5 Окраска азуром и эозином.

-срез поместить в краситель(свежеприготовленная смесь 0,1% р-ров азура-2 и водорастворимого эозина,лучше эозин-экстра или калия) на 18-24 часа при комнатной температуре(или на 20-30 мин при 37 град С)

-дифференцировать слабым раствором уксусной кислоты(1 мл 1% уксусной кислоты на

100 мл воды)-быстро

-заключить в бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ:ядра клеток окрашиваются в темно-синий цвета,цитоплазма-розовая,эритроциты оранжевые,микрофлора,в основном,бактериальная-синего цвета разной интенсивности.

6 Окраска эозиново-кислым метиленовым синим с докараской азуром и эозином(по Папенгейму)

-на срез нанести 20-30 капель красителя Май-Грюнвальда(25 сухого красителя

эозиново-кислого метиленового синего растворить в 100 г этанола при легком нагревании в водяной бане при 60 град С,при необходимости приготовления сухого красителя 1 г эозина и 1 г метиленового синего растворяют в 1 л дистиллированной воды,образующийся при этом темно окрашенный осадок -после отсасывания

отстоять несколько суток-промывают холодной дистиллированной водой и высушивают

на 1-3 мин.

наливают такое же кол-во дистиллированной воды на 1 мин,сливают,не смывая

-докраска азуром-эозином (смесь-10 мл 0,1% р-ра эозина +14 мл 0,1% р-ра азура

+0,7 мл 0,2 М раствора уксусной кислоты+0,4 мл 0,2М р-ра уксусно-кислого натрия + 5 мл ацетона +20 мл дистиллированной воды)на 35 мин в термостате

-промыть водой

-заключить в бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ:ядра красновато-фиолетовые,цитоплазма розовая.Бактериальная микрофлора синего цвета разной интенсивности.

7 Окраска с использованием фуксинсернистой кислоты(шик-реакции)

Принцип метода:образование соединений фуксинсернистой кислоты с альдегидными группами соединений лилово-красного цвета.Последние возникают при окраске простейших и грибов.Лучше применять периодат калия(окраска по Шабадашу)

Окраска по Шабадашу.

-срез промыть дистиллированной водой

-поместить в р-р перйодата(400 мг йоднокислого калия или натрия+10 мл 0,2 нормального р-ра уксусной к-ты,на дне остается осадок)-на 5-10 мин

-сполоснуть в дистиллированной воде 3-10 мин

-пломестить в фуксинсернистую кислоту(! г чистого основого фуксина для фуксинсернистой кислоты,растертого в ступке до мелкого порошка,залить 210 мл кипящей дистиллированной воды,после взбалтывания в течение 5 мин остудить до 60-70 град С,затем профильтровать через фильтровальную бумагу,охладить до 50 град С,затем добавить 20 мл 1 нормальной соляной кислоты,охладить до 20-25 град С,добавить 1 г метабисульфита калия илои безводного бисульфита натрия.Раствор,вначале рубиново-красный,постепенно обесцвечивается,до полного обесцвечивания его держать плотно закрытым в темном прохладном месте от 12 час до 3 сут,фуксинсернистой кислотой можно пользоваться повторно,если она остается бесцветной--на 10-30 мин

-промыть в дистиллированной воде

-хорошо промыть в сернистой воде(200 мл водопроводной воды+10 мл 10%-го метабисульфита натрия+10 мл 1 норм.соляной кислоты,сернистой водой можно пользоваться повторно при хранении ее в плотно закрытой посуде.

-окрасить гематоксилином,напр.,Гарриса,с последующей дифференцировокой 1% водным раствором соляной кислоты и промывкой в щелочной воде до восстановления синеватой окраски ядер

-заключить в бальзам

РЕЗУЛЬТАТЫ:Препараты,окрашенныве по данной методике,напоминают окрашенные гематоксилином и эозином.Ядра клеток темного синевато-серого цвета,цитоплазма бледно-фиолетовая.Микоплазмы,грибы рода кандида,пневмоцисты,токсоплазмы,слизь,окрашиваются в красно-фиолетовый цвета,плесневые грибы,некапсулированные бактерии окрашиваются только гематоксилином.