2 курс / Микробиология 1 кафедра / Доп. материалы / Общая_микробиология_Иллюстрированное_учебное_пособие_Н_В_Литусов

502

действия (действуют только на грамположительные или только на грамотрицательные бактерии);

-действующие на неклеточные формы (противовирусные препараты).

По направленности действия (по объекту):

1. Противобактериальные препараты:

-бета-лактамные антибиотики (пенициллины, цефалоспорины);

-стрептомицины;

-макролиды (эритромицин, олеандомицин);

-аминогликозиды (канамицин, мономицин, неомицин, тобрамицин, сизомицин, гентамицин);

-тетрациклины;

-гликопептиды (ванкомицин, линкомицин);

-хлорамфеникол (левомицетин);

-противотуберкулезные препараты (ПАСК);

-фосфомицины;

-фторхинолоны.

2.Противовирусные препараты (амантадин, ремантадин).

3.Противогрибковые препараты.

По типу действия:

-микробоцидные (бактерицидные, фунгицидные), то есть губительно действующие на микроорганизмы;

-микробостатические (бактериостатические), то есть ингибирующие рост и размножение микроорганизмов.

Сульфаниламидные препараты (сульфаниламиды) - это химиотерапевтические препараты, являющиеся производными сульфаниловой кислоты. К ним относятся норсульфазол, сульфадимезин, сульфадиметоксин, фталазол и другие препараты.

Антибиотики - это препараты биологического (микробного, растительного, животного), полусинтетического или синтетического происхождения, которые в малых концентрациях вызывают торможение размножения или гибель чувствительных к ним микробов во внутренней среде организма. Основными источниками получения антибиотиков являются актиномицеты, плесневые грибы и некоторые бактерии.

Классы антибиотиков по химической структуре:

-бета-лактамы;

-гликопептиды;

-аминогликозиды;

-тетрациклины;

-макролиды;

-линкозамиды;

-левомицетин;

-рифамицины;

-полипептиды;

-полиены;

-разные антибиотики.

Механизмы действия сульфаниламидов и антибиотиков:

Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/

503

-ингибирование синтеза веществ, входящих в состав клеточной стенки (пенициллины, цефалоспорины, циклосерин, бацитрацин);

-ингибирование функций цитоплазматической мембраны - нарушение проницаемости клеточной мембраны (полимиксины, нистатин, колистин, амфотерицин В);

-ингибирование синтеза белка (тетрациклины, аминогликозиды, эритромицин, линкомицин, хлорамфеникол);

-ингибирование синтеза нуклеиновых кислот (налидиксовая кислота, рифампицин, фторхинолоны).

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

1.Метод серийных разведений в жидких средах. В жидкие среды с

серийными разведениями антибиотиков вносят исследуемую культуру, инкубируют посевы при 37ОС, и учитывают результаты визуально или нефелометрически. Этот метод позволяет установить минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) препарата для возбудителя. МИК соответствует наибольшему разведению препарата, тормозящему рост тест-культуры.

2.Метод серийных разведений в плотных средах. Метод аналогичен предыдущей процедуре, но проводится на плотных питательных средах. При использовании этого метода готовят двойные серийные разведения антибиотика в расплавленном агаре, который затем вносят в чашки Петри и засевают исследуемой культурой. После инкубирования посевов определяют МИК по отсутствию роста на чашках, содержащих наименьшие концентрации препарата.

3.Диффузионные методы. Эти методы менее чувствительны, чем методы стандартных разведений, но проще по выполнению. На практике их применяют чаще.

3.1.Классический метод. На питательную среду в чашке Петри наносят исследуемую культуру и равномерно ее распределяют ее по поверхности среды. В агаре пробивают лунки и в каждую вносят по 0,1 мл раствора исследуемого антибиотика, после чего инкубируют при 37°С. После инкубирования в оптимальных условиях измеряют диаметр зоны подавления роста для каждого препарата.

3.2.Метод дисков (стандартный тест, чашечный или кольцевой метод, диско-диффузионный метод). После посева культуры на агар наносят диски из фильтровальной бумаги, пропитанные антибиотиками разной концентрации

(используют коммерческие образцы, содержащие определенные концентрации). После инкубации при 37ОС определяют диаметры зон торможения роста микроорганизмов и сравнивают с величинами зон задержки роста, указанными в инструкциях, прилагаемых к дискам. Вокруг дисков в зависимости от активности и концентрации антибиотика образуются разной величины зоны задержки роста микроба. Зоны точно измеряют с помощью циркуля и линейки.

Самостоятельная работа:

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом стандартных индикаторных дисков. В подсушенную чашку с МПА вносят 2-3 мл культуры исследуемого микроба (концентрация - 1 млрд., разведенная 1:1000). Культуру распределяют по всей поверхности среды путем покачивания чашки.

Избыток культуры удаляют пипеткой. На поверхность среды размещают

504

стандартные индикаторные диски, пропитанные антибиотиками. Расстояние дисков от края чашки должно быть не менее 1,5 см. Расстояние между дисками также должно быть не менее 1,5 см. На чашку помещают 5-6 дисков. Чашки инкубируют в термостате при 36ОС в течение 18-24 часов.

Учет результатов проводится путем измерения диаметров зон ингибирования роста бактерий.

Иллюстративный материал

Диски с антибиотиками.

Результат определения чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков.

Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/

506

В плодородной почве общая биомасса бактерий достигает 500 кг/га и более. Наибольшее значение для почв имеют азотфиксирующие бактерии

(Azotobacter, Nitrobacter, Mycobacterium и другие). К типичным почвенным бактериям относятся актиномицеты и спорообразующие палочки родов Bacillus и Clostridium.

Наиболее многочисленны микроорганизмы в верхнем 5-15-сантиметровом слое, меньше их на глубине 20-30 см и минимальное количество на глубине 30-40 см. Однако бактерии найдены в почве даже на глубине 5 м.

Почва населенных мест загрязняется твердыми и жидкими отбросами, выделениями людей и животных, остатками растений, хозяйственно-бытовыми и промышленными сточными водами. Особенно опасны сточные воды боен, мясокомбинатов, предприятий по переработке кожи, шерсти, которые могут содержать патогенные бактерии. В связи с этим почва может служить фактором передачи возбудителей инфекционных заболеваний. Наиболее длительно живут спорообразующие микробы – возбудители столбняка, ботулизма, сибирской язвы.

Микробиологическое исследование почвы проводят для ее санитарной оценки, характеристики процессов самоочищения, оценки методов обезвреживания отбросов, при определении пригодности участков для строительства, а также при эпидемиологических и эпизоотологических обследованиях с целью выяснения путей заражения почвы, продолжительности выживания в ней патогенных микробов и т. д.

Отбор проб почвы производят с квадратного участка (не менее 5x5 м) из 5 точек - из каждого угла и центра квадрата (“метод конверта”). Образцы забирают в условиях асептики с глубины 20-30 см. Объем образцов 1 кг.

Наличие в почве бактерий группы кишечной палочки свидетельствует о ее свежем фекальном загрязнении. Обнаружение Cl. perfringens в почве указывает на ее давнее фекальное загрязнение.

Микрофлора воды Микрофлору водоемов образуют две группы:

-аутохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, постоянно живущих и размножающихся в воде;

-аллохтонная микрофлора – совокупность микроорганизмов, случайно попавших в воду и сохраняющихся в ней сравнительно короткое время.

Всоответствии с действующими нормативными документами обязательному микробиологическому контролю подлежит вода питьевая (центрального и местного водоснабжения).

Отбор проб. Для отбора проб питьевой воды используют стерильные флаконы ёмкостью 500 мл. Предварительно проводят обжигание водопроводных кранов пламенем и пропускают воду в течение 10-15 минут при полностью открытом кране.

Показатели загрязнения:

- E. coli – свежее фекальное загрязнение;

- Citrobacter, Enterobacter – давнее фекальное загрязнение;

- Cl. perfringens (sporogenes) – как свежее, так и давнее фекальное загрязнение;

- термофильные бактерии – загрязнение разлагающимися отбросами; - протей – гнилостный распад.

Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/

508

Прибор вакуумного фильтрования.

Аппарат Кротова.

Пробоотборник бактериологический Тайфун Р-40.

Прибор ПУ-1Б.

Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/

510

Ворганизме человека обитают примерно 500 видов микроорганизмов, составляющих его нормальную микрофлору. Макроорганизм и его микрофлора в нормальных условиях находятся в состоянии динамического равновесия (эубиоза), которое сложилось в процессе эволюции.

Открытыми биологическими системами (биотопами), которые сообщаются

свнешней средой, являются кожа, респираторный тракт, желудочно-кишечный тракт, наружные половые органы. Они заселяются микроорганизмами, среди которых доминируют бактерии. Простейшие и вирусы представлены значительно меньшим числом видов.

Внорме от микроорганизмов свободны кровь, ликвор, синовиальная жидкость, костный мозг, брюшная полость, плевральная полость, матка.

Естественную микрофлору любых биотопов подразделяют на резидентную (или постоянную) и транзиторную (или случайную). Если постоянная микрофлора содержит представителей, специфичных для данного биотопа, то случайная состоит из особей, занесенных извне. Так, в желудочно-кишечном тракте могут оказаться посторонние микроорганизмы, попавшие с пищей. Кожные покровы наиболее часто контаминируются случайной микрофлорой из окружающей среды. В трахее, бронхах, легких, пищеводе также может обнаруживаться транзиторная микрофлора.

Постоянная микрофлора конкретного биотопа относительно стабильна по составу. Вместе с тем состав и физиологическая роль составляющих ее микроорганизмов далеко не равнозначны. Поэтому в постоянной микрофлоре различают две фракции: облигатную и факультативную.

Облигатная микрофлора является главной составляющей любого микробиоценоза, она противодействует заселению биотопа случайными микроорганизмами, участвует в процессах ферментации, иммуностимуляции, то есть выполняет защитную функцию.

Факультативная микрофлора составляет меньшую часть постоянных обитателей биотопа. Если постоянная микрофлора проявляет себя преимущественно бродильной активностью (то есть расщеплением углеводов с образованием кислых продуктов), то факультативная фракция весьма активно участвует в гнилостных процессах (распаде белковых веществ с образованием щелочных продуктов).

Микрофлора кожи

Кожный покров является наиболее обширной областью человеческого тела, доступной для постоянных контактов с микроорганизмами окружающей среды.

Всостав резидентной микрофлоры кожи входят, в основном, грамположительные сапрофитные бактерии - непатогенные коринебактерии, стафилококки, микрококки.

К транзиторной микрофлоре относятся грамположительные сарцины, золотистый стафилококк, грибы рода Candida, плесневые грибы. По типу дыхания микроорганизмы, заселяющие кожу, относятся к факультативным анаэробам.

Основные зоны колонизации – поверхность ороговевших клеток эпидермиса, устья волосяных фолликулов, протоки сальных желез. На 1 см2 кожи может находиться от 10 тыс. до 1 млн. бактериальных клеток. Бактерии расщепляют секреты сальных желез до ненасыщенных жирных кислот, при этом происходит сдвиг рН в кислую

сторону. Кислая реакция среды и продукты метаболизма представителей

Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/