- •Биохимия белков
- •Предисловие
- •2. Нингидриновая реакция
- •3. Реакция Сакагучи (на аргинин)
- •4. Реакция Фоля (на цистеин и цистин)
- •5. Ксантопротеиновая реакция
- •6. Реакция Милона (на тирозин)
- •7. Реакция Адамкевича (на триптофан)
- •8. Реакция Ваузене (на триптофан)
- •9. Реакция Паули (на гистидин и тирозин)
- •Оформление работы
- •1. Радиальная (круговая ) хроматография
- •2. Нисходящая хроматография
- •Техника безопасности
- •Оформление работы
- •Оформление работы
- •Оформление работы
- •Устройство колориметра фотоэлектрического
- •Общий вид прибора
- •Оформление работы
- •Техника безопасности
- •Оформление работы
- •Техника безопасности
- •Техника безопасности
- •Оформление работы
- •Техника безопасности
- •Оформление работы
- •Техника безопасности
- •Список рекомендуемой литературы
4. Реакция Фоля (на цистеин и цистин)
При кипячении белка со щелочью от цистеина (цистина) легко отщепляется сера в виде сероводорода, который в щелочной среде образует сульфид натрия:
СH2SH CH2OH
│ │
CHNH2 + 2 NaOH CHNH2 + Na2S + H2O
│ │
COOH COOH
цистеин серин
Для выявления сульфида натрия используют ацетат свинца, который при взаимодействии с гидроксидом натрия превращается в его плюмбит:
Pb(CH3COO)2 + 2NaOH Pb(ONa)2 + 2CH3COOH
В результате взаимодействия ионов серы и свинца образуется сульфид свинца черного или бурого цвета:
Na2S + Pb(ONa)2 + 2H2O PbS + 4NaOH
(черный
осадок)
Ход работы. К 1 мл 1% раствора яичного белка или кусочку шерстяной нити добавляют 1 мл 30% щелочи и 3-4 капли 5% раствора ацетата свинца. При интенсивном кипячении жидкость окрашивается в бурый или черный цвет.
Реакцию Фоля проделывают с 1% раствором желатина, в составе которого нет серосодержащих аминокислот. Черный осадок сульфида свинца не образуется.
5. Ксантопротеиновая реакция
(на ароматические аминокислоты)
При нагревании с концентрированной азотной кислотой белки дают желтое окрашивание. Реакция обусловлена наличием в белках циклических аминокислот (фенилаланина, тирозина и триптофана) и основана на образовании нитропроизводных этих аминокислот, имеющих желтую окраску:
Нитропроизводные аминокислот в щелочной среде образуют соли хиноидной структуры, окрашенные в оранжевый цвет:
Ход работы. К 1 мл 1% раствора альбумина или яичного белка прибавляют 5 капель концентрированной азотной кислоты. Появляется осадок. При осторожном нагревании смесь окрашивается в желтый цвет. После охлаждения осторожно добавляют 10 капель концентрированного раствора аммиака (или 30% раствора едкого натра), при этом желтая окраска переходит в оранжевую.
Проделать ксантопротеиновую реакцию с ароматической аминокислотой, взяв вместо раствора белка 0,1% раствор тирозина.
Ксантопротеиновая реакция не идет с белками, не содержащими циклических аминокислот (клупеином, сальмином, желатином). Проделать реакцию с 1% раствором желатина.
6. Реакция Милона (на тирозин)
Реакция Милона открывает в белке тирозин, в составе которого имеется фенольный радикал. При нагревании белка с реактивом Милона (смесь нитратов и нитритов ртути (I) и (П), растворенных в концентрированной азотной кислоте) образуется осадок, окрашенный сначала в розовый, а затем в красный цвет. Реактив Милона дает окрашивание почти со всеми фенолами:
Ход работы. К 1 мл 1% раствора яичного белка добавляют 3-5 капель реактива Милона и осторожно нагревают до образования окрашенного в красный цвет осадка.
Проделать реакцию Милона с 1% раствором желатина, 0,1% раствором тирозина и фенола.
7. Реакция Адамкевича (на триптофан)
Белки, содержащие триптофан, в присутствии глиоксиловой и серной кислот дают красно-фиолетовое окрашивание. Реакция основана на способности триптофана взаимодействовать в кислой среде с альдегидами (глиоксиловой кислотой) с образованием окрашенных продуктов конденсации:
Глиоксиловая кислота всегда присутствует в небольшом количестве в ледяной уксусной кислоте, которую используют в реакции Адамкевича.
Ход работы. К 1 мл 1% раствора яичного белка добавляют 1 мл ледяной (концентрированной) уксусной кислоты и осторожно нагревают до растворения осадка. После охлаждения к смеси осторожно добавляют 1 мл концентрированной серной кислоты (по каплям по стенке пробирки, чтобы жидкости не смешались). Через 5-10 минут на границе раздела двух слоев наблюдают образование красно-фиолетового кольца.
Проделывают реакцию Адамкевича с 0,1% раствором триптофана.