4. Строение микроскопа.

Микроскоп состоит из механической (подсобной) и оптической (главной) частей.

Механическая часть – это штатив, предметный столик и тубус (труба).

Штатив в виде подковы имеет колонкутубусодержатель в форме дуги. Для регуляции положения тубуса есть макровинт для предварительной ориентировочной установки изображения объекта и микровинт для четкой установки на фокус.

Предметный столик - служит для размещения на нем препарата; столик вращается во взаимно перпендикулярных плоскостях с помощью винтов. Для закрепления препарата имеются клеммы – зажимы; в центре столика круглое отверстие для освещения препарата снизу.

Тубус (труба) – оправа, в которой заключены элементы оптической системы микроскопа. В нижней части тубуса объективодержатель – револьвер с гнездами для объективов, в верхней части – окуляры.

Оптическая часть микроскопа состоит из объектива и окуляра и вспомогательной осветительной системы – зеркала и конденсора.

Зеркало и конденсор располагаются под предметным столиком. Зеркало отражает падающий на него свет в конденсор.

Конденсор, состоящий из 2 – 3 короткофокусных линз, собирает лучи, идущие от зеркала, и направляет их на объект. Линзы конденсора вмонтированы в металлическую оправу и перемещаются вверх и вниз специальным винтом. Интенсивность освещения регулируется ирисовой (лепестковой) диафрагмой, состоящей из стальных пластинок. Конденсор необходим при работе, прежде всего с иммерсионной системой.

Объектив – наиболее важная часть микроскопа, от него зависит изображение объекта. В гнездах револьвера располагаются объективы с обозначениями на их оправе величины увеличения объекта (8х, 40х, 90х). Исследование препарата начинают с малого увеличения ( 8х ), затем меняют объектив на 40х или 90х.

Объективы рассчитаны на работу с покровным стеклом толщиной 0,17 ± 0,1мм.

Окуляр служит непосредственным продолжением «линз» (хрусталиков) глаз человека.

Окуляр состоит из двух линз – верхней и нижней, заключенных в металлическую оправу. Нижняя линза собирает лучи, идущие от объектива, и они проходят через маленькое отверстие глазной линзы.

Назначение окуляра – прямое мнимое увеличение изображения, которое дает объектив.

Увеличение окуляра выгравировано на его оправе. Рабочее увеличение в пределах от 4х до 15х. окуляры бывают разных типов. Бинокулярные насадки более удобны в работе.

Кратность увеличения объекта определяется умножением показателя объектива на увеличение окуляра.

5. Бактериоскопия.

Для микробиологической диагностики инфекций используют различные методы:

Бактериоскопические – изучают возбудителя по морфологическим признакам в нативных или окрашенных препаратах;

Бактериологические - предполагают культивирование возбудителя, изучение его культуральных и физиологических свойств, выделение чистой культуры, идентификацию и типирование возбудителя;

Биологические – изучают особенности взаимодействия микроба с экспериментальными животными;

Серологические – основаны на изучении антигенных свойств возбудителя и реакций макроорганизма на эти антигены (серологическая и аллергологическая диагностика; антигенная идентификация микроорганизмов или их компанентов);

Молекулярно – генетические - обнаружение фрагментов генома возбудителя при помощи молекулярной гибридизации ДНК или РНК и ПЦР.

Метод бактериоскопического исследования приобретает особое значение, если микроб имеет морфологические и тинкториальные особенности или особую локализацию в тканях, клетках организма. Иногда бывает достаточно морфологического исследования для диагностики. Но для большинства инфекций микроскопия имеет лишь ориентировочное значение.

Применяются не только обычные методы оптической микроскопии в проходящем свете, но и специальные: в темном поле зрения, фазово – контрастный, люминесцентный и электронный.

Световая микроскопия. Световой микроскоп имеет сухой и иммерсионный объективы. Сухой объектив применяется для изучения относительно крупных биологических объектов. При изучении микроорганизмов используют иммерсионный («погружной») объектив (увеличение 60х – 100х). В качестве иммерсии используют масло кедровое, персиковое, «иммерсиол» и др., в которое погружают объектив. Разрешающая способность иммерсионного объектива около 0,2 мм. Макс.увеличение 2000х – 3000х.

Микроскопия в темном поле зрения. Используется для обнаружения в неокрашенных (нативных) препаратах возбудителей сифилиса, лептоспироза, возвратного тифа и др. болезней, а также для изучения подвижности микроорганизмов. Используют сухой объектив (40х).

Фазово – контрастная микроскопия. Помогает выявить детали структуры живых микроорганизмов, влияние на них различных факторов ( в-в, антибиотиков и др.).

Люминесцентная микроскопия. Люминесценция или флюоресценция - способность некоторых объектов и красителей при попадании ультрафиолетовых или других коротковолнистых лучей света испускать лучи видимой части спектра (зеленые, желтые, оранжевые). Препараты готовят обычным способом, фиксируют 5 – 10 мин. в этаноле или ацетоне и наносят на 20-30 мин. флюорохром, промывают, накрывают покровным стеклом и микроскопируют.

Преимущества люминесцентной микроскопии: цветное изображение, контрастность, обнаружение бактерий, вирусов и их АГ и др.

Электронная микроскопия. Вместо света используется поток электронов - источник электронная пушка. Вместо линз – электромагниты. Эл.микроскопы дают возможность видеть частицы величиной 0,2 – 2,0 нм (вирусы), исследовать срезы тканей, клеток, микроорганизмов, полученных с помощью ультрамикротома.