Явище лізогенії. Фагова конверсія

Лизогения – симбиоз микроба с умеренным фагом, т.е различных штаммов бактерий несут в себе геном фага бесчиленное количество поколений. Он синхронно реплисируется вместе с геном бактерий, при этом клетки бактерий не лизируются, но может возникнуть лизис в определенных условиях. Такие бактерии называют лизигенными. Свойства лизигенных бактерий отличаются, так как под влиянием генома бф появляются новые гены. Такие изменения вызваны бф-называется фаговая конверсия.

Примеры фаговой конверсии:

1. Бактерия устойчива к повторяющемуся заражению бф.

2. У микробов возникают под действием гена бф следующие характеристики:

а. выделение экзотоксина-токсигенности у возбудителя дифтерии;

б. стойкость к антибиотикам;

с. изменение антигенных свойств

5. Практичне застосування фага. Фагодіагностика (рнтф, фаготипування), фагопрофілактика і терапія.

Фаготипирование – в чашку петри где есть культуры МО капают фагами. Если фаг эффективен на эту бактерию, появляется пятно, нет, культура остается без изминений.

Фагопрофилактика – предупреждение бактериальных инфекций путем применения бактериофагов. Бактериофаг в профилактических целях используется только при точном установлении вида бактерии – возбудителя заболевания.

Фаготерапия – лечение бактериальных заболеваний с помощью фагов, если АБ не помогают.

Фагодиагностика -- выявление бактериофагов (например, фагов кишечной палочки, холерного вибриона) в объектах окружающей среды (в воде) косвенно указывает на присутствие патогенных бактерий, что свидетельствует о эпидемическом неблагополучии

6. Методи культивування вірусів в клітинних культурах, в курячому ембріоні і в організмі тварин.

Культивирование вирусов осуществляют в трех биологических системах:

в организме лабораторных животных; В вирусологических исследованиях используют белых мышей, белых крыс, морских свинок, золотистых хомячков, кроликов и других лабораторных животных. Лабораторных животных заражают вируссодержащим материалом различными способами (подкожно, внутримышечно, внутривенно, интраназально, интрацеребрально и т. д.). Способ заражения выбирают в зависимости от тропизма (избирательности поражения тканей) вирусов. О репродукции вирусов в организме животных судят по развитию у них видимых клинических проявлений заболевания, патоморфологическим изменениям органов и тканей, а также на основании реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией из органов, содержащих вирусы. РГА основана на способности многих вирусов вызывать склеивание (агглютинацию) эритроцитов человека, птиц и млекопитающих в результате взаимодействия вирусных белков (гемагглютининов) с рецепторами эритроцитов.

в развивающихся куриных эмбрионах; Развивающиеся куриные эмбрионы (РКЭ) в вирусологических исследованиях используют в возрасте 5-12 дней. С использованием развивающихся куриных эмбрионов возможно приготовить большое количество вируссодержащего материала, что особенно важно в производстве вакцин или других лечебно-профилактических препаратов. Способы заражения РКЭ:

- на ХАО;

- в аллантоисную полость;

- в амниотическую полость;

- в желточный мешок;

- в тело эмбриона.

Признаками репродукции вирусов в РКЭ является гибель эмбриона, патологоанатомические изменения в оболочках и тканях эмбриона (оспины, кровоизлияния), положительная реакция гемагглютинации. О гибели свидетельствует прекращение движений эмбриона, выявляемое при их овоскопировании, то есть просвечивании. Погибшие эмбрионы вскрывают, содержимое извлекают (рисунок 6.35) и проводят патологоанатомическое исследование. Эмбриональную жидкость смешивают с эритроцитами для определения гемагглютинации.

в культурах клеток. Клеточную культуру получают из органов и тканей человека, животных, птиц.

При выращивании клеточных культур необходимо выполнять следующие условия:

• соблюдать правила асептики;

• использовать лабораторную посуду из нейтрального стекла;

• использовать сложные по составу питательных сред, содержащие минеральные соли, аминокислоты, витамины, глюкозу, сыворотку крови животных или человека, буферные растворы;

• добавлять к питательной среде антибиотики для подавления роста посторонних микробов;

• соблюдать оптимальную температуру культивирования (36-38,5ОС).

По способу культивирования:

1. Однослойные (монослойные) культуры клеток – клетки способны прикрепляться и размножаться на поверхности химически нейтрального стекла лабораторной посуды в виде монослоя.

2. Суспензионные культуры клеток – клетки способны размножаться во всем объеме питательной среды при постоянном ее перемешивании. Модификацией этого метода является проточное культивирование, при котором в специальный аппарат непрерывно добавляют свежую питательную среду и удаляют отработанную.

3. Смешанные культуры клеток – способны культивироваться как на поверхности подложки, так и в суспензии.

По способу получения культуры клеток:

1. Органные культуры – цельные кусочки органов и тканей, сохраняющие исходную структуру вне организма.

2. Первичные культуры клеток способны размножаться только в первых генерациях, то есть выдерживают не более 5-10 пассажей после выделения из тканей. Первичные культуры получают путем обработки кусочков тканей (нормальной, опухолевой, эмбриональной) протеолитическими ферментами (трипсином, коллагеназой), которые разрушают межклеточные связи в тканях с образованием изолированных клеток. Разобщенные клетки помещают в питательную среду и вносят в стеклянный сосуд. Клетки прикрепляются к стенке сосуда и размножаются, образуя монослой (слой толщиной в одну клетку). С помощью специальных веществ (трипсина, версена) клетки можно снять с поверхности сосуда и перенести в другой. Такая манипуляция называется пассажем. К первичным клеточным культурам относятся культуры фибробластов эмбриона человека (ФЭЧ), клетки почек человека (КПЧ) и др.

3. Полуперевиваемые (диплоидные) культуры клеток имеют ограниченную продолжительность жизни и выдерживают 40-50 пассажей. Их получают обычно из диплоидных клеток эмбриона человека. В процессе пассажей они сохраняют диплоидный набор хромосом и не претерпевают злокачественной трансформации. В частности, к полуперевиваемым культурам клеток относится культура легких эмбриона человека

4. Перевиваемые (стабильные, пассажные) культуры клеток выдерживают многочисленные пассажи и способны размножаться в лабораторных условиях десятки лет. Их получают преимущественно из опухолевых тканей. По сравнению с первичной культурой перевиваемая культура имеет продолжительный срок культивирования и высокую скорость размножения. К числу перевиваемых относятся культуры клеток карциномы шейки матки (HeLa), раковой опухоли гортани (HEp-2) и др.