9 Импрегнация азотнокислым серебром.

Для выявления бактериальной флоры с успехом может быть применена импрегнация серебром,что может осуществиться как в тканях,так и в срезах.

9а Импрегнация по Левадити:

-кусочки тканей после фиксации хорошо промывают в воде-не менее 1 суток

-поместить в 96% этанол на 1 сут

-перенести в дистиллированную воду до удаления этанола(до тех пор,пока кусочки не потонут,но не более 1 сут)

-поместить в 2-3% р-р азотнокислого серебра в темной,наглухо закрытой банке при температуре 37 град С на 3-4 суток

-быстро сполоснуть в растворе пирогалловой кислоты(3-4 г+95 мл дистиллированной воды+5 мл 40%-го раствора формалина).затем положить в него при комнатной температуре на 1 сут

-промыть в воде

-залить в парафин

-приготовить срезы и заключить в бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ:ткань окрашивается в желто-коричневый цвета,бактерии-в черный

9б Импрегнация по Вартину-Старри:

-срез поместить в подкисленную воду(рН 3,8-4,4 бидистиллированная вода или кипяченая дистиллированная вода подкисляется 1% раствором лимонной кислоты)

-поместить в 1% раствор азотнокислого серебра в стаканчике,обернутом черной бумагой и предварительно подогретом до 43 град С,перенести в водяную баню или термостат при температуре 43 град на 30 мин

-срезы положить на стеклянные палочки и покрыть проявителем(готовится непосредственно перед употреблением в маленьком стаканчике,при сливании помешивается стеклянной палочкой предварительно нагретые в термостате до 56 град С 4 мл 2%-го раствора азотнокислого серебра+10 мл 5%-го желатина+5,4 мл 0,15% раствора гидрохинона),проявить в термостате при 56 град С без доступа света 5-12 мин(до приобретения срезов золотисто-коричневого или золотисто-желтого цвета)

-быстро и тщательно ополоснуть в подогретой до 56 град С водопроводной воде

-обезводить в этаноле восходящей крепости(70,96 и 100%0-по 15 мин

-заключить в бальзам.

РЕЗУЛЬТАТ:на желтом фоне выявляются черные бактерии

9в Импрегнация в срезах с докраской по Семенович(с докраской гематоксилином и эозином)

-срез поместить в 0,008 М ацетатного буфера с рН 3,6-соединить 18,5 мл 0,2 М уксусной кислоты(1,2 г кислоты растворить в 100 мл дистиллированной воды)+1,5 мл 0,2 М ацетата натрия(1,64 ацетата натрия растворить в 100 мл дистиллированной воды)+500 мл кипяченой дистиллированной воды-на 2 мин

-поместить в 1% раствор азотнокислого серебра в темной посуде при 56 град С-на 30 мин

-срез положить на стеклянные палочки и покрыть проявителем(15 мл 5%-го желатина+3 мл 2%-го азотнокислого серебра+1 мл 3%-го гидрохинона,при сливании помешивать стеклянной палочкой) при температуре 37 град С-10 мин

-промыть в двух порциях теплого ацетатного буферного раствора

-поместить в 5% раствор тиосульфата натрия

-промыть в дистиллированной воде 5 минут

-окрасить гематоксилином и эозином

-заключить в бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ:бактерии окрашиваются в черный цвета,ткани окрашены гематоксилином и эозином,но с желтоватым оттенком цитоплазмы и волоконистых структур