7. Методи виявлення (індикації) вірусів за цитопатичної дії (цпд). 8. Реакції гемаглютинації і гемадсорбції, бляшкоутворення, внутрішньоклітинні включення. 9. Методи ідентифікації вірусів

1. Цитопатическое действие (ЦПД) или цитопатический эффект (ЦПЭ) вирусов представляет собой патологические изменения морфологии клеток вплоть до их гибели в результате репродукции вирусов. Для обнаружения ЦПД культуры клеток просматривают под малым увеличением светового микроскопа. ЦПД проявляется фрагментацией клеток, вакуолизацией цитоплазмы, разрушением митохондрий, образованием симпластов (формированием гигантских многоядерных клеток) и округлением клеток

2. Образование внутриклеточных включений. Внутриядерные включения, цитоплазматические включения. Они представляют собой скопления вирусных частиц. Их выявляют с помощью светового или люминесцентного микроскопа после окрашивания зараженных клеток анилиновыми красителями или флюорохромами.

3. Образование бляшек (негативных колоний) под агаровым покрытием. Бляшки представляют собой обесцвеченные участки культуры, состоящие из погибших под действием вируса клеток.

4. Реакция гемадсорбции. РГАд. Гемадсорбция - соединение эритроцитов с поверхностью пораженных вирусом клеток.

Методика РГАд

Состоит в следующем. На 3—4-й день после инфицирования клеток берут две пробирки с одинаковой культурой клеток, из которых одна заражена вируссодержащим материалом, а вторая контрольная. Из обеих пробирок сливают культуральную жидкость и вносят в обе по 2—3 капли 0,5%-ной суспензии отмытых эритроцитов. Обе пробирки оставляют на 5—10 мин так, чтобы эритроциты были на поверхности клеток (кладут горизонтально на стол), а затем слегка споласкивают физраствором и исследуют под микроскопом (малое увеличение). В контрольной пробирке эритроциты полностью удаляются с физраствором, а некоторые из оставшихся плывут вместе с жидкостью. Если в зараженной пробирке эритроциты не удалились с физраствором и не плывут, а прикреплены к поверхности клеток, следует считать РГАд положительной

5. Цветная реакция регистрируется по изменению цвета индикатора, находящегося в питательной среде для культур клеток. Если вирусы не размножаются в культуре клеток, то живые клетки в процессе своего метаболизма выделяют кислые продукты, изменяющие цвет индикатора. При репродукции вирусов нормальный метаболизм клеток нарушается и клетки погибают, в результате чего среда сохраняет первоначальный цвет индикатора

Мікробіологічні основи стерилізації і дезінфекції. Поняття про асептику і антисептику

1. Механізм дії на мікроби високих і низьких температур, тиску, ультразвуку, різних видів променевої енергії, рН, рО, рСо2, осмотичного тиску і різних груп хімічних сполук.

Высокая температура: путем денатурации белков и разрушения клеточных мембран.

Низкая температура: замедляют или приводят к прекращению роста и размножению микробов

Давление: влиять на структуру и функции клеточных мембран, что может вызвать их разрушение и смерть микробов.

Ультразвук: лопающиеся микроскопические пузырьки в жидкости и создают шоковые волны, которые могут разрушать клеточные структуры микробов.

Лучевая энергия (УФ, гамма, Х-лучи): повреждать ДНК микробов, что приводит к их мутации и смерти.

pH раствора (рН): функции ферментов и других биомолекул в микробах, что может вызвать их денатурацию и смерть.

Концентрация кислорода (РО): влиять на дыхание и другие процессы в микробных клетках.

Концентрация углекислого газа (рСО2): Высокие уровни СО2 могут угнетать рост и развитие микробов, тогда как низкие уровни могут быть вредными для некоторых видов.

Осмотическое давление: дегидратации микробных клеток из-за удаления воды из них.

Химические соединения: денатурацию белков, разрушение клеточных мембран, ингибирование ферментативных реакций и т.д.