая пищевые продукты)
3. Длительность выживания СПМ должна быть несколько больше, чем у патогенных м/о.
4. Устойчивость СПМ во внешней среде должна быть не меньше, чем у патогенных микробов.
5. У СПМ не должно быть во внешней среде аналогов, с которыми их можно перепутать.
6. СПМ не должны изменяться во внешней среде.
7. Методы идентификации СПМ должны быть простыми.
СПМ:
Группа А - обитатели кишечника человека и животных. Это бактерии группы кишечной палочки (БГКП) -- эшерихии, энтерококки, протей, сальмонеллы, сульфитвосстанавливающие клостридии, термофилы, бактериофаги, бактероиды, синегнойная палочка, кандиды и аэромонады.
Группа В: индикаторы оральных загрязнений - обитатели верхних дыхательных путей и носоглотки. Это зеленящие а и в -стрептококки, стафилококки (плазмокоагулирующие, лецитиназоположителные, гемолитические и антибиотикоустойчивые), в некоторых случаях также определяют вид золотистого стафилококка.
Группа С - индикаторы процессов самоочищения сапрофитические микрорганизмы, обитающие во внешней среде. Это бактерии протеолиты, бактерии- аммонификаторы и бактерии - нитрификаторы, некоторые спорообразующие бактерии, грибы, актиномицеты, целлюлозобактерии, бделловибрионы и сине-зеленые водоросли.
Количество санитарно-показательных микроорганизмов выражают либо в виде индекса, либо в виде титра.
Индекс санитарно-показательных микроорганизмов -- количество КОЕ (колониеобразующих единиц) санитарно-показательных микроорганизмов в единице нормируемого объема или веса исследуемого образцаю.
Титр санитарно-показательных микроорганизмов -- наименьший объем (вес) пробы, содержащий 1 КОЕ санитарно-показательного микроорганизма.
Содержание СПМ определяют 2 методами
1. Прямой подсчет числа бактерий с помощью специальных камер счетчиков
2. Посев на питательные среды. Второй метод применяют чаще.
3. Санітарно бактеріологічний контроль за якістю питної води. Вимоги державного стандарту до питної води. Санітарно-показові мікроорганізми, які використовують при оцінці якості води.
Вода может быть фактором распространения таких инфекционных заболеваний как холера, брюшной тиф, паратифы, дизентерия, гепатит А, полиомиелит, лептоспироз, сибирская язва, туляремия, туберкулез, Q-лихорадка, грибковые заболевания. В основном вода загрязняется через сточные воды. Непосредственное определение в воде патогенных микробов очень трудоемко, поэтому сначала определяют наличие СПМ, а затем определяют патогенных возбудителей.
Безопастность воды в определяется по следующим индикаторным показателям:
питьевой воды централизованного водоснабжения – термотолерантным колиформным бактериям общим колиформным бактериям, общему микробному числу, колифагам, спорам сульфитредуцирующих клостридий
воды басейнов – общим колиформным бактериям, колифагам, термотолерантным колифорным бактериям, синегнойной палочке, золотистому стафилококку, отсутствию возбудителей кишечных инфекций
Ключевыми показателями, характеризующими санитарно- микробиологическое качество воды, являются следующие.
Общее число микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре. Метод определяет в питьевой воде общее число мезофильных аэробных и факультативно анаэробных микроорганизмов (ОМЧ), способных образовывать колонии на питательном агаре при температуре 37 гр.С в течение 24 часов, видимые с увеличением в 2 раза.
Содержание общих и термотолерантных колиформных бактерий (ОКБ и ТКБ). Общие колиформные бактерии (ОКБ) - грамотрицательные, оксидаза- отрицательные, не образующие спор палочками, способные расти на дифференциальных лактозных средах, ферментирующие лактозу до кислоты, альдегида и газа при температуре 37 гр.С в течение 24-48 часов
Содержание спор сульфитредуцирующих клостридий. Сульфитредуцирующие клостридии — спорообразующие анаэробные палочковидные микроорганизмы, восстанавливающие сульфит натрия на железосульфитном агаре при 44 гр. С в течение 16-18 часов.
Содержание колифагов -- бактериальные вирусы (бактериофаги), заражающие Escherichia coli и, в результате, формирующие зоны лизиса (бляшки) бактериальной культуры, засеянной «газоном» на питательном агаре через 18 часов инкубирования при 37 гр.С.
Санитарно-показательные микроорганизмы, которые используют при оценке качества воды: определяют ОМЧ, БГКП, Е. coli, энтерококки, стафилококки, патогенные микроорганизмы (холерные вибрионы, сальмонеллы, шигеллы, лептоспиры).
4. Мікрофлора води. Фактори самоочищення води. Виживання патогенних мікроорганізмів у воді. Роль води у передачі інфекційних захворювань.
Микрофлору водоемов образуют 2 группы:
1) автохтонные (или водные) микроорганизмы -- совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде. Микробный состав воды напоминает микрофлору почвы, с которой вода соприкасается.
2) аллохтонные (попадающие извне при загрязнении различных источников) микроорганизмы. Основной путь микробного загрязнения водоемов -- попадание неочищенных, городских отходов и сточных вод. Инфицирование происходит также при купании людей, скота и стирке белья.
Патогенные микроорганизмы участвуют в процессах самоочищения воды, в которых наблюдается закономерная последовательность зон сапробности. Под сапробностью понимают комплекс свойств водоема, включая микроорганизмы, содержание органических веществ и стадии минерализации.
Зоны сапробности
1. Полисапробная зона сильного загрязнения. Число бактерий в 1 мл миллиарды, много кишечный палочек.
2. Мезосапробная зона умеренного загрязнения, в 1 мл сотни тысяч микробов, кишечная палочка убывает.
3. Олигосапробная зона чистой воды, в 1 л десятки или сотни микробов, кишечных палочек нет.
Водным путем могут передаваться возбудители многих заболеваний, наиболее часто — кишечных инфекций (холеры, брюшного тифа, паратифа, дизентерии). Установлена роль водного фактора в распространении вирусов — возбудителей инфекционного гепатита, полиомиелита, энтеровирусов (болезнь Коксаки А и В) ив меньшей степени аденовирусов (бассейновые конъюнктивиты).
5. Методи санітарно-бактеріологічного дослідження води і їх оцінка.
Пробы воды для бактериологического исследования отбирают в стерильную посуду, после наполнения емкость закрывают стерильной пробкой, обеспечивающей герметичность. Пробу воды отбирают непосредственно из крана без резиновых шлангов, водораспределительных сеток и других насадок. Объем воды зависит от того, какие микроорганизмы должны быть определены:
при анализе воды на индикаторные микроорганизмы – не менее 500 см3;
при анализе воды на индикаторные и патогенные микроорганизмы (сальмонеллы, шигеллы) – 300 см3.
Отобранную пробу маркируют, прикрепляют этикетки к емкости, составляется акт об отборе проб воды с указанием расположением и наименованием места отбора проб, даты отбора, метода отбора, времени отбора, климатических условий окружающей среды при отборе проб, температуре воды, должности и фамилии исполнителя. В лабораторию пробы питьевой воды доставляют в контейнерах-холодильниках при температуре 4-100С. Время начала исследований от момента отбора проб не должно превышать 6 часов, если пробы нельзя охладить, то их анализ проводят в течение 2 часов после забора пробы.
Определение общего числа микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре. Из каждой пробы производят посев не менее двух объемов по 1 мл, далее вносят по 1мл воды в стерильные чашки Петри и прибавляют в каждую чашку по 8-12 мл расплавленного и остуженного до 450С питательного агара. Содержимое чашек быстро и равномерно смешивают, избегая образования пузырьков воздуха и попадания агара на края и крышку чашки. Чашки с застывшим агаром инкубируют; учитывают только те из них, на которых выросли не более 300 изолированных колоний. Результат выражают числом KOЕ в 1 мл исследуемой пробы воды.
Термотолерантные и общие колиформные бактерии оценивают методом мембранной фильтрации или титрационным методом.
Метод мембранной фильтрации. Берут объем воды равный 300 мл и фильтруют по 100 мл через разные стерильные нитроцеллюлозные фильтры фильтры (используются микрофильтрационные установки с диаметром фильтрующей поверхности 35 или 47 мм и вакуумным насосом для создания разрежения 0,5-1 атм), которые затем накладывают на поверхность дифференциальной диагностической среды Эндо. Подсчитывают количество красных лактозоположительных колоний на среде Эндо, готовят из колоний мазки, окрашивают по Граму в поисках грамотрицательных палочек, определяют оксидазный тест, который должен быть у энтеробактерий отрицательным. Затем пересевают колонии с грамотрицательными палочками и отрицательным оксидазным тестом на полужидкую среду с лактозой (маннитом, глюкозой) и инкубируют в термостате при 37°С в течение 24 часов для определения количества общих колиформных бактерий. Для определения термотолерантных колиформных бактерий посев производят в среду, подогретую до 44оС, и инкубируют в термостате при 44оС в течение 24 часов.
Колонии учитывают как общие колиформные бактерии при отрицательном оксидазном тесте, ферментации лактозы или маннита (глюкозы) при 37оС с образованием кислоты и газа.
Колонии учитывают как термотолерантные колиформные бактерии при отрицательном оксидазном тесте и ферментации лактозы или маннита (глюкозы) при 44оС с образованием кислоты и газа.
Титрационный метод. Его обычно используют для качественной оценки питьевой воды при невозможности применения метода мембранной фильтрации или при наличии в воде большого количества взвешенных веществ. Объем воды 300 мл разделяют на 3 объема по 100 мл, засевают эти пробы на лактозопептонную среду и инкубируют при 37оС в течение 24-48 часов. При наличии роста делают пересев из этих объемов на среду Эндо, далее лактозоположительные колонии идентифицируют как в предыдущем методе. Количество колиформных бактерий в этом методе определяют по специальным таблицам.
Определение спор сульфитредуцирующих клостридий методом мембранной фильтрации. Сульфитредуцирующие клостридии (в основном это Clostridium perfringens) – палочки, грамположительные, строгие анаэробы, имеющие спору и редуцирующие сульфит натрия при температуре 440С в течение 24 часов на железо-сульфитном агаре. Метод основан на фильтровании 20 мл воды через мембранные фильтры, помещении их в горячий железо-сульфитный агар, сразу же после посева пробирку с агаром и фильтром для создания анаэробных условий быстро охлаждают, культивируют посевы при температуре 440С в течение 24 часов. При учете результатов подсчитывают черные изолированные колонии, выросшие как на фильтрах, так и в толще питательной среды. Результат анализа выражают числом колонийобразующих единиц (КОЭ) спор сульфитредуциирующих клостридий в 20 мл воды.
Определение колифагов производят титрационным и прямым методами. Колифаги способны лизировать E. coli (используется эталонная тест-культура E. coli К12 StrR) при температуре 370С и образовывать через 18-20 часов на питательном агаре зоны лизиса. Принцип метода основан на предварительном подращивании колифагов в среде обогащения в присутствии E. coli и образовании бляшек колифага на газоне E. coli на питательном агаре. Определение наиболее вероятного числа колифагов производят по специальной таблице.
6. Мікрофлора грунту. Роль грунту в передачі інфекційних захворювань. Фактори, які впливають на виживаність патогенних мікроорганізмів у грунті. Санітарно-показові мікроорганізми, які використовують при оцінці забруднення грунту. Методи санітарно-мікробіологічного дослідження грунту.
Микрофлора почвы включает все известные группа микроорганизмов: споровые и споронеобразующие бактерии, актиномицеты, грибы, спирохеты, архебактерии, простейшие, сине-зеленые водоросли, микоплазмы и вирусы. В 1 г почвы насчитывается до 6 млрд микробных тел. На качественный и количественный состав микрофлоры почвы влияет тип почвы, её плодородие, влажность, аэрация и физико – химические свойства. На микробиоценоз почвы существенно влияет деятельность человека: обработка почвы, внесение удобрений, мелиорация, загрязнение отходами производств.
Особо опасным в санитарном отношении является загрязнение почвы необезвреженными отходами животноводства (навоз, моча, отходы боенского производства, трупы животных). Самоочищающая способность почвы ограничена, а методы обеззараживания почвы громоздки и малоэффективны (например, 5 кг хлорной извести на 1 м кв почвы).
Некоторые патогенные микроорганизмы в зависимости от экологических особенностей вегетируют в почве, и почва для них является естественным местом обитания. Другая группа, в том числе и споронеобразующие, длительно сохраняются в почве определеного физико – химического состава, где при благоприятном температурно – влажностном режиме размножается. К третьей группе относятся возбудители хламидиозов, риккетсии, вирусы и особо прихотливые бактерии. Они быстро отмирают в почве.
Обеззараживающая способность разных почв неодинакова и подчас почва может служить благоприятным субстратом для патогенных микроорганизмов. Почва как субстрат, состоящий из твердой фазы и воды, служит естественным местом обитания для возбудителей многих заразных болезней: клостридиозов, сибирской язвы, псевдотуберкулеза, листериоза, лептоспироза, эризипелоида, туберкулеза, мелиоидоза, синегнойной инфекции, дерматомикозов, микотоксикозов, холеры, иерсиниоза, сальмонеллеза.
Санитарное состояние почвы оценивают по коли – титру, количеству анаэробов, споровых и термофилов, по наличию яиц гельминтов и специфических возбудителей инфекций. Для чистой почвы титр кишечной палочки не более 1г, умеренно загрязненной – до 50 мг, для сильно загрязненной – 1-2 мг.
Санитарно-бактериологический анализ для оценки санитарного состояния почв включает определение обязательных показателей:
Индекс бактерий группы кишечной палочки (индекс БГКП);
Индекс энтерококков (фекальные стрептококки);
Патогенные бактерии (патогенные энтеробактерии, в т.ч. сальмонеллы, энтеровирусы).
Эти бактерии служат показателями фекальной загрязнённости почвы. Почву оценивают как «чистую» без ограничений по санитарно-бактериологическим показателям при отсутствии патогенных бактерий и индексе санитарно-показательных микроорганизмов до 10 клеток на грамм почвы. О возможности загрязнения почвы сальмонеллами свидетельствует индекс санитарно-показательных организмов (БГКП и энтерококков) 10 и более клеток/г почвы. Концентрация колифага в почве на уровне 10 БОЕ на г и более свидетельствует об инфицировании почвы энтеровирусами.
Краткий санитарно-бактериологический анализ почвы включает определение двух показателей: общего количества микробов (в 1 г почвы) и коли-титра.
Отбор проб почвы. На обследуемой территории до 1000 м выделяют два участка по 25 м2 каждый: один участок выбирают вблизи, другой – вдали от источника загрязнения. С каждого участка отбирают среднюю пробу, составленную из 5 образцов, взятых по диагонали или в четырех точках по краям и в одной в центре. Образцы берут на глубине до 20 см, при исследовании почвы скотомогильников – ниже глубины захоронения не менее чем на 25 см, Пробы отбирают стерильной железной лопаткой, совком или специальным буром в стерильные широкогорлые банки, которые закрывают ватными пробками. К банке приклеивают этикетку с датой и номером отобранной почвы.
Масса каждого образца должна быть 200-300 г, а смешанного – не менее 1 кг. Отобранные пробы почвы направляют в лабораторию и исследуют сразу же или не позднее чем через 12-18 ч при хранении при 1-5 °С.
В колбу на 500 мл, наливают 270 мл стерильной водопроводной воды и вносят 30 г исследуемой почвы. Колбу с содержимым встряхивают в течение 10 мин. Из полученного разведения почвы 1:10-1 готовят десятикратные разведения: для чистых почв 1:10-2 до 1:10-4, для загрязненных – до 1:10-6 и больше.
Определение общего микробного числа (ОМЧ)
Из последних 3-4 пробирок приготовленных разведений берут 1 мл и переносят в стерильные чашки Петри (не менее двух чашек на каждое разведение). В эти чашки заливают по 10 мл расплавленного и охлажденного до 45°С МПА и тщательно перемешивают. Посевы культивируют в термостате при 37°С 24-48 ч.
Учет результатов проводят путем подсчета выросших колоний и определения среднеарифметического числа. Полученное число колоний умножают на степень разведения исследуемой почвы, получая число бактерий в 1 г почвы.
Определение коли-титра почвы методом бродильных проб с использованием среды Кесслера. Исследования проводят в три этапа. На первом этапе готовят разведения: для чистых почв от 1:10-1 до 1:10-3: для загрязненных – от 1:10-3 до 1:10-6 . После тщательного перемешивания 1 мл полученной суспензии из различных разведений переносят в пробирку с 9 мл среды Кесслера (на 1 л дистиллированной воды 10 г пептона, 50 мл бычьей желчи, 2,5 г лактозы, 4 мл 1%-ного водного раствора генцианвиолета). Посевы культивируют при 43°С в течение 48 часов.
На втором этапе исследования просматривают посевы на среде Кесслера. Из пробирок с наличием газа продолжают высев на среду Эндо. Посевы культивируют при 37°С в течение 24 ч.
На третьем этапе исследуют колонии, выросшие на среде Эндо. Отбирают колонии, типичные для бактерий группы кишечных палочек, готовят из них мазки, красят по Граму, микроскопируют. При обнаружении в мазках коротких полиморфных грамотрицательных палочек производят высев из этих колоний на среду Кесслера для подтверждения газообразования в чистой культуре.
7. Мікрофлора повітря, її характеристика. Роль повітря в передачі інфекційних захворювань.
Микрофлора воздуха достаточно разнообразна, ее количественный и качественный состав определяется степенью загрязнения воздуха пылью, потасовкой, сажей, другими продуктами жизнедеятельности человека, сезоном года, климатом, влажностью. Большее количество микробов находится в воздухе больших городов, меньшее – в сельской местности, над лесами; воздух высоко в горах практически стерилен. Микроорганизмы поступают в атмосферу с частицами пыли из почвы, растений, от человека и животных. Воздух не является благоприятной средой для роста и размножения микробов, поскольку в нем нет питательных веществ, достаточной влажности и оптимума температуры, губительно действуют УФ-лучи, высушивание. Поэтому микрофлора воздуха представлена сапрофитными бактериями, образующими пигменты, кроме того, обнаружены спорообразующие бациллы, дрожжевые и целевые грибы, вирусы.
Возбудители воздушно-капельных инфекций имеют общий путь выделения с бактериями, постоянно обитаю щими на слизистой оболочке верхних дыхательных пу тей, выделяющимися в окружающую среду (при кашле, чиханье, разговоре), поэтому в качестве санитарно- показательных бактерий для воздуха закрытых помеще ний предложены золотистые стафилококки и гемолити ческие стрептококки (S. aureus и S. pyogenes). Воздушно-капельным путем могут передаваться возбудители гриппа, коклюша, кори, туберкулеза, стафилококковой и менингококковой инфекции.
8. Мікробне число і санітарно-показові мікроорганізми повітря закритих приміщень, методи визначення, їх оцінка.
Для отбора проб воздуха при микробиологических исследованиях используют:
1. Аспирационный метод (ПУ-1Б, «Флора», прибор Кротова)
2. Фильтрационный метод
3. Седиментационный метод (в исключительных случаях)
По степени нормы микробиологического загрязнения помещения в МО помещения :
• класс А особо чистые помещения -- количество микроорганизмов нормировано до и во время работы (операционные залы, послеоперационные палаты, реанимационные залы и палаты, палаты интенсивной терапии, родильные залы и др.)
• класс Б чистые помещения МО -- количество микроорганизмов нормировано до и во время работ (послеродовые палаты в родильных домах, асептические палаты для иммунно-компрометированных, послеродовые палаты с пребыванием матери и ребенка, палаты для новорожденных ...)
• класс В условно чистые помещения -- количество микроорганизмов не нормируется (инфекционные отделения, процедурные МРТ, залы лечебной физкультуры, процедурные, кабинеты врачей, кабинеты функциональной диагностики и др),
• класс Г - «грязные» помещения, общее количество микроорганизмов в данных помещениях не нормируется (вестибюль, регистратура, справочные, гардеробная, др),.
санітарно-показові мікроорганізми повітря закритих приміщень:
1. Общее содержание микроорганизмов в 1 м3 воздуха. Норматив: допустимо присутствие не более 3 КОЕ неспорообразующих сапрофитов на чашках.
2. Содержание золотистого стафилококка (S.aureus) в 1 м3 воздуха. Норматив: в воздухе помещений класса чистоты А и Б общее количество микроорганизмов должно находится в допустимых пределах, золотистого стафилококка не должно быть. Санитарное состояние воздуха помещений классов чистоты В и Г не нормируется.
Методы микробиологического исследования воздуха подразделяют на седиментационные и аспирационные.
Естественная седиментация (по методу Коха) проводится в течение 15 мин путем осаждения микробов на поверхность твердой питательной среды в чашке Петри, после чего закрывают и термостатируют. По количеству выросших колоний подсчитывают микробное число воздуха. Для определения патогенных стафилококков берут чашки с желточно-солевым агаром и выдерживают 15 минут, для определения стрептококков используют чашки с кровяным агаром, для определения плесневых и дрожжевых грибов – среду Сабуро, для определения грамотрицательных неферментирующих бактерий – чашки с МПА или ЦПХ-агаром, выдерживают открытыми 2 часа. После экспозиции чашки закрывают, переворачивают, помещают в термостат и инкубируют при температуре 370С в течение 24 часов. После инкубации проводят учет количества выросших колоний микроорганизмов и при необходимости проводят идентификацию до рода и вида.
Принудительная седиментация микробов осуществляется путем «посева» проб воздуха на питательные среды с помощью специальных пробоотборников. При этом микробы, находящиеся в воздухе, оседают на поверхности питательной среды и при дальнейшей инкубации дают изолированные колонии, количество которых подсчитывается.
Наиболее точными являются аспирационные методы исследования воздуха, основанные на фильтрации или аспирации (просасывании) воздуха через специальные фильтры, жидкости, порошки, адсорбирующие микрофлору.
9. Санітарна вірусологія, предмет, завдання, значення санітарної вірусології в діяльності лікаря.
Вирусология санитарная, это раздел вирусологии, разрабатывающий методы выявления патогенных и условно-патогенных вирусов в окружающей среде, главным образом в воде, почве, воздухе и пищевых продуктах.
10.Роль води, грунту, повітря у передачі збудників вірусних інфекцій. Віруси, які найчастіше знаходять в об'єктах навколишнього середовища.
Вода, почва и воздух могут играть важную роль в передаче вирусных инфекций. Вот как:
Вода: Вирусы могут быть присутствовать в воде, особенно в загрязненных и неочищенных водоисточниках. Контакт с загрязненной водой или употребление такой воды может привести к заражению вирусами, такими как вирус гепатита А или ротавирус.
Грунт: Некоторые вирусы могут выживать в почве в течение длительного времени, особенно при благоприятных условиях. Контакт с загрязненной почвой или употребление продуктов, выращенных на такой почве, может быть источником инфекции. Например, вирус гепатита Е может быть передан через загрязненные продукты.
Воздух: Некоторые вирусы могут распространяться через воздушно-капельный путь при кашле, чихании или разговоре инфицированных людей. Капельки, содержащие вирус, могут оставаться в воздухе и быть вдыхаемыми другими людьми, что приводит к заражению. Например, вирус гриппа и вирус коронавируса SARS-CoV-2 распространяются таким путем.
11.Санітарно-вірусологічне дослідження води. Відбір проб, методи концентрації. Віруси, бактеріофаги в питних і стічних водах. Методи визначення.
Основными объектами санитарно-вирусологического исследования являются:
- сточные воды;
- сточные воды на этапах очистки и обеззараживания;
- вода открытых водоемов, используемых в качестве источников водоснабжения;
- водопроводная вода;
- вода подземных источников;
- питьевая вода в разводящей водопроводной сети;
- вода питьевая доочищенная;
- вода питьевая бутилированная;
- вода морских и пресных водоемов, используемых для рекреационных нужд;
- вода плавательных бассейнов и аквапарков.
Отбор проб воды осуществляют, соблюдая общие требования, обеспечивающие сохранность вирусов в пробе и не допускающие загрязнения вторичной микрофлорой. Пробы отбирает проинструктированный работник лаборатории, работающий в медицинском халате (спецодежде) и латексных или резиновых перчатках. После отбора проб перчатки обрабатывают 70% этиловым спиртом, по завершении работы – халаты и перчатки подлежат стерилизации. Полученный материал маркируют, заполняют направление исследования, указывая место (населенный пункт), точку отбора, название пробы и дату (число, месяц, год). Срок доставки материала в лабораторию не должен превышать 6 часов с момента его отбора. Пробы воды доставляют в лабораторию, соблюдая правила холодовой цепи (с холодовыми элементами в сумках – холодильниках, пластиковых коробках и т.п.). Доставленный материал обрабатывают в лаборатории в первые часы с момента его поступления. Если в этот день нельзя провести исследование, можно хранить доставленные пробы при температуре +4 ± 0,1° C в течение суток. Каждая проба обязательно регистрируется в рабочем журнале.
Отбор проб сточной воды
Местами отбора проб сточных вод есть смотровые колодцы, открытые части коллектора, а также очистные сооружения до и после очистки.
Есть два принципиально хороших меж собой метода отбора проб воды. Первый способ можно определить как "захват" (grab), а второй - как "засада" или "ловушка" (trap). При первом способе отбор проб воды производится одномоментно в определенный промежуток времени в стерильную посуду. Пробы вторым способом отбираются с предварительной адсорбцией вирусов непосредственно в воде изучаемого объекта. Такой способ отбора проб еще называется адсорбционным и осуществляется с помощью марлевых тампонов по Moore и пакетиков, заполненных адсорбирующим материалом (с ионообменными смолами, макропористым стеклом, активированным углем, бентонитом и т.п.).
Отбор проб питьевой воды
Питьевую воду отбирают непосредственно в стерильную посуду без применения резиновых (латексных) шлангов, водораспределительных сеток или насадок. Перед отбором проб кран конечного участка периферийной водоснабжающей сети (или отводящий кран на этапе обработки воды на водозаборных сооружениях) трижды фламбируют воспаленным спиртовым факелом и спускают воду в течение 10-15 мин. при полностью открытом кране. Объем одной пробы – 10 л.
Методы концентрации вирусов из воды можно условно разделить на группы:
- физические (ультрацентрифугирование, фильтрация, ультрафильтрация, пенная флотация, электрофорез и электроосмос)
- физико-химические (осаждение с помощью сульфата аммония, сульфата алюминия, концентрация полиэтиленгликолем, двухфазный метод с применением ПЭГ 6000 и декстрана T40 Amersham-Pharmacia и др.);
- адсорбционные (адсорбция на марлевых тампонах, активированных углях, природных минеральных сорбентах - бентоните, асканите и др., на ионообменных смолах, аминоэтоксиаэросили, полиметилксилоксане, макропористом стекле, двухфазный метод и др.).
12.Роль повітряного середовища в поширенні збудників респіраторних вірусних інфекцій. Методи відбору проб повітря і індикації респіраторних вірусів.
Для определения содержания вируса в воздухе камеры производят отбор проб воздуха с помощью аспиратора любой системы (например, насоса). Отбираемые пробы воздуха со скоростью 2-5 л/мин пропускают через прибор Дьяконова или др., в который наливают 5 мл стерильного раствора Хенкса с антибиотиками. После чего этой жидкостью заражают по 4 пробирки с монослоем клеточной культуры. Количество вирусов в пробах определяют титрованием. После инфицирования воздуха в камеру распыляют растворы препаратов с помощью разной распыляющей аппаратуры. Исследования проводятся по трем показателям относительной влажности воздуха: (20-25%, 50-55% и 80-85%) и температуре воздуха в пределах от 19 до 22 град.С.
