8. Методи культивування анаеробних бактерій.

При культивировании анаэробных бактерий требуется создание условий с пониженным содержанием кислорода или его отсутствием. Для культивирования анаэробов применяют физические, химические и биологические методы.

Физические методы

1. Кипячение среды – наиболее простой способ удаления растворенного в ней кислорода. Для этого непосредственно перед посевом материала пробирки с питательными средами кипятят на водяной бане в течение 10-20 мин, в результате чего из среды вытесняется воздух и, следовательно, удаляется кислород. Свежепрокипячённую среду быстро охлаждают под струёй холодной воды, чтобы не произошло насыщение ее кислородом воздуха. Среду засевают материалом и заливают сверху вазелиновым маслом.

2. Среда Китта-Тароцци. Содержит мясо-пептонный бульон (МПБ), 0,5% глюкозы и 0,15% агара. На дно пробирки для удаления О2 помещают кусочки вареной печени или фарша слоем 1-1,5 см и заливают 6-7 мл среды, прогревают 15-20 мин на водяной бане, а затем быстро охлаждают. Засевают, потом заливают вазелиновым маслом и помещают в термостат.

3. Метод Вейон-Виньяла. Расплавленный в пробирке и охлаждённый до 50 ° питатель­ный агар засевают исследуемым материалом, тщательно перемешивают и натягива­ют его в пипетку Пастера. После застывания среды запаивают пипетку с обоих кон­цов или заливают концы парафином и помещают в термостат. Внутри трубки разви­ваются отдельные колонии анаэробов. Для выделения колонии трубку надрезают напильником, соблюдая правила асептики, на уровне колонии, ломают, а колонию захватывают стерильной петлёй и переносят в пробирку с питательной средой для дальнейшего выращивания и изучения в чистом виде.

4. Среду Вильсона-Блера готовят из мясо-пептонного агара к которому добавляют глюкозу, Na2SОз, хлористое железо-- FeC1з. На этой среде анаэробные микроорганизмы, возбудители газовой анаэробной инфекции, столбняка, ботулизма растут в глубине агара. При этом осуществляется восстановление сернистокислого натрия до сернистого, последний же вступает в реакцию с хлорным железом, переводя его в сернистое железо, имеющее черный цвет. Наблюдается в пробирках и разрыв среды, свидетельствую­щий об газообразовании.

5. Создание вакуума в специальных аппаратах (анаэростатах), системах GasPak. Для инкубирования разных микроорганизмов применяют разные типы пакетов - разные системы GasPak

6. Метод “перевернутых чашек” представляет собой выращивание культуры на поверхности толстого слоя агара, разлитого в крышку чашки Петри. Сверху в крышку помещают донышко чашки и вдавливают его в агар. Щель между краями крышки и дном чашки Петри заливают расплавленным парафином.

7. Метод Перетца состоит в том, что культуру выращивают в 0,5% расплавленном агаре в чашке Петри под стеклянной пластинкой, расположенной на двух стеклянных или деревянных палочках

Химический метод

Метод Аристовского. Материал, исследуемый на наличие анаэробов, засевают на среду в чашки Петри и помещают их в эксикатор, на дно которого кладут химический поглотитель кислорода: гидросульфит натрия или пирогаллол. В расширенную часть сосуда устанав­ливают на подставке чашки с посевами. Прибор помещают в термостат при темпе­ратуре 37 °С на 24-48 часов.

Биологический метод

метод Фортнера – совместное выращивание на одной чашке аэробных и анаэробных бактерий. Для этого пластинку питательного агара в чашке Петри разделяют канавкой на 2 части. На одной половине высевают штрихом аэробные бактерии, а на другой – анаэробные бактерии. Между крышкой и дном чашки заливают парафин. Вначале вырастают аэробы, которые используют кислород, а затем начинают размножаться анаэробные бактерии