Билеты дерма / txt / 06 / 3 Серолог диагн сифил

Серологическая диагностика сифилиса
Все современные методы серологической диагностики сифилиса можно разделить на нетрепонемные и трепонемные.
Нетрепонемные тесты (реакция Вассермана и реакция микропреципитации) определяют антитела к липоидному материалу, высвобождаемому из повреждаемых при сифилисе клеток макроорганизма (а не антитела непосредственно к бледной трепонеме). Эти антитела появляются в крови к середине первичного периода сифилиса (то есть, через 3-4 недели после формирования шанкра или через 1,5 месяца после инфицирования).
Реакция Вассермана (RW) имеет более чем столетнюю историю и в последние годы применяется редко.
Позитивность RW (качество реакции) оценивают в «плюсах»:
RW «++++» – резко положительная (полное отсутствие гемолиза);
RW «+++» – положительная (слабый гемолиз);
RW «++» – слабоположительная (умеренный гемолиз);
RW « – » – отрицательная (полный гемолиз).
RW можно ставить в количественном варианте (титром называют последнее разведение, которое дает резкоположительный или положительный результат). Для ранних форм сифилиса (первичный, вторичный, ранний скрытый, ранний врожденный) характерна высокая позитивность (4+–3+) и высокие титры RW – 1:80 – 1:320. При поздних формах сифилиса (третичный, поздний скрытый, поздний врожденный) позитивность меньше (3+–2+), а титр RW будет низким – 1:5 – 1:20 или вообще не будет определяться. Для повышения чувствительности RW ставят на холоде (реакция Колмера). Возможно постановка RW с ликвором.
Реакция микропреципитации (РМП, микрореакция, экспресс-метод) представляет собой реакцию преципитации на стекле. Как и в реакции Вассермана, используется кардиолипиновый антиген. Качественная оценка реакции производится по объему выпавшего осадка, величине хлопьев и так же обозначается в «плюсах». Для получения результата необходимо всего 10-40 минут. РМП можно проводить и в количественном варианте: высоким считается разведение 1:16. РМП несколько превосходит RW по чувствительности, но уступает по специфичности. За рубежом применяются аналоги РМП – RPR и VDRL.
Реакция Вассермана и реакция микропреципитации в совокупности образуют комплекс классических серологических реакций (КСР). КСР становятся положительными в середине первичного периода (его деление на серонегативный и серопозитивный как раз и определяется по КСР), во вторичном периоде КСР положительны у 98-100% больных, а при третичном – лишь у 60-70%. То есть, по мере увеличения давности заболевания позитивность КСР постепенно снижается.
Достоинства КСР: 1) Дешевизна, простота и быстрота постановки. Особенно это характерно для реакции микропреципитации: РМП в настоящее время – главный скрининговый (отборочный) метод; 2) Нетрепонемные тесты удобно использовать для контроля излеченности сифилиса.
Недостатки КСР: 1) Субъективность оценки результатов реакций («на глаз»); 2) Малая чувствительность при поздних формах сифилиса; 3) Главный недостаток нетрепонемных тестов – недостаточная специфичность. При их проведении часто отмечаются ложноположительные реакции (ЛПР). Наименее надежным методом диагностики сифилиса является РМП, которую нельзя применять как единственный метод для обследования доноров, беременных. При установлении диагноза сифилиса также обязательно подтверждение результатов РМП трепонемными тестами.
Трепонемные тесты служат для подтверждения результатов нетрепонемных тестов (особенно необходимо при диагностике скрытых форм), а также для выявления сифилиса на ранних стадиях, когда КСР отрицательные.
Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) – наиболее чувствительный метод в серологической диагностике сифилиса. Специфичность РИФ также весьма высока. Если в исследуемой сыворотке есть противотрепонемные антитела-флюоресцины, будет отмечаться желто-зеленое свечение трепонем. Результаты оцениваются по степени свечения и обозначаются в «плюсах» (от + до ++++).
РИФ становится положительной в первые дни первичного периода или даже в конце инкубационного периода и остается положительной во всех периодах (в том числе при поздних формах).
ЛПР при постановке РИФ бывают редко (при коллагенозах, боррелиозе).
Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ) – наиболее специфичный метод в серологической диагностике сифилиса. Позитивность РИБТ оценивают при темнопольной микроскопии, исходя из процента трепонем, утративших подвижность: 51-100% – положительная, 31-50% – слабоположительная, 21-30% – сомнительная и 0-20% – отрицательная.
Антитела-иммобилизины – поздние антитела, поэтому РИБТ становится положительной лишь в конце первичного – начале вторичного периода сифилиса. В дальнейшем РИБТ остается положительной. Отмечается высокая чувствительность реакции при поздних формах сифилиса.
ЛПР при РИБТ отмечаются редко (при саркоидозе, СКВ, туберкулезе, циррозе печени). Ложноположительный результат РИБТ может быть следствием приема трепонемоцидных антибиотиков, поэтому обследование не проводят лицам, получавшим антибиотики в течение последнего месяца.
Достоинствами РИФ и РИБТ являются: 1) Высокая чувствительность (особенно для РИФ); 2) Высокая специфичность (особенно для РИБТ).
Недостатки РИФ и РИБТ: 1) Техническая сложность, дороговизна методов. Особенно сложной является РИБТ, в настоящее время она применяется в основном для научных целей; 2) Субъективность оценки результатов, отсутствие автоматизации; 3) РИФ и РИБТ у больных сифилисом могут оставаться положительными в течении многих лет (и даже – пожизненно), несмотря на полученное полноценное лечение. Поэтому эти реакции невозможно использовать для контроля излеченности.
Исходя из сложности и дороговизны РИФ и РИБТ, имеет смысл применять их для диагностики поздних и скрытых форм сифилиса.
Иммуноферментный анализ (ИФА) и реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) – новые высокочувствительные и высокоспецифичные, удобные в постановке (с возможностью автоматизации), хорошо воспроизводимые, недорогие методы серологической диагностики сифилиса.
Результаты ИФА (как и РИФ) становятся положительными в первые дни первичного периода или в конце инкубации и остаются положительными во всех периодах.
При постановке ИФА возможно выявление суммарных антител и дифференцированное определение трепонемоспецифических IgM и IgG. IgM появляются в крови больных лишь в первые недели и месяцы болезни, а затем – исчезают. Поэтому, их выявление при ИФА свидетельствует о наличии ранних нелеченных форм сифилиса, раннего врожденного сифилиса, реинфекции. При выявлении IgG принципиальным является их количество, что отражается с помощью коэффициента позитивности (порядок величин этого показателя варьирует при применении разных тест-систем).
РПГА становится положительной уже в инкубационном периоде и может оставаться таковой спустя много лет после выздоровления (не может использоваться для контроля излеченности). По чувствительности и специфичности РПГА не уступает, а при поздних формах и врожденном сифилисе даже превосходит РИФ и РИБТ.
ЛПР при постановке ИФА и РПГА бывают редко и возможны при трепонематозах (фрамбезия, беджель, пинта), коллагенозах, циррозе печени, лимфосаркоме, инфекционном мононуклеозе, лепре, а также у беременных. Ложноотрицательные результаты возможны у ВИЧ-инфицированных пациентов.
Разрабатываются новые высокоспецифичные методы серологической диагностики сифилиса, такие как иммуноблотинг, IgM-серология и др.