9.Методы окраски микроорганизмов.

Препараты микроорганизмов окрашивают красителями. Окраска бактерий – сложный физико – химический процесс. Отношение микроорганизмов к красителям называют тинкториальным свойством.

Простые методы окраски позволяют определить наличие бактерий в препарате, их форму, размеры, взаиморасположение.

Наиболее широко применяются следующие красители: красные (фуксин основной, фуксин кислый, конго красный, сафранин нейтральный красный); синие (метиленовый синий); фиолетовые (генциановый); желтокоричневые (везувин, хризоидин).

Простые методы окраски. Фиксированный мазок окрашивают каким – либо одним красителем, например, фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5 мин), промывают водой, высушивают и микроскопируют.

Сложные методы окраски. Используют несколько красителей. К ним относят окраску по Граму, Цилю – Нильсену, Нейссеру, Романовскому – Гимзе и др. Дифференцирующий метод, используемый для классификации бактерий - метод окраски по Граму. Все бактерии подразделяются на гр (+) и гр (-), это облегчает диагностику и выбор средств антимикробной терапии. Все болезнетворные кокки, кроме гонококка и менингококка, являются гр (+); вибрионы, трепонемы, кампилобактеры и энтеробактерии – гр (-), все патогенные бациллы и клостридии – гр (+).

Другие методы сложной окраски.

Окраска по Романовскому – Гимзе. Препараты из исследуемого материала (кровь, гной, тканевая жидкость и др.), культуры клеток окрашиваются красителем Р. – Г., состоящим из метиленового синего, эозина и азура. цитоплазма простейших окрашивается в голубой цвет, ядра – в красный; элементы крови: эритроциты в розовый, ядра лейкоцитов – в фиолетовый, цитоплазма – в голубой, базофильная зернистость – в синий, эозинофильная – в красный, нейтрофильная – в сиреневый.

Окраска по Цилю – Нильсену. Для кислотоустойчивых микробактерий (возбудит. туберкулеза, лекры, микобактериозов), актиномицетов и др. Используют две краски – фуксин и метиленовый синий. Кислотно-устойчивые окрашиваются в красный цвет, неустойчивые – в сине-голубой цвет.

Окраска спор по методу Ожешко (в основе метод Циля - Нильсена). Препараты протравливают кислотой, затем окрашивают. Споры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий.

Окраска по методу Нейссера. Зерна волютина окрашиваются в темно – синий цвет, цитоплазма – в желтый цвет.

Окраска по методу Бури – Гинса. Используются две краски – черная тушь и фуксин. Капсула не окрашивается, образуется ореол вокруг красной клетки. По методу Бури используют тушь. На темном фоне неокрашенные капсулы.

Окраска по Морозову методом серебрения. Метод применяется для выявления путем импрегнации серебром спирохет, вирусов и микроструктур бактерий (жгутиков, включений).

10.Приготовление препарата для микроскопии

Для световой микроскопии микроорганизмов готовят препараты – мазки из культуры бактерий, выращенных на плотной и жидкой питательной среде, из исследуемого материала – гноя, мокроты, крови, препараты – отпечатки из внутренних органов, мяса. Соответствующим образом для каждого случая приготовленные препараты высушивают, фиксируют, окрашивают и микроскопируют с иммерсионной системой.

Изучение микроорганизмов в живом состоянии используют для определения их подвижности, т.е.наличия у них жгутиков. Препараты готовят методами раздавленной или висячей капли и микроскопируют с сухим или иммерсионным объективом. Более четкие результаты получают при микроскопировании в темном поле им фазово-контрастной микроскопии.