8. Методи визначення чутливості бактерій до антибіотиків.

1. Метод серийных разведений в жидких средах и в плотных. АБ уже в среде и мы хотим понять при какой его конц. МО не будут расти.

В жидкие среды с серийными разведениями антибиотиков вносят исследуемую культуру, инкубируют посевы 10-18 часов при 37°С. Узнаем минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) – пробирка с наименьшим кол-вом АБ и с видимым отсутствием роста МО. Делают посев из пробирки на пит.среду и узнают (МБК) минимальная бактерицидная концентрация -- концентрация АБ, при которой рост м/о на питательной среде отсутствует.

2. Диффузионные методы.

1. Классический метод. На питательную среду в чашке Петри наносят исследуемую культуру и равномерно ее распределяют ее по поверхности среды. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемого антибиотика, после чего инкубируют при 37°С. После инкубирования в оптимальных условиях измеряют диаметр зоны подавления роста для каждого препарата.

2. Метод дисков (диско-диффузионный метод). Позволяют определять чувствительность бактерий к нескольким антибиотикам одновременно.

Питательные среды: среда Гивенталя-Ведьминой (среда АГВ), среда Мюллера Хинтона

Для требовательных м/о вносят ростовые добавки: кровь, сыворотка крови.

NB: добавление глюкозы недопустимо!

Этапы:

1) Приготовление чашек: чашки подсушивают, на дне чашки отмечают места наложения дисков

2) Приготовление инокулята:

• Его готовят из чистой 18-20-часовой культуры бактерий, выросшей с помощью посева на поверхности плотной питательной среды;

• Исследуемую культуру смывают стерильным изотоническим раствором NaCl;

• Суспензию разводят изотоническим раствором NaCl до мутности оптического стандарта по Тарасевичу на 10 ед. или по Мак-Фарланду = 0,5 степень мутности

3) инокулят объёмом 1 мл наносят на поверхность агаровой среды.

4) инокулята распределяют по поверхности среды шпателем или путем покачивания чашки.

5) с помощью пастеровской пипетки + чашки выдерживают при комнатной температуре 10-15 мин. для полного впитывания суспензии (т.к. перед наложением дисков поверхность среды должна быть сухой).

6) Наложение дисков: диски (с АБ) с помощью пинцета накладывают на поверхность агара на одинаковом расстоянии один от другого и примерно на расстоянии 2 см от края чашки. На одну чашку не более 6 дисков.

7) Инкубация: чашки ставят в термостат сразу после наложения дисков и инкубируют в течение 18-20 часов при 37 °С, перевернутыми кверху дном.

8) Учёт результатов: чашки помещают кверху дном на темную матовую поверхность так, чтобы свет падал на чашку под углом 45° (учет в отраженном свете).

• С помощью линейки измеряют диаметр зон задержки роста вокруг дисков, включая диаметр самих дисков.

• При не резко очерченном крае зоны или зоне с двойным контуром следует измеряем диаметр зоны по наиболее четкому

3. Е-тест (модификацию метода дисков). Помещают полоску с АБ на поверхность агара с бактериальной культурой и смотрят, как далеко убегают МО

EUCAST.

Европейский комитет по тестированию на чувствительность к противомикробным препаратам — это научный комитет, разрабатывающий рекомендации по интерпретации устойчивости к противомикробным препаратам.