3. Принцип фазово-контрастної мікроскопії, необхідне обладнання.

Фазово-контрастная микроскопия добавляет контраст, учитывая различия в фазе света, вызванные изменениями плотности в объекте. С помощью фазово-контрастного устройства фазовые изменения световых волн, проходящих через прозрачные объекты, превращаются в амплитудные, благодаря чему детали рассматриваемых объектов становятся видимыми и контрастными.

Для чого використовується цей метод мікроскопії?

Дает возможность изучать живые объекты прозрачные и бесцветные.

4. Принцип дії люмінесцентної мікроскопії.

Основана на явлении люминесценции (флюоресценции). При люминесцентной микроскопии используют как естественную (первичную, собственную) люминесценцию микробов, так и искусственную (вторичную, наведенную) люминесценцию.

В люминесцентном микроскопе имеется система светофильтров, пропускающих определенные лучи и задерживающих остальные. Первый (возбуждающий) светофильтр помещают перед конденсором. Он пропускает от источника УФ-излучения (ртутно-кварцевой лампы) только те лучи, которые возбуждают люминесценцию (сине-фиолетовые или ультрафиолетовые лучи). Второй (пропускающий) светофильтр устанавливают после объектива (в тубусе или в окуляре). Он поглощает возбуждающие лучи (сине-фиолетовые или ультрафиолетовые) и пропускает только свет люминесценции изучаемого объекта.

Для чого використовується люмінесцентна мікроскопія.

Люминесцентная микроскопия позволяет изучать клетки в живом виде, выявлять мембранные структуры и получать высококонтрастные цветные изображения микроорганизмов.

5. Будова електронного мікроскопа і принципи електронної мікроскопії.

Электронная микроскопия используется для изучения субклеточных структур микроорганизмов. В электронном микроскопе освещение исследуемых объектов проводится не световыми лучами, а потоком электронов.

Целые бактериальные клетки непроницаемы для электронов. Для их исследования в электронном микроскопе используют ультратонкие срезы.

Электронный микроскоп состоит из колонны, стенда, вакуумной системы, пультов управления и блоков питающей системы.

Морфологія бактерій. Прості методи фарбування

Завдання №1. Які з названих органоїдів входять до складу як еукаріотичних, так і клітини прокаріотів: а) клітинна стінка, б) цитоплазматична мембрана, в) мезосома, г) джгутики, д) вії, е) мітохондрії, ж) пластиди, з) цитоплазма, і) ядро, і) лізосоми, і) комплекс Гольджі, к) рибосоми, л) ендоплазматична сітка, м) включення.

	Прокариоты	Эукариоты
Клітинна стінка	Пептидогликан (бывает капсула)	Содержит целлюлозу, хитин, хитинозан
Цитоплазматична мембрана	Под КС	Фосфолипиды х2
Мезосома	Прообраз митохондрий (впячивания ЦМ)	Нет
Джгутики (150 мкм)	Простое: белок флагеллин	Сложное: каждый жгутик состоит из 20 фибрилл-микротрубочек
Вії ( 5-10 мкм)	Есть. Тоже самое, но меньше	Есть
Мітохондрії	Нет	Есть
Пластиди	Нет	есть
Ядро	Нуклеоид в виде кольца	Ядро (+оболочка), ядрышко, хромосомы,
Лізосоми	Нет	Есть
Комплекс Гольджі	Нет	Есть
Рибосоми	Цитоплазматические 70S	Митохондриальные 70S, цитоплазматические 80S
Ендоплазматична сітка	Нет	Есть
Включення	Содержат запасные вещества в виде гранул полифосфатов, гранул углеводов, жировых капель, которые являются источниками энергии и (или) питательных веществ. Внутри клетки могут находиться газовые пузырьки	Жировые капли, пигментные гранулы

*Ворсинки (фимбрии и пили) имеются у многих как грамот-рицательных, так и грамположительных бактерий, состоят из белка пилина. Они короче и тоньше жгутиков и, следовательно, видны только в электронном микроскопе. По своим функциям ворсинки подразделяются на половые пили (F-пили), обеспечивающие конъюгацию между бактериями, и фимбрии общего порядка, которым присуща функция адгезии, то есть, они играют важную роль в процессах взаимодействия бактерий с макроорганизмом

Завдання №2. Назвіть основні форми клітин. 3. Основні форми бактерій.

Выделяют 3 основные формы бактерий:

1. Шаровидные/сферические бактерии (кокки) -- 0,5-1,0 мкм

   1. Микрококки – шары по одному

   2. Диплококки – по парочкам (пневмококки, гонококки, менингококки)

   3. Стрептококки – цепочка

   4. Тетракокки – по четверо

   5. Сарцины -- 8-16 особей

   6. Стафилококки -- грозди винограда.

2. Палочковидные бактерии – цилиндр 1,0 до 10 мкм

   1. Эшерихии – эталон

   2. Коринебактерии

   3. Клостридии – спорообразующее веретена/барабанной палочки

   4. Вибрионы -- изогнутые палочки, имеют форму запятой и один мощный жгутик (холерный вибрион)

   5. Микобактерии -- под углом друг к другу или в виде жгутов

   6. Стрептобациллы – спорообразующие цепочки

3. Извитые и S-образные бактерии – спираль в несколько оборотов

   1. Спирохеты – подвижные кудри

   2. Спириллы -- штопор

Завдання №3. В яких випадках використовують хімічні методи фіксації? Завдання 5. У яких випадках використовують хімічні методи фіксації?

Можно изучать живые и мертвые бактерии.

Препараты живых микробов используют для изучения размеров, формы клеток, их подвижности и других признаков. Микробы в этих препаратах находятся в естественном, неизмененном состоянии. Микроскопирование микробов в живом состоянии имеет такие недостатки как низкая контрастность живых клеток и невозможность длительного наблюдения за микробной клеткой в связи с ее быстрым перемещением в поле зрения в результате активной подвижности некоторых бактерий или в связи с броуновским движением жидкости. После завершения микроскопирования живых патогенных бактерий препарат обязательно погружают в емкость с дезинфицирующим раствором.

Препарат “раздавленная капля”
Препарат “висячая капля”.

Мертвые организмы окрашиваются и фиксируются. Фиксируются термически или химически. Фиксированные и окрашенные препараты микробов не опасны, сохраняются без изменений в течение нескольких недель.

Химический способ фиксации препарата.

1. Высушенный препарат помещают в стаканчик с фиксирующей жидкостью (эфир, этиловый или метиловый спирт, смесь спирта с эфиром) или 1-2 капли фиксирующей жидкости наносят на препарат. Экспозиция - 3-5 минут.

2. Промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.

3. После фиксации с обратной стороны мазка восковым карандашом или маркером обводят границу (зону) препарата, чтобы после окраски точно знать место его нахождения.