9. Методы определения чувствительности к лекарственным препаратам

а). Определение фагочувствительности.

Для определения видовой и родовой принадлежности бактерий используют чувствительность фагов к бактериям как один из признаков для их идентификации. Для этого чашки Петри с плотной питательной средой засевают газоном исследуемую культуру, посев подсушивают и на его поверхность наносят петлей или пастеровской пипеткой капли фага определенного разведения. Ставят в термостат на 12-18 часов. Литическое действие фага учитывают по появлению прозрачных «негативных»пятен, что позволяет исследуемые бактерии отнести к соответствующему виду или роду.

Определение фаговаров бактерий. Проводится для эпидемиологического анализа и установления источников инфекции ( при кишечных, стафилококковых, дифтерийных и др.инфекциях).

Чашки с МПА расчерчивают с обратной стороны на квадраты по количеству фагов и маркируют. Чашку засевают 3-4 часовой бульонной культурой бактерий газоном, подсушивают, на каждый квадрат наносят копию соответствующего фага в тест- разведении и инкубируют в термостате 12-18 часов. Учитывают чувствительность бактерий к определенному фагу по литическому действию. Это фаготипирование.

Определение титра бактериофага. Количество фаговых частиц в исследуемом материале определяют методом агаровых пластинок по Грациа. Присутствие бактериофагов в материале является косвенным показателем наличия соответствующих бактерий. Чашку с агаром засевают смесью разведенного фага и индикаторных бактерий в расплавленном агаре. Негативные колонии фага соответствуют количеству фаговых частиц.

Т.обр, бактериофаги применяют в лабораторной диагностике для идентификации бактерий с целью выявления источника инфекции( эпидемиологическое маркирование).

Кроме диагностических бактериофагов, имеются лечебно- профилактические, применяемые для лечения и профилактики заболеваний ( дизентерия, холера и др.).

б). Определение чувствительности м-ор-ов к антибиотикам.

Для определения чувствительности культур возбудителей к антимикробным препаратам применяют диско – диффузионный метод, метод серийных разведений, метод Е-тестов, пограничных концентраций и др.

Часто используют резистограмму штаммов – по их устойчивости / чувствительности к химиопрепаратам для оценки идентичности штаммов, выделенных из разных источников.

Чувствительность м-ор-ов к антибиотикам и др. ХТП необходимо определять в каждом случае инфекции – в начале болезни и периодически – в ходе лечения. Наиболее обширную группу составляют противобактериальные антибиотики.

Главным показателем чувствительности является минимальноая ингибирующая концентрация – МИК мкг/мл, т.е. концентрация антибиотика, задерживающая рост микроба – возбудителя в стандартном опыте.

М-ор-зм считается чувствительным, если есть хороший терапевтический эффект.

Устойчивым, если возбудитель имеет механизмы резистентности к данному антибиотику и нет клинического эффекта при лечении даже максимальными дозами. Микроорганизм умеренно устойчивый, если по своей чувствительности занимает промежуточное положение между чувствительными и устойчивыми штаммами и хороший эффект достигается при использовании высоких доз препарата.

Метод серийных разведений – МИК определяют по мин.конц.антибиотика, задерживающей рост, содержащих убывающие концентрации антибиотика.

( стр.43, табл.3).

Диско – диффузионный метод.

Чистую культуру возбудителя засевают «газоном»на питат.агар стандартизированной суспензией. Затем на поверхность агара укладывают станд.бумажные диски, пропитанные антибиотиками ( на чашку диаметром 90 мм – 6 дисков). По диаметру зоны определяют степень чувствительности к антибиотику: чувствительны S, умеренно- устойчивые J и устойчивые R. Для S – достаточно трехкратного превышения МИК; для J – максимальные дозы, для R - данный антибиотик неэффективен.

Метод Е – тестов – используют бумажные полости, пропитанные рядом убывающих концентраций определенного антибиотика (128, 64, 32, 16 …мк/мл), укладывают на поверхности питательного агара, заселенного культурой в виде «газона». Зона задержки роста сужается в области малых концентраций и пересекает полоску на уровне МИК (рис.1.14, стр.45).

При массовых исследованиях используют автоматизированные методы определения чувствительности к антибиотикам( чаще – методы серийных разведений в планшетах и пограничных концентраций – микрометоды).