Кишкун А.А

372 ■ Глава 7

Повышение соотношения CD4/CD8 (до 3) нередко отмечают в острой фазе различных воспалительных заболеваний, за счёт повышения количества Т-хелперов и снижения Т-супрессоров. В середине воспалительного заболевания отмечают медленное снижение содержания Т-хелперов и повышение Т-супрессоров. При стихании воспалительного процесса эти показатели и их соотношения нормализуются. Повышение соотношения CD4/CD8 характерно практически для всех аутоиммунных заболеваний: гемолитической анемии, иммунной тромбоцитопении, тиреоидита Хашимото, пернициозной анемии, синдрома Гудпасчера, СКВ, ревматоидного артрита. Увеличение соотношения CD4/CD8 за счёт снижения количества CD8-лимфоцитов при перечисленных заболеваниях выявляют обычно при обострении и высокой активности процесса. Снижение соотношения CD4/CD8 из-за увеличения количества CD8-лимфоцитов характерно для ряда опухолей, в частности саркомы Капоши. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD4-лимфоцитов в крови, представлены в табл. 7-18.

Таблица 7-18. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD4 в крови

Т-ЛИМФОЦИТЫ-СУПРЕССОРЫ (CD8) В КРОВИ

В норме относительное количество Т-лимфоцитов-супрессоров в крови

увзрослых составляет 17−37%, абсолютное количество — 0,3−0,7×109/л. Т-лимфоциты-супрессоры угнетают иммунный ответ организма, они

тормозят выработку АТ (различных классов) вследствие задержки пролиферации и дифференцировки В-лимфоцитов, а также развитие гиперчувствительности замедленного типа. При нормальном иммунном ответе на попадание в организм чужеродного Аг максимальная активация Т-супрес- соров отмечается спустя 3−4 нед. Увеличение количества CD8-лимфоцитов

Иммунологические исследования ■ 373

в крови свидетельствует о недостаточности иммунитета, снижение — о гиперактивности иммунной системы. Ведущее значение в оценке состояния иммунной системы имеет соотношение хелперов и супрессоров в периферической крови — индекс CD4/CD8. Снижение функции Т-супрессоров ведёт к преобладанию стимулирующего влияния Т-хелперов, в том числе и на те В-лимфоциты, которые продуцируют «нормальные» аутоантитела. При этом их количество может достигнуть критического уровня, что способно вызвать повреждение собственных тканей организма. Данный механизм повреждения характерен для развития ревматоидного артрита и СКВ. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD8-лим- фоцитов в крови, представлены в табл. 7-19.

Таблица 7-19. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD8-лимфоцитов в крови

NK-ЛИМФОЦИТЫ (CD16) В КРОВИ

В норме количество CD16-лимфоцитов в крови у взрослых составляет 6−26%. CD16-лимфоциты — клетки-эффекторы, ответственные за противоопухолевый, противовирусный и трансплантационный иммунитет. NK-клет- ки — отдельная популяция лимфоцитов, они отличаются от Т- и В-лим- фоцитов как по происхождению, так и по функциональным свойствам

иповерхностным рецепторам (у человека существуют 2 субпопуляции — CD16 и CD56). Они обладают спонтанной цитотоксической активностью против различных опухолевых клеток, клеток, инфицированных вирусами,

инекоторых нормальных клеток, обеспечивая первый уровень защиты против опухолей и внутриклеточных инфекций до включения специфических иммунных механизмов. В отличие от других цитотоксических клеток NKклетки опосредуют цитотоксические реакции без пресенсибилизации и без ограничений по экспрессии Аг классов I или II главного комплекса гистосовместимости на клетках-мишенях. Высокая цитотоксичность и способ-

374 ■ Глава 7

ность продуцировать многие цитокины — основные свойства CD16-лим- фоцитов. Снижение количества CD16-лимфоцитов приводит к развитию онкологических заболеваний и утяжелению течения вирусных инфекций, аутоиммунных заболеваний, повышение — к кризу отторжения пересаженных органов у реципиентов. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD16-лимфоцитов в крови, представлены в табл. 7-20.

Таблица 7-20. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD16-лимфоцитов в крови

Т-ЛИМФОЦИТЫ С РЕЦЕПТОРАМИ К ИНТЕРЛЕЙКИНУ-2 (CD25) В КРОВИ

В норме количество СД25-лимфоцитов в крови у взрослых составляет 13−24%. CD25 — активированные Т-лимфоциты, стимулирующие антителообразование и цитотоксичность. Этот показатель отражает способность лимфоцитов к пролиферации и дифференцировке и характеризует функциональное состояние активированных Т-лимфоцитов. Сниженное количество свидетельствует об иммунологической недостаточности клеточного звена иммунитета. При гиперактивности иммунитета количество этих клеток возрастает. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количест-

ва CD25-лимфоцитов в крови, представлены в табл. 7-21.

Таблица 7-21. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD25-лимфоцитов в крови

Иммунологические исследования ■ 375

NK-ЛИМФОЦИТЫ (CD56) В КРОВИ

В норме количество CD56-лимфоцитов в крови у взрослых составляет 9−19%. CD56-лимфоциты — клетки-эффекторы клеточного иммунитета, ответственные за противовирусный, противоопухолевый и трансплантационный иммунитет (см. выше CD16-лимфоциты). Снижение количества CD56лимфоцитов приводит к развитию онкологических заболеваний и утяжелению течения вирусных инфекций. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD56-лимфоцитов в крови, представлены

в табл. 7-22.

Таблица 7-22. Заболевания и состояния, приводящие к изменению количества CD56-лимфоцитов в крови

РЕАКЦИЯ ТОРМОЖЕНИЯ МИГРАЦИИ ЛЕЙКОЦИТОВ В КРОВИ

Величины реакции торможения миграции лейкоцитов в крови в норме: миграция с фитогемагглютинином (ФГА) — 20−80%, с конканавалином А (КонА) — 40−75%, со специфическим Аг — 80−120%.

Реакция торможения миграции лейкоцитов позволяет оценить способность Т-лимфоцитов к выработке лимфокинов в ответ на антигенную стимуляцию. Этот тест оценки функциональной активности Т-лимфоцитов может быть использован для диагностики иммунологической недостаточности (реакция с митогенами), гиперчувствительности (аллергии) замедленного типа (реакция со специфическим Аг или аллергеном). Реакция торможения миграции лейкоцитов может быть также использована для выявления иммунного ответа на возбудителей инфекций, для определения степени гистосовместимости и при опухолевых процессах.

Этот тест характеризует активность воспалительного процесса. Увеличение реакции торможения миграции лейкоцитов следует рассматривать как прогностически благоприятный фактор; клинически это сопровождается более быстрым выздоровлением больных острыми хирургическими заболеваниями после оперативного вмешательства и укорочением послеоперационного периода. Торможение миграции лейкоцитов может быть очень значительным при аллергических реакциях. Заболевания и состояния, приводящие к изменению реакции торможения миграции лейкоцитов, представлены в табл. 7-23.

376 ■ Глава 7

Таблица 7-23. Заболевания и состояния, приводящие к изменению реакции торможения миграции лейкоцитов

СПОНТАННАЯ РЕАКЦИЯ БЛАСТНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ

Величина спонтанной бластной трансформации лимфоцитов у взрослых

внорме — до 10%.

Спонтанная бластная трансформация лимфоцитов — способность лим-

фоцитов к трансформации без стимуляции. Исследование выполняют для оценки функциональной активности Т-лимфоцитов. Изменение показателей теста в ту или иную сторону свидетельствует о нарушении функциональной активности Т-лимфоцитов. Тест применяют для комплексной оценки иммунного статуса больного. Заболевания и состояния, при которых изменяется спонтанная бластная трансформация лимфоцитов, представлены в табл. 7-24.

Таблица 7-24. Заболевания и состояния, при которых изменяется спонтанная бластная трансформация лимфоцитов

Иммунологические исследования ■ 377

СТИМУЛИРОВАННАЯ РЕАКЦИЯ БЛАСТНОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ ЛИМФОЦИТОВ С МИТОГЕНАМИ

Величины стимулированной реакции бластной трансформации лимфоцитов

увзрослых в норме: с ФГА — 44−72%, с КонА — 40−75%.

Офункциональной активности Т- и В-лимфоцитов судят по реакции бластной трансформации лимфоцитов с использованием митогенов — ФГА, КонА, латекса, липополисахаридов и др.

Стимулированная бластная трансформация лимфоцитов с митогенами (ФГА, КонА) характеризует функциональную способность Т-лимфоцитов к трансформации и размножению под воздействием Аг, аллергенов и митогенов. Под воздействием митогенов Т-клетки превращаются в бласты и делятся в ответ на Аг, попавший в организм, то есть в ответ на митогены происходит увеличение количества Т-клеток. О функциональной активности В-лимфоцитов судят по бластной трансформации в ответ на стимуляцию липополисахаридом, а на стимуляцию митогеном латекса — о кооперативных процессах между Т- и В-лимфоцитами. Пролиферативный ответ лимфоцитов на Аг даёт представление о выраженности специфической сенсибилизации организма. Состояния и заболевания, приводящие к её изменению, аналогичны изменениям бластной трансформации лимфоцитов без стимуляции. Тест применяют для комплексной оценки иммунного статуса больного.

Неспецифические факторы иммунной защиты организма

Антигеннеспецифические факторы иммунной защиты организма принимают непосредственное участие во всех фазах иммунного ответа. Реактивность данной системы не дифференцирована по отношению к конкретному Аг и направлена против любых инфекционных и неинфекционных агентов. В системе антигеннеспецифической защиты организма можно выделить несколько важных звеньев:

■фагоцитоз;

■систему комплемента;

■систему белков острой фазы.

Определение состояния антигеннеспецифических факторов иммунной защиты организма имеет важное значение в комплексной оценке иммунного статуса. От состояния антигеннеспецифических защитно-приспособитель- ных механизмов зависит исход начальной стадии инфекционно-воспали- тельного процесса. Резкое и длительное их угнетение — неблагоприятный прогностический признак.

ФАГОЦИТОЗ

Фагоцитоз — поглощение клеткой крупных частиц, видимых в микроскоп (например, микроорганизмов, крупных вирусов, повреждённых тел клеток и т.д.). Процесс фагоцитоза можно подразделить на две фазы. В первой фазе частицы связываются на поверхности мембраны. Во второй фазе происходят собственно поглощение частицы и её дальнейшее разрушение. Различают две основные группы клеток фагоцитов — мононуклеарные и полинуклеарные. Полинуклеарные нейтрофилы составляют

378 ■ Глава 7

первую линию защиты от проникновения в организм разнообразных бактерий, грибов и простейших. Они уничтожают повреждённые и погибшие клетки, участвуют в процессе удаления старых эритроцитов и очистки раневой поверхности.

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям. Исследование системы фагоцитоза помогает в диагностике вторичных иммунодефицитных состояний, вызванных лекарственной терапией. Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершённости фагоцитоза.

Фагоцитарная активность нейтрофилов

Параметры, характеризующие состояние фагоцитоза.

■Фагоцитарное число: норма — 5−10 микробных частиц. Фагоцитарное число — среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофилом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов.

■Фагоцитарная ёмкость крови: норма — 12,5−25×109 на 1 л крови. Фагоцитарная ёмкость крови — количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

■Фагоцитарный показатель: норма 65−95%. Фагоцитарный показатель — относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

■Количество активных фагоцитов: норма — 1,6−5,0×109 в 1 л крови. Количество активных фагоцитов — абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

■Индекс завершённости фагоцитоза: норма — более 1. Индекс завершен-

ности фагоцитоза отражает переваривающую способность фагоцитов. Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Её снижение ведёт к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комп-

лексов из организма.

Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов, представлены в табл. 7-25.

Таблица 7-25. Заболевания и состояния, при которых изменяется фагоцитарная активность нейтрофилов

380 ■ Глава 7

Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы, вторичных и первичных иммунодефицитов, ВИЧ-инфекции, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, стрессов, недостаточности питания, лечения цитостатиками и иммунодепрессантами, воздействия ионизирующего излучения.

Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие бактериального воспаления (продромальный период, период острого проявления инфекции при нормальной активности фагоцитоза), хроническом гранулематозе, лейкоцитозе, усилении антителозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.

Активированный тест с НСТ

В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40−80%.

Активированный тест с НСТ позволяет оценить функциональный резерв кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов. Тест используют для выявления резервных возможностей внутриклеточных систем фагоцитов. При сохранённой внутриклеточной антибактериальной активности в фагоцитах происходит резкое возрастание количества формазанположительных нейтрофилов после их стимуляции латексом. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.

СИСТЕМА КОМПЛЕМЕНТА

Система комплемента состоит из 9 последовательно активирующихся компонентов и 3 ингибиторов. Эта система играет важную роль, особенно при воспалении и в развитии устойчивости организма к инфекционным агентам. Для того чтобы произошел лизис бактериальной или иной клетки, необходима активация от С3 до С9 компонентов системы комплемента по классическому либо альтернативному пути. Система комплемента имеет большое значение не только в процессах цитолиза, но и в усилении фагоцитоза, нейтрализации вирусов, а также в иммунной адгезии, за счёт которой к некоторым клеткам, включая и В-лимфоциты, прикрепляются комплексы Аг−АТ.

Дефекты в системе комплемента сопровождаются снижением антиинфекционной резистентности организма.

Одновременное определение 3 показателей — С3, С4 компонентов и титра комплементной активности позволяет оценить состояние как классического, так и альтернативного путей активации. Потребление комплемента по классическому пути (иммунные комплексы) сопровождается снижением всех трех показателей. При активации комплемента по альтернативному пути (например, при гломерулонефрите) С3 и титр комплементной активности снижены, а С4 (компонент классического каскада) остаётся в норме. Определение титра комплементной активности — хороший метод скрининга на дефицит комплемента (характеризует наличие всех компонентов пути активации комплемента). Сниженный или неопределяемый

Иммунологические исследования ■ 381

уровень титра комплементной активности свидетельствует о наследственной недостаточности системы комплемента.

Титр комплементной активности в сыворотке крови

В норме титр комплементой активности в сыворотке крови у взрослых составляет 50−140 ЕД/мл.

Титр комплемента в сыворотке крови оценивает активность терминальных компонентов комплемента при его активации по классическому и альтернативному пути.

Любой воспалительный процесс при адекватном иммунном ответе сопровождается повышением титра комплемента. Снижение титра свидетельствует о недостаточности комплемента и приводит к ослаблению его опсонизирующей функции и комплементзависимой цитотоксичности, что способствует накоплению иммунных комплексов и ведёт к хронизации воспалительного процесса. Увеличение активности комплемента характерно для аллергических и аутоиммунных процессов. При тяжёлых анафилактических реакциях титр комплемента снижается, а при анафилактическом шоке он может вообще не определяться. Изменения титра комплемента в сыворотке крови при различных заболеваниях представлены в табл. 7-26.

Таблица 7-26. Изменения титра комплемента в сыворотке крови при различных заболеваниях

С3 компонент комплемента в сыворотке крови

Референтные величины содержания С3 в сыворотке крови — 0,55−1,2 г/л. С3 — ключевой компонент комплемента, необходимый для реализации цитолиза. Он синтезируется в печени и входит в состав образующихся иммунных комплексов. С3 активируется по классическому пути комплексами Аг с IgG, IgM, по альтернативному пути — комплексами Аг с IgA, IgE,

Fab-фрагментами Ig, полисахаридными Аг бактерий.

Снижение концентрации С3 компонента в сыворотке крови приводит к ослаблению опсонизирующей функции крови, фагоцитоза, цитолиза и может быть связано с нарушением его синтеза или усилением катаболизма, а также адсорбцией его на иммунных комплексах при аутоиммунных