1.5. Твины

Твины—это детергенты (поверхностно-активные вещества, которые, расщепляя молекулы белка или жира на различные со­единения, проникают в жировую и казеиновую пленки). В не­больших концентрациях твины обеспечивают рост культур мик­роорганизмов не изменяя их морфологических и биологических свойств (Карташова В. М., 1973). В то же время, имеются данные

о специфических изменениях в структуре клеточных стенок и цитоллазматических мембран у L.monocytogenes,Sal.typhimuri-um, Ps. aeruginosa и Ps. pseudomallei при обработке их 0,5 и 1% твин-20 (CherepovaN.,VeljanovD., 1994).

Бруцеллы разных видов способны гидролизовать твины (Ры­кова В. И., Домарадский И. В., 1963) и в качестве компонентов питательных сред для их выращивания рекомендуются твин-40 (АльтонДж., Джонс Л., 1968),твин-60(ГрушинаТ. А., 1975, 1978) и твин-80 (Бакулов И. А. и соавт., 1993) с целью замены сыворот­ки и повышения ростовых качеств сред.

Крылова М. Д. (1969, 1972) при культивировании Corynebacte-rium diptheria добавляла к мартеновскому бульону 0,02% твина-80. Collins (1986) рассматривает способность к гидролизу твина-80 у С.cystitidisкак признак, позволяющий дифференцировать его от С.renaleи С.pilosum, которые такой способностью не обладают.

Бузолева Л. С, Пручкина 3. В. (1990) для выявления липазы у бактерий кишечной группы (шигелл и сальмонелл) после пред­варительного засева в различные среды богатые органическими веществами, вторым этапом высевали инокулят на плотные ага­ровые среды с твинами-20, -40 и -60, являющиеся субстратами биохимических реакций, лежащих в основе определения липазы бактерий. Показано значительное снижение активности липазы с увеличением концентрации твинов. Авторы предполагают, что увеличение содержания твина в реакционной среде резко снижа­ет эффективность процесса гидролиза.

По данным AkbulutN.etal. (1994) для выделения и диффе­ренциацииY.enterocoliticaагар МакКонки модифицированный с твином-80 оказштся эффективнее сред МакКонки:SS; висмут-сульфитной с бриллиантовым зеленым; желчной с фиолетовым красным и дезоксихолатной.

Аэробный питательный агар-среда для Bacteroidesfragilis(Петраков А. А., 1982) содержит твин-80. Для упрощения проце­дуры выделения Вас. fragilis предлагается готовить среды на ос­нове сухой среды для контроля стерильности производства ЦНИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова (Москва) с до­бавками гемина, витамина К, твина и др. (Петраков А. А., 1982; Баженов Л. Г., ИсхаковаX. И., 1985).

Большинство видов рода Serratia(энтеробактерии) способны гидролизовать твин-80, исключение составляетSenodorifera.

Твин-80 входит в состав жидкой синтетической среды № 7 для выделения микобактерий туберкулеза из патологического материа­ла (Bernhardt С, Rentgen H.. 1975). Для их культивирования и фаго-типирования Garcia-Rodriguez J. et al. (1986) эффективно использо­вали среду RVB с твином-80. Между тем, еще в 1953 году Bloch и Noll показали слабовирулентность микобактерий туберкулеза, вы­ращенных на среде с твином-80, и восстановление вирулентности при пересеве на среды без него (цит. по Кравченко М. А., 1984). В средах с твином-80 с потерей гидрофобности наблюдается диффуз-

18

19

ный рост микобактерий (Сидоров М. А. и соавт., 1995). Способ­ность к гидролизу твина позволяет дифференцировать отдельные виды микобактерий (Lawrence, Kubica, 1986). Кроме того, твин-80 ингибирует рост микобактерий (Thomas С. et al., 1989). По данным Masaki S. et al. (1990, 1991) 0,05% (0,5 мг/мл) или более твина в жид­кой среде оказывает бактериостатическое действие, приводит к уд­линению клеток М. avium, уменьшает содержание в них гликоли-пидов, а также изменяет результаты биохимических тестов на ре-дуктазу нитратов, уреазу и арилсульфатазу. В то же время, твин-80 и аналогичные ему сурфактанты потенцируют действие антибиоти­ков на М. avium, что объясняется действием его непосредственно на клеточную стенку данного микроорганизма. Шим Н. В. и соавт. (1989) рассматривают твин-80 как агент, вызывающий L-трансфор-мацию микобактериальных клеток.

Признаком, дифференцирующим Erysipelothrixrhusiopathie(возбудителя рожи свиней и эризипелоида людей) от бактерий сходных родов, является неспособность к гидролизу твинов-20 и-80, тогда как листерии их гидролизуют, а у коринебактерий, лак-тобацилл и др. этот признак не определялся (Сидоров М. А. и со­авт., 1995).

Твин-80 входит в состав сред Рогоза и МРС—для культивиро­ванияLactobacillus; среды Бриге в модификации Шарп—длякультивирования Pediococcus и среды для определения псевдока-талазы (ГОСТ 1044.11-89).

Из ряда сред использованных Lorenzini R., Bernardis F. (1987) для культивирования, идентификации и сохранения грибовMalassezia pachydermatis наиболее пригодным оказался сахарный агар, обогащенный 1,5% дрожжевого экстракта и 1% твина-80. Предложена среда для идентификацииCandidaalbicansиCrypto-coccusneoformans, содержащая твин-80 и желчь (J.Clin.Microbi­ol., 1977, v. 5, p. 236—243). При сравнительном изучении 4 пита­тельных сред Kurup V. et al. (1986) установили, что для получения бластоспор из мицеальной формы возбудителя североамерикан­ского бластомикоза (Blastomycesdermatitidis) наиболее пригодна альбумино-казеиновая среда с твином, на которой обнаружива­ли характерные клетки с единичными почками.WallerJ.etal. (1991) для поиска хламидоспор С.albicansпроизводили посев на агаризованную среду с твином-80.

Волина Ё. Г. и соавт. (1982) изучали динамику формирования колоний лептоспир на средах, содержащих твин-80. Один из наиболее эффективных и экономически доступных источников жирных кислот, необходимых лептоспирам,—водорастворимые липиды. Из последних предпочтительны полисорбаты, к кото­рым относятся твины 20—80—эфиры соответствующих жирных кислот. Содержание последних в них следующее (%):

твин-80: олеиновая кислота—64,45; линолевая—21,86; паль­митиновая—7,64; пальмитоолеиновая—1,89; стеариновая—1,44 и линоленовая—0,68;

твин-60: стеариновая кислота—64,26; пальмитиновая—33,96; гептодекановая—1,58; миристиновая—0,84 и арахиновая—0,14;

твин-40: пальмитиновая кислота—94,77; стеариновая—2,88; миристиновая—1,68; каприловая—0,125; лауриновая—0,126 и пентадекановая—0,229;

твин-20: лауриновая кислота—55,16; миристиновая—24,26; пальмитиновая—9,46; каприновая—4,65; каприловая—3,88 и стеариновая—1,23 (Ellinghausen, 1983).

Однако твины содержат определенное количество свободных жирных кислот (твин-80—до 3%), токсичных для лептоспир. Простейший способ их детоксикации—добавление к среде сыво­ротки крови или альбумина в обычных концентрациях или со­единение твина с мелким порошком древесного угля, который хорошо адсорбирует все токсические примеси.

Оптимальная концентрация твина-60 в сложной среде соста­вляет 200—300 мкг/л; для смеси твина-60 и твина-80 концентра­ция каждого компонента равняется соответственно 200 и 50 мкг/мл.

Для культивирования лептоспир предложены твин-альбуми-новые среды Ellinghausen,McCulloghв модификацииJohnson,Harris (1967) и Russel E, Russel С. (1986), а также твин-альбумин-сывороточная среда Эллиса для выделенияL.interrogansи усо­вершенствованная элективная среда для выделения лептоспир из контаминированного материала (AdlerВ.etal., 1986).

Белоусов В. И., Тюрина И. Н. (1996) показали возможность выращивания производственных штаммов лептоспир на твин-альбуминовой среде с использованием отечественных компо­нентов. Очищенный на ионообменной колонке отечественный твин-80 по качеству превосходил таковой фирмы «Merck». При промышленном культивировании оказался годным и неочищен­ный твин, но для его детоксикации на 0,25% в среду необходимо было добавлять не менее 0,2% альбумина.

Из жидких сред наиболее эффективной для накопления бак-териоцинов Bord.pertussisоказалась по данным Бакулиной Н. А.и соавт. (1980) среда типа Коэн-Уилера с добавлением 0,1% тви­на-80.

Kelly M. et al. (1988) провели комплексное двухэтапное иссле­дование по оценке 4 сред для выделения шт.Aeromonasиз фека­лий, в том числе агара МакКонки, содержащего 100 мкг/мл ам­пициллина и 1% твина-80.