Добавил:
kiopkiopkiop18@yandex.ru Вовсе не секретарь, но почту проверяю Опубликованный материал нарушает ваши авторские права? Сообщите нам.
Вуз: Предмет: Файл:

6 курс / Клинические и лабораторные анализы / Лабораторная_диагностика_туберкулеза_Ерохин_В_В_ред_

.pdf
Скачиваний:
20
Добавлен:
24.03.2024
Размер:
6.25 Mб
Скачать

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

4.Люминесцентный микроскоп (для процессов люминесцентной микроскопии) с и функционирующим предметным столиком

5.Шкаф биологической безопасности I или II класса биологической или иные боксы, обеспечивающие защиту оператора и продукта (для пробоподготовки и посевов)

6.Шкаф биологической безопасности II класса (для процессов с использованием жидких питательных средах и автоматических или полуавтоматических систем).

7.Вытяжной шкаф (для приготовления и окраски мазков).

8.Центрифуга (с ускорением 3000 g)

9.Термостаты на 35–37°С для культивирования МБ или оборудованная термальная комната

10.Термостаты электрические (для температуры 22°С и 45°С) 11.Аппарат для свертывания питательных сред.

12.Автоклавы для автоклавирования текучим паром на 75 л (один для обеззараживания инфицированных материалов и посуды, один для стерилизации)

13.Шкафы сушильно-стерилизационные – один для стерилизации посуды, один для фиксации мазков (для фиксации мазков допустимо использование горелки Бунзена, или спиртовки).

14.Весы лабораторные, 500 г/0,01 г. 15.рН-метр

б) Вспомогательное оборудование

16.Аквадистиллятор (не менее 25 л/час)

17.Бытовые холодильники (0+8°С) для хранения готовых сред и реактивов и для хранения инфицированных материалов и культур – 2 шт.

18.Миксер или турбомешалка для перемешивания яичной массы при приготовлении питательных сред

19.Встряхиватель 3. Определение чувствительности микобактерий к противотубер-

кулезным препаратам (метод абсолютных концентрации, метод пропорций, альтернативные методы с применением зарегистрированных в РФ тест-систем, на плотных средах и с применением автоматических и полуавтоматических систем), идентификации микобактерий комплекса M.tuberculosis и идентификации вида микобактерий.

Дополнительно к перечисленному выше оборудованию

1.Автоматическая система регистрации роста микобактерий (для процессов с использованием жидких питательных средах и автоматических систем)

308

2.Система регистрации флюоресценции (для процессов с использованием жидких питательных средах и полуавтоматических систем)

3.Шкаф безопасности 2-го класса – для защиты персонала, окружающей среды и продукта.

4.Весы аналитические, 50 г/ 0,1 мг.

5.Лабораторная морозильная камера, – 20°С, – 40°С или морозильная камера в двухкамерном холодильнике

Ситуационная задача

В качестве задачи слушателям предлагается изложить правила определения температуры в термальной комнате и выбор условий культивирования МБТ. Слушателям предлагается объяснить причины ведения документации в необходимом объеме и виде.

Комментарии к задаче

Оптимальная температура культивирования МБТ – не более 37°С. При измерении температуры используют два термометра с классом точности не ниже 2. Термометры помещаются вертикально в стаканы с глицерином на верхней и нижней полке термальной комнаты. Измерение температуры проводят три раза со сменой термометров на нижней и верхней полке термальной комнаты. Результаты считываются через 10–12 часов и затем усредняются. С учетом возможной температуры культивирования выбираются полки с температурой 36±1°С. Другие полки не используются для культивирования МБТ.

Заключительная часть (5 мин)

Правильная эксплуатация и поддержание необходимых технических условий проведения микробиологических исследований является основой системы мер по управлению качеством исследований.

Рекомендуемая литература

1.Внутрилабораторный контроль качества работы оборудования в микробиологических лабораториях лечебно-профилактиче- ских учреждений здравоохранения. Пособие для врачей. – ММА им. И.М.Сеченова. – М., – 2004. – 31 с.

2.Закон Российской Федерации «Об обеспечении единства измерений» от 27 апреля 1993 года №4871-1.

3.Методические указания по контролю работы паровых и воздушных стерилизаторов. МЗ СССР, 1991 г.

Раздел 2. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К СЕМИНАРАМ

309

4.Методическое пособие «Перечень средств измерений в соответствии с областями измерительной техники, допущенных Госстандартом России (вошедшими в Госреестр) к применению в РФ (в санэпидслужбе России) по состоянию на 01.01.99 г.» МЗ РФ. Москва 1999 г.

5.Приказ МЗ РФ от 10.05.2000 г. №156 «О разрешении на применение в медицинских целях изделий медицинского назначения

имедицинской техники отечественною и зарубежного производства в РФ».

6.Приказ МЗ СССР от 04.10.1980 г. № 1030 «Об утверждении форм первичной медицинской документации учреждений правоохранения». Журнал контроля работы стерилизаторов воздушного, парового (автоклав). Форма 257/У.

7.Приказ МЗРФ №295 «Об утверждении положения об аккредитации клинико-диагностических лабораторий» от 21.12.93.

8.Стерилизаторы медицинские паровые. Правила эксплуатации

итребования безопасности

9.Accreditation for Laboratories performing Microbiological Testing.

– 1996.

10.Basic laboratory procedures in clinical bacteriology. WHO. – Geneva.

– 1991.

11.Laboratory services in tuberculosis control. Part III: Culture. WHO.

– 1998. – 96 pp.

Материально-техническое обеспечение

Флип-чарт, маркеры, фломастеры, скотч, ножницы, бумага А4, раздаточные материалы (ситуационные задачи, др. материалы), мультимедийная или проекционная демонстрационные системы, экран, лазерная указка.

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

310

Тема 6.5. «Подготовка отчетов о деятельности лаборатории»

Количество аудиторных часов – 1

Примерный план семинарского занятия

Вопросы, прорабатываемые на семинаре:

отчет лаборатории: обязанности персонала, нагрузки, объемы выполненных лабораторных исследований, сравнительные характеристики, правила подготовки Цель семинара – дать представление о формах отчетности бак-

териологических лабораторий о практической работе.

Семинар проводится в виде круглого стола. Разбираются перечень и формы необходимой документации подводящей итог работы лаборатории по всем направлениям деятельности: клинических исследований, контроля качества, организационно-мето- дической работы, повышения квалификации кадров и т.д.

Вводная часть (5–10 мин)

В вводной части семинара, с учетом контингента слушателей, может быть дан краткий перечень рекомендуемой отчетной документации, используемой для оценки деятельности лабораторий.

Основная часть (30 мин)

С целью оценки эффективности работы по всем направлениям деятельности, обеспечивающим эффективность территориальных противотуберкулезных программ, необходимо обобщать и анализировать другие виды деятельности лаборатории. В клиническом и эпидемиологическом плане представляет интерес анализ тенденции частоты выявляемости возбудителя, выделения лекарственноустойчивых штаммов МБТ (особенно в группе впервые выявленных больных), спектр лекарственной устойчивости МБТ у больных с различными формами туберкулеза в различных группах, частота выделения НТМБ, а также случаев сочетанных инфекций (МБТ и НТМБ, МБТ и ВИЧ-инфекция) и т.д.

Конкретно, в рамках семинара разбирается пример одного из отчетов, подготовленных центральной территориальной лабораторией (см. Приложение).

Заключительная часть (5 мин)

Подводя итог, обращается внимание участников семинара на необходимость ведения территориальных отчетов (в том числе, качества исследований и сбора информации), что позволяет прогнозировать тенденции распространения возбудителя туберкулеза, от-

Раздел 2. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К СЕМИНАРАМ

311

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ражающего эффективность территориальной противотуберкулезной программы в целом. С другой стороны корректно и полно подготовленные отчеты о деятельности лабораторий, включающие функциональные обязанности персонала и нагрузки, объемы выполненных лабораторных исследований позволяют рационально использовать территориальные ресурсы для обеспечения всего спектра лабораторных услуг в территории, разработать рекомендации для развития сети лабораторий.

Рекомендуемая литература

1.Дочев Д. Оценка деятельности клинико-диагностической лаборатории // Клиническая лабораторная диагностика, 1990. – №2. – С. 71–72.

2.Меньшиков В.В. Менеджмент в лабораторной клинико-диаг- ностической службе/ В.В. Меньшиков, Л.М.Пименова. – М.: «ACADEMIA»,2002. – 204 с.

3.Попов С.А., Пузанов В.А., Сабгайда Т.П., Антонова Н.В., Казаков А.C. Основные проблемы региональных бактериологических лабораторий противотуберкулезных учреждений // Проблемы туберкулеза и болезней легких. – 2008. – № 5. – С. 29–35.

4.Приказ МЗ РФ от 21.03.2003г. №109 «О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации», Приложение 9.

5.Титов В.Н. Принципы оценки работы клинико-диагностиче- ской лаборатории / В.Н. Титов // Клиническая лабораторная диагностика. 1994. – №1. – С. 53–54.

6.ISO/IEC 17025:2005. General requirements for the competence of testing and calibration laboratories. – http://www.iso.org/iso/catalogue_detail.htm?csnumber=39883

Материально-техническое обеспечение

Флип-чарт, маркеры, фломастеры, скотч, ножницы, бумага А4, раздаточные материалы (ситуационные задачи, др. материалы), мультимедийная или проекционная демонстрационные системы, экран, лазерная указка.

312

Приложение

ГУЗ «Клинический противотуберкулезный диспансер Области N» Отчет о деятельности бактериологических лабораторий фтизиатрической службы в 2010 г. Количество лабораторий – 8.

Таблица 1.

 

 

 

 

Дислокация и штаты лабораторий

 

 

 

 

 

п\п

Место распо-

Тип

 

Врачи-бактериологи

 

 

Лаборанты

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

ложения

 

Штат

Занято

Физ. лиц

Штат

 

Занято

Физ. лиц

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1

ОПТД

 

 

ЦМБЛ

 

10,5

7,25

 

6

16,5

 

10

 

8

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

Городские ПТД

Гор.БЛ

 

2

1,5

 

2

4

 

2

 

2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

Межрайонные

МБЛ

 

4,75

4,75

 

4

10

 

9,5

 

7

 

 

ПТД

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Всего выполнено посевов на МБТ – 58203.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Метод деконтаминации биологического материала – обработка 10 % раствором

трифосфата натрия.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Используемые среды – Левенштейна-Йенсена, Финна, Местная «Л»

 

 

Таблица 2.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Высеваемость МБТ по группам диспансерного учета

 

 

 

 

 

 

 

 

Группа ДУ

 

Количество посевов

Количество выделен-

Процент высеваемости

 

 

 

 

 

 

 

 

ных культур

 

 

 

 

 

 

 

0

 

 

 

5927

 

 

 

206

 

 

3,5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

СЕМИНАРАМ

1

 

 

 

19170

 

 

2798

 

 

14,6

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

 

 

 

403

 

 

 

0

 

 

0

 

 

2

 

 

 

6720

 

 

 

1720

 

 

25,6

 

 

 

3

 

 

 

2005

 

 

 

47

 

 

2,3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

К

Вне группы

 

 

23975

 

 

1367

 

 

5,7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

МАТЕРИАЛЫМЕТОДИЧЕСКИЕ2.Раздел

Всего

 

 

58203

 

 

6138

 

 

10,5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

313

 

Таблица 3.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Высеваемость МБТ из различного диагностического материала

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Количество

 

Количество

 

Процент вы-

 

 

п\п

Диагностический материал

исследований

выделенных

 

севаемости

 

 

 

 

 

 

 

культур

 

 

 

 

 

1

Мокрота

 

38399

6045

 

15,7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2

Промывные воды бронхов

 

987

44

 

4,5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3

Ингаляционный материал

 

81

9

 

11

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

Бронхо-альвеолярный лаваж

 

0

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5

Плевральная жидкость

 

159

7

 

4,4

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

6

Моча

 

17391

9

 

0,05

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7

Менструальная кровь

 

163

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8

Соскоб эндометрия

 

4

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

9

Пунктат лимфоузла

 

0

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10

Ликвор

 

7

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

11

Асцитическая жидкость

 

3

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

12

Операционный материал

 

359

16

 

4,5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

13

Отделяемое раны

 

14

2

 

14,3

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

14

Отделяемое костного свища

 

0

0

 

0

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

15

Прочее

 

636

6

 

0,9

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

16

Всего

 

58203

6138

 

10,5

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Таблица 4.

 

 

 

 

 

 

 

 

Результаты люминесцентной микроскопии осадка диагностического

 

 

 

материала

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Абсолютное

Процент от общего кол-ва

 

 

 

 

 

число

 

просмотренных мазков

 

 

Всего исследовано мазков люминес-

 

 

 

 

 

 

 

 

центной микроскопией одновременно с

17664

 

100

 

РЕКОМЕНДАЦИИ

 

посевом

 

 

 

 

 

 

 

Совпадающие результаты обоих мето-

16402

 

92,9

 

 

 

 

 

 

 

дов:

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Положительные результаты

910

 

 

5,2

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Отрицательные результаты

15492

 

87,7

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Несовпадающие результаты

1262

 

 

7,1

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ

 

Выделена культура при отрицательных

691

 

 

3,9

 

 

результатах микроскопии

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Положительные результаты люминес-

 

 

 

 

 

 

 

 

центной микроскопией при отсутствии

571

 

 

3,2

 

 

 

выделения культуры

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

314

Таблица 5.

Высеваемость МБТ при различных клинических формах туберкулеза

Клинические формы тубер-

Количество

Количество

Процент вы-

выделенных

п\п

кулеза

исследований

культур

севаемости

 

 

 

 

1

Первичный туберкулез легких

280

1

0,4

 

 

 

 

 

2

Милиарный туберкулез легких

22

0

0

 

 

 

 

 

3

Диссеминированный туберку-

9276

2129

23

лез легких

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4

Инфильтративный туберкулез

18942

2556

13,5

легких

 

 

 

 

 

 

 

 

 

5

Туберкулома

952

38

4,0

 

 

 

 

 

6

Кавернозный туберкулез легких

127

11

8,6

 

 

 

 

 

7

Фиброзно-кавернозный ту-

2821

1076

38,1

беркулез легких

 

 

 

 

 

 

 

 

 

8

Метатуберкулезный пневмо-

176

0

0

склероз

 

 

 

 

 

 

 

 

 

9

Цирротический туберкулез

455

27

6,0

легких

 

 

 

 

 

 

 

 

 

10

Эмпиема плевры

111

4

3,6

 

 

 

 

 

11

Силикотуберкулез легких

1

0

0

 

 

 

 

 

12

Очаговый туберкулез легких

2425

61

2,5

 

 

 

 

 

13

Туберкулез МПС

3968

7

0,2

14

Прочие формы туберкулеза

10452

222

2,1

 

 

 

 

 

15

всего

50000

6132

12,3

 

 

 

 

 

Выделено 6138 штаммов МБТ.

Тесты идентификации: нитратредуктазный, посев на среду с натрием салициловокислым.

Выполнено 1909 определений лекарственной устойчивости к основным противотуберкулезным препаратам, к препаратам резервного ряда – 241.

Для определения лекарственной устойчивости использовалась среда Левенштейна-Йенсена.

γ Применялсяγ метод абсолютныхγ концентрацийγ. Изониазид – 1 ,γ10 ; рифампицинγ – 40 , стрептомицин – 10 , этионамидγ – 30 , этамбутолγ – 2 , канамицинγ – 30, амикацин – 8 , офлоксацин – 4 , циклосерин – 30 .

Определение чувствительности к пиразинамиду не производилось.

Раздел 2. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К СЕМИНАРАМ

315

Выделено 69 культур атипичных микобактерий. Впервые выявленных больных с микобактериозом с клинико-рентгенологи- ческим подтверждением не было.

Методы типирования МБТ – определение нитратредуктазной активности, рост на среде с ТСН.

Культур M.bovis выделено не было.

Таблица 6.

Результаты определения лекарственной устойчивости к противотуберкулезным препаратам выделенных штаммов МБТ

 

 

Первичная ЛУ

Приобретенная ЛУ

 

 

 

 

 

 

 

 

Абсолютн.

%

Абсолютн.

%

 

 

 

 

 

 

 

Количество культур

1737

 

4401

 

 

 

 

 

 

 

 

Всего определений ЛЧ

548

100

1361

100

 

 

 

 

 

 

 

чувствит. шт. МБТ

273

49,9

205

15,0

 

 

 

 

 

 

 

устойчивых шт. МБТ

275

50,1

1156

84,9

 

 

 

 

 

 

 

Устойчивы к 1 препарату:

89

16,3

208

15,3

 

 

 

 

 

 

 

H

30

5,5

69

5,1

 

 

 

 

 

 

 

R

1

0,2

18

1,3

 

 

 

 

 

 

 

E

12

2,2

30

2,2

 

 

 

 

 

 

 

S

46

8,4

91

6,7

 

 

 

 

 

 

 

МЛУ (H+R)

72

13,1

546

40,7

 

 

 

 

 

 

 

HR

8

1,4

33

2,5

 

 

 

 

 

 

 

HRE

3

0,5

23

1,7

 

 

 

 

 

 

 

HRS

27

4,9

125

9,3

 

 

 

 

 

 

 

HRES

34

6,2

365

27,2

 

 

 

 

 

 

 

Устойч. к H+другим преп.

88

16,0

291

21,6

 

 

 

 

 

 

 

HE

8

1,4

35

2,5

РЕКОМЕНДАЦИИ

 

 

 

 

 

HS

53

9,7

125

9,3

 

 

 

 

 

 

 

 

HES

27

4,9

131

9,8

 

 

 

 

 

 

 

Устойч. к R+другим преп.

11

2,0

72

5,4

 

 

 

 

 

 

 

RS

7

1,3

52

3,9

 

 

 

 

 

 

 

RE

0

0

4

0,3

 

 

 

 

 

 

МЕТОДИЧЕСКИЕ

RES

4

0,7

16

1,2

 

 

 

 

 

Устойч. к ES

15

2,7

39

2,8

 

 

 

 

 

 

 

316

Таблица 7.

Бактериологическое обследование групп риска для лечебных учреждений общей лечебной сети

Категории обследуемых

Кол-во посевов

Количество

% высеваемо-

культур

сти

 

 

Хронические неспецифиче-

2933

6

0,2

ские заболевания легких

 

 

 

 

 

 

 

Хронические неспецифиче-

3878

0

0

ские заболевания почек

 

 

 

 

 

 

 

Нетранспортабельные

1392

0

0

 

 

 

 

Выполнено 10667 посевов на условно-патогенную микрофлору. Количество посевов на грибы – 1055. Соотношение впервые выявленных больных с бактериовыделением к количеству больных

с распадом составило 98 %.

Раздел 2. МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ К СЕМИНАРАМ

317