4. Реакция нейтрализации (рн)

Ее проводят путем введения смеси антиген-антитело животным или чувствительным тест-объектам (эмбрионам, культуре клеток). Отсутствие повреждающего действия у них свидетельствует о специфичности взаимодействия комплекса антиген-антитело, о нейтрализующем действии иммунной сыворотки.

5. Реакции лизиса (рл) и связывания комплимента (рск), их применение

Лизирующее действие проявляется в реакциях лизиса и связывания комплемента. В основе РЛ — взаимодействие антигенов со специальными антителами.

Иммуноглобулины при содействии комплемента разрушают эритроциты, выходит гемоглобин и смесь из мутной становится прозрачной. Реакция называется реакцией гемолиза. Могут лизироваться и бактерии.

Реакции с участием комплемента основаны на активации комплемента комплексом антиген — антитело.

В РСК при соответствии друг другу антигенов и антител образуется иммунный комплекс ИК, к которому через Fc — фрагмент антител присоединяется комлемент С, т.е. происходит связывание комплемента комплексом антиген-антитело, комплемент остается свободным. РСК проводят в две фазы: 1ф- инкубация смеси антиген+антитело+комплемент; 2ф- (индикаторная)-выявление в смеси свободного комплемента добавлением к ней гемолитической системы из эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1ф при образовании комплекса антиген-антитело происходит связывание ими комплемента, и тогда во 2ф не произойдет гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов (реакция +). Если антиген и антитело не соответсвуют друг другу (в исслед. образ. нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2ф присоединится к комплексу эритроцит-антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция -). РСК применяют для диагностики многих инфекционных болезней (сифилис, реакция Вассермана).

Реакция радиального гемолиза — ставят в лунках геля из агара, содержат эритроциты барана и комплемент. При внесении в лунки гемолитической сыворотки вокруг них образуется зона гемолиза в результате радиальной диффузии. Таким образом определяют активность комплемента и гемолитической сыворотки, а также антитела в сыворотке крови больных гриппом, краснухой, клещевым энцефалитом. Для этого на эритроцитах адсорбируют соответствующие антигены вируса, а в лунки геля с данными эритрацитами добавляют сыворотку крови больного. Противовирусные антитела взаимодействуют с вирусными антигенами, адсорбированными на эритроцитах, образуют комплекс, к которому присоединяются компоненты комплемента и наступает гемолиз.

Реакция иммунного прилипания основана на активации системы комплемента корпускулярными антигенами (бактериями, вирусами), обработанными иммунной сывороткой. Активизируется третий компонент комплемента С3б, который присоединяется к корпускулярному антигену в составе иммунного комплекса. На эритроцитах, тромбоцитах, макрофагах имеются рецепторы, для С3б и при смешивании этих клеток с иммунными комплексами, несущими С3б, происходит их соединение и агглютинация.

6. Реакции иммунофлюоресценции РИФ- (метод Кунса) — основана на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминисцентного микроскопа (прямой метод).

Обработанные специфической сывороткой бактерии светятся по периферии клетки в виде зеленой каймы. Разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом.

Метод Кунса является экспресс- диагностикой для выявления антигенов микробов или определения антител.

7. Иммуноферментный анализ (ИФА) — выявление антигенов с помощью соответствующих им антител, конъюгированных ферментом-меткой (пероксидазой, щелочной фосфатазой).

После соединения антигена с меченной ферментом иммунной сывороткой в смесь добавляют субстрат и хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и продукты расщепления изменяют цвет хромогена -интенсивность окраски прямо пропорциональна количеству связавшихся молекул антигена и антител.

ИФА применяют для диагностики бактериальных, вирусных и паразитарных болезней (ВИЧ, гепатита В и др.), определения БАВ в очень низких концентрациях.

Радиоиммунологический анализ (РИА) — высокочувствительный метод, основанный на реакции антиген — антитело с применением антигенов или антител, меченных радионуклидом ¹²⁵J, ¹⁴C, ³H, ⁵¹Cr и др.).

Иммуноблоттинг — высочувствительный метод, основанный на сочетании электрофореза и ИФА или РИА.