Полезные материалы за все 6 курсов / Ответы к занятиям, экзаменам / 2_Физиология_и_экология_микроорганизмов

полужидкие – полужидкий мясо-пептонный агар* (МПА с концентра-

цией агар-агара до 1%);

плотные – МПА (концентрация агар-агара 2-3%).

* Агар – полисахарид, получаемый из водорослей «агар-агар». Он плавится при температуре 1000С, а застывает при температуре 400С.

11

По составу:

простые (МПА, МПБ);

сложные (кровяной агар).

По назначению:

транспортные – для первичного посева и транспортировки исследуемо-

го материала в лабораторию;

элективные (селективные) – среды для избирательного культивирова-

ния бактерий определенного вида (1% пептонная вода и щелочной агар для холерных вибрионов, среда Плоскирева – для возбудителей брюш-

ного тифа и дизентерии);

дифференциально-диагностические – для дифференциации отдельных видов бактерий по ферментативным свойствам. Например: среда Эндо –

для кишечных бактерий.

12

Состав и механизм работы среды Эндо.

Состав: МПА + 1% лактозы + индикатор (фуксин, обесцвеченный гипо-

сульфитом натрия).

Дифференциация кишечных бактерий основана на различиях в способно-

сти расщеплять лактозу. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты,

которая нейтрализует гипосульфит натрия. В результате фуксин из связанного состояния переходит в свободное. Колонии кишечных палочек окрашиваются в красный цвет (лактозопозитивные). Возбудители брюшного тифа и дизенте-

рии не расщепляют лактозу, поэтому дают на среде Эндо бесцветные (лактозо-

негативные) колонии.

специальные – для выделения и культивирования бактерий, не расту-

щих на простых средах (сывороточный агар, кровяной агар);

13

накопительные – для накопления возбудителя при его низкой концен-

трации в материале от больного (селенитовая среда – для культивирова-

ния возбудителей дизентерии).

4. Дыхание бактерий. Классификация бактерий по типу дыхания.

Сущность дыхания у микроорганизмов – получение энергии, образующей-

ся в процессе прямого биологического окисления веществ кислородом или пу-

тем ферментативного метаболизма. Накопление энергии происходит в мезосо-

мах.

В соответствии с потребностями в кислороде бактерии классифици-

руют на основные группы:

Облигатные (строгие) аэробы – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются только в присутствии кислорода. Например: Vibrio cholerae, Pseudomonas aeruginosa.

Облигатные анаэробы – микроорганизмы, которые растут и размно-

жаются только без доступа кислорода. Например: Clostridium botulinum, Clostridium tetani, Bacteroides fragilis.

Факультативные анаэробы – микроорганизмы, которые могут расти и размножаться как в присутствии кислорода, так и в бескислородных условиях.

Например: Escherichia coli, Salmonella typhi, Mycobacterium tuberculosis.

14

Микроаэрофильные бактерии – микроорганизмы, которые растут и раз-

множаются при повышенном содержании СО2 и низком содержании О2. На-

пример: Helicobacter pylori, Campylobacter coli.

5.Бактериологический метод диагностики инфекционных заболева-

ний. Методы культивирования бактерий. Получение чистой культуры аэ-

робов и анаэробов. Способы создания анаэробных условий.

Основным методом диагностики инфекционных заболеваний является

бактериологический. Он заключается в посеве исследуемого материала

(кровь, моча, фекалии, мокрота, мазок со слизистой оболочки ротоглотки и но-

са и др.) на искусственные питательные среды для выделения чистой культуры возбудителя. Затем проводят его идентификацию по морфологическим, тинкто-

риальным, культуральным, биохимическим, антигенным и др. признакам.

Выделение чистой культуры аэробных возбудителей достигается путем посева исследуемого материала на плотные питательные среды (в чашке Пет-

ри), что приводит к механическому разобщению отдельных микробных клеток друг от друга. Посев производят секторами бактериологической петлей и по-

мещают в термостат при температуре 370С. Размножение изолированных кле-

ток дает потомство (колонию) одного вида, т.е. чистую культуру микробов.

чашка Петри с плотной питательной средой

бактериологическая петля

Посев исследуемого материала секторами для получения изолирован-

ных колоний микроорганизмов

15

Для получения изолированных колоний и чистой культуры анаэробов

производят посев исследуемого материала петлей секторами на специальные среды для анаэробов с последующим культивированием в анаэробных (бески-

слородных) условиях.

Способы создания анаэробных условий:

1) механическое удаление воздуха из анаэростата с последующим заполне-

нием газовой смесью (80% азота, 10% водорода, 10% углекислого газа);

2) использование газогенераторных пакетов с набором специальных реа-

гентов (боргидрит натрия, винная кислота, бикарбонат натрия) для создания бескислородной газовой среды в анаэростате.

16

Проведение бактериологического исследования по схеме.

Цель бактериологического исследования: выделение и идентификация (оп-

ределение вида) возбудителя.

I этап. Посев исследуемого материала на пластинчатый агар с целью полу-

чения изолированных колоний микроорганизмов.

II этап. Изучение выросших колоний и выделение чистой культуры с це-

лью накопления биомассы одного вида микроорганизмов.

17

III этап. Определение биохимических, антигенных, патогенных и других свойств выделенной культуры с целью идентификации бактерий.

IV этап. Учет свойств бактерий и вывод о виде возбудителя.

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

Выделение чистой культуры аэробов.

I этап исследования. Посев смеси бактерий (S.aureus+E.coli) на пластин-

чатый МПА в чашке Петри петлей секторами.

Этапы посева:

а) на дне чашки Петри с МПА карандашом по стеклу сделать надпись: но-

мер стола, номер группы, факультет;

б) прокалить петлю, над спиртовкой открыть пробирку, обжечь ее края,

внести петлю в пробирку и остудить ее о стенки пробирки. Забрать пет-

лей исследуемый материал. Закрыть пробирку над спиртовкой и поста-

вить в штатив;

в) взять чашку Петри, приоткрыть крышку и нанести петлей секторами ис-

следуемый материал на МПА, закрыть чашку, прожечь петлю;

г) посевы поставить в термостат при температуре 37°С на 24 часа.

18

Занятие №2

Тема. Рост и размножение бактерий. Выделение чистой культуры аэробов.

Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы сте-

рилизации. Дезинфекция. Асептика. Антисептика.

Цель занятия. Изучить рост и размножение бактерий, действие физических и химических факторов на микроорганизмы, методы стерилизации, дезинфекции и антисептики. Освоить второй этап бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

I.Теоретические знания:

1.Рост и размножение бактерий.

2.Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких пита-

тельных средах.

3.Фазы развития бактериальной популяции в жидкой питательной среде.

4.Влияние факторов окружающей среды на микроорганизмы.

5.Виды дезинфекции. Химические вещества, используемые для дезинфекции.

6.Асептика. Антисептика. Химические вещества, используемые для антисептики.

II.Практические навыки и знания:

1.Изучить схему проведения II этапа бактериологического исследования по выделению чистой культуры аэробов.

2.Действия медицинского работника при аварийных ситуациях (угроза зара-

жения ВИЧ).

19

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ К ЗАНЯТИЮ

1. Рост и размножение бактерий.

Рост бактерий – это увеличение линейных размеров и массы микробной

клетки.

Размножение бактерий – это увеличение количества особей в популяции за счет поперечного деления, реже путем почкования.

Интервал времени, за который число клеток удваивается, называется време-

нем генерации (Т-генерации). Для большинства бактерий время генерации со-

ставляет 20-30 мин., у возбудителя туберкулеза – 24 часа.

Популяция бактерий – совокупность особей одного вида, сформировавшаяся в определенных условиях внешней среды.

Культура бактерий – популяция одного вида микроорганизмов, выросших на питательной среде.

2. Характеристика роста бактериальной популяции на плотных и жидких

питательных средах.

Популяция бактерий, развившаяся из одной микробной клетки на плотной питательной среде, называется колонией.

Для учета количества жизнеспособных клеток (собственно колоний) в куль-

туре определяют число колониеобразующих единиц в 1 мл материала

(КОЕ/мл).

Колонии характеризуют по следующим признакам:

1)по размеру: мелкие - 1-2 мм; средние - 2-4 мм; крупные - более 4 мм;

2)по форме: круглые или неправильной формы;

3)по рельефу: выпуклые, уплощенные;

4)по характеру поверхности: гладкие или шероховатые;

5)по характеру краев: ровные, изрезанные, волнистые;

6)по оптическим свойствам: прозрачные, полупрозрачные, непрозрачные;

7)по цвету: бесцветные или пигментированные (золотистые, красные, сине-

20