491
4.На препарат наносят несколько капель раствора фуксина и выдерживают в течение 1-2 минут. Избыток красителя смывают водой.
5.Препарат высушивают фильтровальной бумагой и досушивают на воздухе.
Порядок микроскопирования:
1.Зеркало микроскопа устанавливают в соответствии с освещением (естественное или искусственное) и под малым увеличением (объектив х40, окуляр х7) и поднятом конденсоре регулируют освещенность поля зрения.
2.На окрашенный препарат капают каплю иммерсионного масла и препарат устанавливают на предметный столик микроскопа (при необходимости препарат закрепляют держателями).
3.Обычный объектив микроскопа заменяют на иммерсионный (х90).
4.Наблюдая сбоку, с помощью макрометрического винта осторожно опускают тубус до соприкосновения иммерсионного объектива с маслом.
5.Наблюдая в окуляр и осторожно поворачивая макрометрический винт, определяют контуры микробных клеток и с помощью микрометрического винта добиваются их ясного изображения. Изучают препарат.
6.Поднимают тубус и убирают препарат с предметного столика. Объектив протирают мягкой салфеткой, смоченной бензином.
7.Револьвер устанавливают в нейтральное положение, подкладывают под него салфетку, опускают револьвер и конденсор.
Самостоятельная работа.
На практическом занятии студенты готовят препараты грамположительных и грамотрицательных бактерий, окрашивают их по Граму и микроскопируют с иммерсией.
Иллюстративный материал
Рабочее место для окрашивания препаратов.
492
5
1
6
2
7
3
Этапы приготовления препаратов для микроскопического исследования.
Этапы окраски препарата по Граму.
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
493
Нанесение на предметное стекло воды.
Отбор культуры с питательной среды.
Фиксирование препарата.
494
Смачивание водой бумажки Синева.
Нанесение раствора Люголя.
Нанесение спирта.
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
495
Промывание препарата водой.
Нанесение раствора фуксина.
Промывание препарата.
496
Высушивание препарата.
Нанесение на препарат иммерсионного масла.
Микроскопирование препарата с иммерсионной системой.
Тема 4: Питательные среды. Посев микроорганизмов на плотные и в жидкие питательные среды.
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
497
Цели занятия: Познакомить студентов с классификацией питательных сред. Обучить студентов технике посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.
Задачи занятия:
1.Ознакомление студентов с микробиологическими питательными средами.
2.Овладение студентами техники посева микроорганизмов в жидкие и на плотные питательные среды.
После изучения темы студент должен:
знать:
- классификацию питательных сред; - правила посева культур на плотные и в жидкие питательные среды;
уметь:
- пользоваться бактериологической петлей;
владеть:
-методикой посева культур в жидкие и на плотные питательные среды;
-микробиологическим понятийным аппаратом.
Справочные материалы
Питательные среды, их классификация.
Микроорганизмы культивируют на питательных средах. Питательные среды подразделяются на группы в зависимости от свойств.
По физическому состоянию питательные среды подразделяются на:
-жидкие среды;
-полужидкие среды;
-твердые (плотные) среды;
Жидкие среды представляют собой настои, отвары, бульоны, приготовленные на основе мяса, рыбы, овощей (естественные среды), а также композиции определенных концентраций химических соединений (искусственные среды). Полужидкие среды получают путем добавления к жидким средам 0,5-0,9% агар-агара (желеобразующее вещество, получаемое из морских водорослей). К плотным питательным средам относят среды, содержащие 2-3% агара.
По сложности питательные среды подразделяются на:
-простые, или обычные среды (пептонная вода, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар);
-сложные, или специальные среды (кровяной агар, асцитический агар и бульон, мясо-пептонный сахарный бульон, сывороточный агар и бульон, свернутая сыворотка, кровяной бульон).
По происхождению питательные среды подразделяются на:
-естественные среды;
-полусинтетические среды;
-синтетические среды.
Естественные питательные среды - это природные органические среды непостоянного состава, которые включают продукты животного или растительного происхождения. К ним относятся пептоны, кровь, отвары и экстракты, полученные из природных субстратов (мясо, рыба, крупы).
498
Полусинтетические среды кроме органических и неорганических веществ известного состава содержат продукты природного происхождения (картофельная среда с глюкозой, дрожжевая среда).
Синтетические питательные среды состоят из определенных количеств органических и неорганических химических соединений известного состава.
По набору питательных веществ выделяют:
-минимальные среды, которые содержат лишь источники питания, достаточные для роста;
-богатые среды, в состав которых входят многие дополнительные
вещества.
В зависимости от назначения питательных сред различают:
-основные среды;
-элективные (селективные) среды;
-дифференциально-диагностические среды;
-накопительные среды (среды обогащения).
К основным средам относятся мясо-пептонный агар и мясо-пептонный бульон. На этих средах растет большинство бактерий.
Дифференциально-диагностические среды - это сложные среды,
позволяющие изучать биохимические свойства бактерий. Эти среды используются для определения вида бактерий.
Элективные (селективные) питательные среды содержат вещества,
подавляющие рост одних бактерий, и не влияющие на рост других бактерий. Эти среды служат для выделения определенного вида бактерий из смешанных популяций.
Накопительные питательные среды (среды обогащения) - это среды, на которых определенные виды культур растут быстрее и интенсивнее сопутствующих.
Посев микроорганизмов на питательные среды. Техника посева зависит от характера исследуемого материала и консистенции питательной среды.
Жидкий материал для посева берут бактериологической петлей или стерильной пипеткой. Все манипуляции проводят вблизи пламени спиртовки. Бактериологическую петлю перед взятием материала и по окончании посева стерилизуют прокаливанием в пламени спиртовки. Пипетки после посева погружают в емкость с дезраствором.
При посеве в жидкую питательную среду петлю с материалом погружают в среду и легким покачиванием смывают материал. При использовании пипетки материал сливают в среду.
При посеве на скошенный питательный агар в пробирке петлю с материалом вносят вблизи пламени спиртовки в пробирку и материал штрихом распределяют по поверхности агара.
Посев материала на агар в чашке Петри проводят с помощью бактериологической петли, шпателя или тампона. Посев бактериологической петлей проводят штрихом по поверхности агара. С помощью шпателя или тампона исследуемый материал распределяется по поверхности среды круговыми движениями.
Для посева в толщу питательной среды материал вносят в стерильную чашку Петри или в пробирку, добавляют остуженный (40-45ОС) расплавленный агар
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
499
и перемешивают.
Посев уколом в столбик питательной среды проводят с помощью бактериологической иглы или петли путем прокалывания столбика среды.
Самостоятельная работа.
Каждый студент проводит пересев бактерий из жидких и с агаровых культур на плотные и в жидкие питательные среды. Порядок пересевов студенты записывают в рабочую тетрадь.
Иллюстративный материал
Варианты посева штрихом.
Расположение петли при посеве штрихом.
500
Посев в чашку Петри.
Посев тампоном.
Посев по Дригальскому.
Рекомендовано к изучению разделом по микробиологии сайта https://meduniver.com/
