паразитка - шпоры / 12.прижизненная и посмертная диагностика

12.Гельминтоскопия. Для нахождения гельмин­тов в экскрементах поступают следующим образом. Фекалии смешивают с водой и дают смеси отстояться. Через некоторое время верхний слой воды сливают, а к осадку добавляют свежую порцию воды, так повто­ряют несколько раз. Тем самым удаляется большая часть посторонних веществ, а в осадке остаются пара­зиты и нерастворимые тяжелые части фекалий. Затем осадок исследуют макроскопически и микроскопически.

Макроскопическое исследование. Промытый осадок фекалий вновь разбавляют водой, небольшими порция­ми наливают в черную кюветку и при медленном пока­чивании ее осадок внимательно просматривают. Неко­торые формы гельминтов будут лучше видны на чер­ном фоне, другие (трематоды) — на белом. С этой целью одну половину кюветки рекомендуют покрывать белой эмалевой краской. Таким образом последователь-, но просматривают весь осадок. Обнаруженных гельмин­тов выбирают иглой или кисточкой и фиксируют.

Мелкие формы паразитов исследуют микроскопиче­ски с помощью штативной лупы (6—10-кратное увеличение). Осадок просматривают небольшими порциями в бактериологических чашках при проходящем свете. Данный метод применяют также после дегельминтиза­ции с целью учета результатов проведенного лечения.

Когда гельминты собраны, необходимо определить их видовой состав.

Для проведения исследований методами гельминтоо-воскопии и гельминтоларвоскопии применяют следую­щие оборудование и средства: микроскоп биологический (с наклонным тубусом), предметные стекла, чашки Пет­ри, стаканчики стеклянные или из синтетического ма­териала с верхним диаметром не более 4—5 см (мен­зурки в форме усеченного конуса с делениями на 30 мл, полный объем— 50 мл), фильтрационные ситечки с ме­таллической или капроновой сеткой (из чулочной тка­ни), величина сторон ячеек которой должна быть 0,25— 0,3 мм, стеклянные палочки, металлические петли с диаметром кольца 8—10 мм, растворы гранулированной или обычной аммиачной селитры плотностью 1,3, серно­кислого цинка плотностью 1,24, глицерин, гидрофиль­ный целлофан, денсиметр для проверки плотности фло­тационного раствора, аппарат Бермана.При диагностике гельминтозов используют насыщен­ные растворы технической селитры (гранулированной) или аммония нитрата с плотностью 1,32 (1500 г на 1 л кипящей воды), натриевой селитры или натрия нитрата с плотностью 1,38 (соотношение соли с горячей водой 1:1), или магния сульфата с плотностью 1,26—1,28 (920 г на 1 л горячей воды), натрия тиосульфата или гипосульфита натрия, плотность которого от 1,38—1,40 (1750 г на 1 л кипящей воды).

Раствор сернокислого цинка (сульфата цинка) плот­ностью 1,24 готовят так же, как и первый раствор, но из расчета 400 г на 1 л воды. Применяют для диагно­стики диктиокаулезов жвачных.

Ге л ьм,интоо вое копия. Метод нативного маз­ка — самый простой метод гельминтоовоскопического исследования фекалий. Его можно применять в любых условиях, у домашних животных всех видов. Техника его такова. Небольшой (с горошину) кусочек фекалий берут стеклянной или деревянной палочкой, помещают на предметное стекло, добавляют 2—3 капли смеси равных частей глицерина и воды, тщательно смешива­ют. После удаления твердых частиц содержимое на­крывают покровным стеклом и исследуют под микро­скопом. Вместо глицерина можно взять каплю простой воды. Глицерин просветляет препарат, что облегчает ис­следование и предохраняет препарат от быстрого высы­хания. От одного животного одновременно рекомендуют готовить 2—3 препарата. Недостаток этого метода тот, что при слабой инвазии он дает большой процент от­рицательных результатов. Данным методом можно ис­следовать фекалии на стронгилидоз, аскаридоз, фас-циолез, трихоцефалез и др.

Метод последовательного промывания (метод осаж­дения). Небольшую порцию фекалий (5—10 г) смеши­вают с 10-кратным количеством воды. Смесь филь­труют через металлическое сито или марлю, отстаива­ют в течение 5 мин. После этого слой жидкости сли­вают, а к осадку добавляют чистую порцию воды и снова дают отстояться ей 5 мин. И так до тех пор, пока верхний слой жидкости не станет прозрачным. Затем жидкость сливают, а осадок исследуют под ми­кроскопом на наличие яиц трематод. Данным методом диагностируют фасциолез и другие трематодозы.

Флотационные методы. Метод Фюллеборна. 10—20 г фекалий помещают в банку или стаканчик емкостью 100—200 мл и тщательно растирают стеклян­ной или деревянной палочкой в насыщенном растворе поваренной соли. В 1 л воды растворяют 400 г соли, нагревают до кипения и фильтруют через вату или мар­лю. Раствор употребляют холодным; плотность его 1,2.

Раствор приливают постепенно, все время переме­шивая фекалии, причем общее количество добавляемого раствора должно быть примерно в 20 раз больше количества фекалий. Затем жидкость фильтруют через металлическое сито и оставляют на полчаса; за. это время яйца всплывут н# поверхность, так как у насы­щенного раствора соли большая плотность, чем у яйца. С поверхности отстоявшейся жидкости металлической петлей (диаметром не более 1 см), согнутой под пря­мым углом, снимают пленку, переносят ее на предмет­ное стекло и покрывают покровным стеклом. Получен­ные препараты исследуют под микроскопом.

Метод Фюллеборна рекомендуют применять глав­ным образом для обнаружения яиц круглых гельмин­тов (аскарид, стронгилид, трихоцефалят и др.) и ча­стично для ленточных червей (тений, аноплоцефалид).Метод Дарлинга комбинирует процедуры осаждения и флотации. Фекалии смешивают с водой до полужидкой консистенции и центрифугируют 3—5 мин, вследствие чего яйца гельминтов осаждаются на дно. Затем жидкость из пробирки сливают, а к осадку при­бавляют жидкость Дарлинга (глицерин, смешанный в равных частях с насыщенным раствором поваренной соли). Осадок тщательно размешивают и вторично центрифугируют 3—5 мин. И уже после этого яйца па­разитических червей из осадка всплывают на поверхМетод седиментации с последовательным промыва­нием. Пробу фекалий (3 г) кладут в стаканчик, зали­вают небольшим количеством воды и тщательно разме­шивают палочкой, затем добавляют воду порциями до

тывания градуированной пипеткой набирают 0,075 или 0,1 мл смеси, наносят ее на предметное стекло и ис­следуют под микроскопом, подсчитывая число яиц гель­минтов. Для того чтобы установить количество яиц в 1 см³ (1 г) фекалий, найденное число яиц умножают на 200 (если исследовали 0,075 мл смеси) или на 150 (если исследовали 0,1 мл смеси).

Гельминтоларвоскопию применяют для диа­гностики диктиокаулезов, мюллериоза и других прото-стронгилидозов, а также стронгилятозов пищеваритель­ного тракта жвачных и стронгилоидозов разных жи­вотных.

Метод Бермана и Орлова. Пробы фекалий (10 г) помещают в воронки аппарата Бермана на металличе­ской сетке или завернутыми в кусочки марли. Предва­рительно воронки заливают водой комнатной темпера­туры. Заполненный пробами аппарат оставляют при комнатной температуре на 3—6 ч. За это время личин­ки диктиокаулюсов выползают из пробы в жидкость и опускаются по трубке на дно пробирки. Затем осторож­но отсоединяют резиновые трубки и быстрым движени­ем, не встряхивая осадок, сливают жидкость из каждой пробирки до осадка (можно отсасывать воду пипеткой). Пробирки ставят в штатив. Осадок после встряхивания разливают на предметные стекла и микроскопируют при малом увеличении. Личинки нематод подвижны, легко обнаруживаются. Вместо воронок в аппарате Бер­мана можно использовать резиновые груши со срезан­ным дном, в которые закладывают пробы. К наконечни­кам прикрепляют гельминтологические пробирки или же перекрывают их зажимами Мора.

Упрощенная модификация метода Бермана (по Шильникову). В стаканчики с водой кладут пробы, за­вёрнутые в марлевые салфетки. Через 3—6 ч пробы вынимают, жидкость отстаивают 10—15 мин, после че­го стаканчики наклоняют и из них пипеткой отсасывают прозрачный слой воды, пока не начнет всасываться осадок. Затем капли осадка пипеткой наносят на пред­метное стекло для микроскопии. Если осадок получа­ется густой, то в стаканчик наливают воду и взбалты­вают, затем отстаивают 10 мин, после чего верхний слой жидкости сливают. Пипетку после взятия каждой пробы тщательно промывают водой в двух банках (во­ду в банках меняют после исследования 50 проб).

Метод седиментации с центрифугированием (экс­пресс-методика по Котельникову, Корчагину и Хрено­ву) . Пробы фекалий (3—5 г) от овец и коз кладут в пробирки с водой температурой 20—22°. Пробирки центрифугируют со скоростью 1000—1500 об/мин в те­чение 2 мин. Затем пробы вынимают пинцетом, воду сливают до осадка, а осадок, встряхнув, выливают на предметное стекло и исследуют под микроскопом на на­личие личинок диктиокаулюсов, мюллериусов и других протостронгилид.

Метод Вайда. На предметное или часовое стекло кладут несколько шариков свежевыделенных фекалий овец, коз и добавляют небольшое количество воды тем­пературой около 40°. Если шарики помещают на пред­метное стекло, то достаточно несколько капель воды. Через 40 мин шарики удаляют, оставшуюся жидкость на стекле исследуют под микроскопом на наличие ли­чинок нематод. Методика эффективна при условии, ес­ли фекалии плотные. Применяют для диагностики дик-тиокаулеза, мюллериоза, протостронгилеза, цистокауле-за овец и коз.

Флотация с раствором сульфата цинка — избира­тельный экспресс-метод диагностики диктиокаулеза по Котельникову и Хренову. Пробы фекалий овец и коз (5 г) кладут в стаканчики с раствором сульфата цин­ка, энергично в течение 1—2 мин разгоняют по кругу палочкой, не растирая и не размешивая. Не менее чем через 5—10 мин пробы вынимают пинцетом, взвесь ос­тавляют на 10—15 мин. Затем копрологической петлей (диаметр 8 мм) снимают шесть капель с поверхности жидкости, переносят на предметное стекло и просмат­ривают под микроскопом на наличие личинок диктио­каулюсов.

Пробы от овец полужидкой консистенции и пробы от телят (5 г) также помещают в стаканчики с раство­ром сульфата цинка и выдерживают 20—30 мин без разгонки и размешивания. Затем (при необходимости) их удаляют, через несколько минут снимают шесть ка­пель с поверхности пленки и микроскопируют. Личин­ки диктиокаулюсов в поверхностной пленке сохраняют подвижность до 3 ч. Метод обладает избирательностью в отношении личинок диктиокаулюсов (личинки строн-гилят пищеварительного тракта и строгилоидов дефор­мируются и разрушаются в течение 1—2 мин, личинки

концентрируются на хоботке и иногда на кутикуле ско-лекса. Реакция преципитации к концу суток усилива­ется, поэтому окончательный результат учитывают че­рез сутки. В двух контрольных препаратах таких пре-ципитинов нет.

ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ДЕГЕЛЬМИНТИЗАЦИЯ

Диагностическая дегельминтизация является мето­дом макрогельминтоскопического исследования. Исполь­зуют ее при подозрении на мониезиоз, тизаниезиоз и авителлиноз жвачных, аноплоцефалидозы лошадей, те-ниидозы плотоядных, дрепанидотениоз водоплавающих птиц, аскаридоз свиней, аскаридиоз кур и другие гель-минтозы. Для проведения данной дегельминтизации не­большой группе животных, наиболее подозрительных в заболевании, вводят соответствующий антгельминтик в лечебной или несколько заниженной дозе. За живот­ными устанавливают необходимое наблюдение, то есть проверяют все выделенные экскременты с целью обна­ружения гельминтов или их фрагментов. Собранных гельминтов всесторонне исследуют.МЕТОДЫ ПОСМЕРТНОЙ ДИАГНОСТИКИ ГЕЛЬМИНТОЗОВ

Полное гельминтологическое вскрытие по К. И. Скря­бину— наиболее надежный метод, позволяющий про­изводить как количественный, так и качественный учет всех гельминтов, которыми инвазировано животное. Данный метод заключается в следующем: после сня­тия с трупа кожи тщательно осматривают подкожную

клетчатку, затем вскрывают грудную и брюшную поло­сти и извлекают все органы систем: пищеварительной, дыхательной, кровеносной, мочеполовой и др.

Органы той или иной системы отделяют и исследу­ют порознь, при этом используют метод последователь­ных смывов. Все трубчатые органы вскрывают по их длине, содержимое помещают в таз, ведро или банку (в зависимости от объема органа), со слизистых оболочек делают соскоб, а стенку вскрытого органа (иногда) ■просматривают под компрессориумом.

Паренхиматозные органы (печень, легкие, поджелу­дочную железу, почки и др.) помещают в отдельную по­суду и превращают в детрит (фарш), разрывая руками или разрезая на мелкие кусочки ножом или ножница­ми. Детрит, соскобы, содержимое органов отмывают во­дой или физиологическим раствором, пользуясь мето­дом последовательных смывов. Полученные материалы (осадки) изучают небольшими порциями сначала в чер­ных, а затем в белых кюветах или в чашках Петри па черном и белом фоне. Крупных гельминтов выбирают визуально, а мелких — при помощи ручной лупы с 8—10-кратным увеличением. Собирают гельминтов толь­ко кисточками или препаровальными иглами, но не пинцетом и не пальцами.

Полное гельминтологическое исследование отдельных органов проводят в том случае, если необходимо иметь точные данные о местонахождении того или иного гель­минта. Например, при фасциолезе исследуют только пе­чень, при диктиокаулезе — легкие, при дрепанидотенио-зе — тонкий отдел кишечника и т. д. Этот метод более практичен, прост и достаточно точен.

Неполное гельминтологическое вскрытие — упрощен­ное гельминтологическое вскрытие, в процессе которого извлекают из органов и тканей лишь отдельных, резко выделяющихся по размерам гельминтов. Такое вскрытие имеет большое значение как для диагностики гельмин-тозов, так и для получения музейного материала.