- •Значение медицинской генетики для общей патологии человека.
- •Моногенные болезни. Частоты в популяциях. Примеры по типу наследования и локализации мутантного гена.
- •Феноменология проявления генов и принципы клинической генетики.
- •Генетическая гетерогенность наследственных болезней. Предсказание феномена с.Н.Давиденковым. Способы доказательства генетической
- •Определение: экзоны - кодирующие участки генов. Определение: интроны - некодирующие участки генов.
- •Структура гена. Экзоны, интроны, регуляторные области, спейсеры. (дубль)
- •Принцип и применение полимеразной цепной реакции ..
- •Типы генных мутаций. Мутации транскрипции и мутации трансляции.
- •Мутации транскрипции
- •Общие закономерности этиологии и патогенеза генных болезней.
- •Мутантный аллель → Патологический первичный продукт (качественно или количественно) → Нарушение метаболического пути → Клетки → Органы → Организм
- •Типы структурных хромосомных мутаций. Делеции, дупликации, транслокации, инверсии, инсерции, кольцевые и дицентрические хромосомы, изохромосомы и маркерные хромосомы. Примеры.
- •Классификация и общая фенотипическая характеристика хромосомных болезней. Популяционная частота и основные группы риска хромосомной патологии.
- •Хромосомные болезни, обусловленные структурными мутациями хромосом. Частичные моно- и трисомии.
- •Синдром Альфи (синдром 9р-)
- •Синдром Орбели (синдром 13q-)
- •Синдром кольцевой хромосомы 18
- •Синдром 18q-
- •Синдром моносомии короткого плеча 18 хромосомы (синдром 18р-)
- •Синдром делеции длинного плеча 21 хромосомы (синдром 21 q-)
- •Синдром кольцевой хромосомы 22.
- •Числовые нарушения хромосом. Понятие мозаицизма.
- •Микроделеционные и микродупликационные хромосомные синдромы. Клиника и этиология синдромов Лангера-Гидеона, Видемана- Беквита, Прадера-Вилли, Энгельмана и Вильямса.
- •Синдром Лангера-Гидиона (трихо-рино-фалангиальный синдром)
- •Синдром Видемана-Беквита
- •Синдром Прадера-Вилли
- •Синдром Энгельмана (синдром "счастливой куклы")
- •Синдром Вильямса (лицо "эльфа")
- •Синдромы, проявляющиеся хромосомной нестабильностью (анемия Фанкони, атаксия телеангиэктазия, синдром Блюма, синдромы Вернера, Ниймегена, Робертса).
- •Мультифакториальные заболевания: доказательства роли генетических факторов в развитии мфз.
- •Доказательства роли генетических факторов
- •Клинико-генеалогический метод
- •Близнецовые исследования
- •Популяционно-статистические исследования
- •Примеры доказательства роли генетических и средовых факторов в происхождении болезней с наследственным предрасположением.
- •Доказательства роли генетических факторов (см. Вопрос выше) Болезни обмена клеточных органелл. Митохондриальные болезни (этиология, патогенез, клиника, диагностика).
- •Этиология:
- •Патогенез:
- •Классификация:
- •Клиника:
- •Болезни обмена клеточных органелл. Лизосомные болезни (этиология, патогенез, классификация, клиника, диагностика).
- •Адреногенитальный синдром (врожденная гиперплазия
- •Наследственные болезни с нарушением в системе мембранного транспорта. Муковисцидоз (этиология, патогенез, клинические формы, методы диагностики, лечение, профилактика).
- •Общая характеристика болезней аминокислотного обмена.
- •Патогенез:
- •Клиническая картина.
- •Диагностика.
- •Лечение.
- •Наследственные болезни, обусловленные нарушением обмена соединительной ткани.
- •Целиакия. Этиология, патогенез, диагностика, лечение.
- •Этиология.
- •Патогенез.
- •Клиническая картина:
- •Диагностика:
- •Лечение.
- •Селективный скрининг на наследственные болезни обмена.
- •Качественные методы
- •Количественные методы
- •Методы подтверждающей диагностики наследственных болезней обмена.
- •Основные подходы к лечению наследственных заболеваний (симптоматическое, патогенетическое, этиологическое).
- •Методы пренатальной диагностики. Хорион- и плацентоцентез, амниоцентез, кордоцентез,показания для проведения инвазивной пренатальной диагностики.
- •Плацентоцентез (14-17 нед.)
- •Биохимический пренатальная диагностика с использованием сывороточных маркеров первого и второго триместра беременности. Программы расчета риска.
- •Профилактика наследственной патологии (пренатальный, постнатальный уровень профилактики наследственных болезней, доимплантационная диагностика).
- •Структура и организация медико-генетической службы в России,
- •Цели и задачи медико-генетического консультирования. Содержание работы медико-генетической консультации.
- •Цель и задачи медико-генетического консультирования. Показания для направления семейной пары в медико-генетическую консультацию
- •Просеивающие программы, цели и задачи, требования к методам, используемым в программах скрининга.
- •Генеалогический метод. Сбор и генетический анализ родословных. Возможные трудности при сборе анамнеза и составление родословной.
- •Сбор сведений о родственниках больного.
- •Составление родословной.
- •Анализ родословной.
- •Уровень:
Структура гена. Экзоны, интроны, регуляторные области, спейсеры. (дубль)
Регуляторные последовательности расположены на концах генов. Эти последовательности могут быть либо рядом с транскрибируемой областью
промотор, либо разделены множеством тысяч оснований - энхансеры и сайленсеры.
Промотор расположен на 5'-конце гена. Он является местом начала транскрипции, связывая РНК-полимеразу, факторы транскрипции и другие белки.
Экспрессия генов может регулироваться множеством энхансеров и сайленсеров, которые дополнительно модифицируют активность промоторов. Энхансеры и сайленсеры могут быть расположены далеко от гена, на расстоянии многих тысяч пар оснований.
До (с 5’ - конца) и после (с 3’-конца) кодирующей части гена расположены UTR-области или нетранслируемые области, которые содержат дополнительные регуляторные последовательности.
До нетранслируемой области с 5’-конца в генах человека расположен участок, обогащенный А и Т - ТАТА-бокс. С ним связываются транскрипционные факторы, привлекающие РНК-полимеразу к сайту начала транскрипции.
Между генами расположены спейсеры.
Принцип и применение полимеразной цепной реакции ..
это экспериментальный метод, направленный на многократное копирование (амплификацию) определенных фрагментов ДНК в процессе повторяющихся температурных циклов)
Необходимо:
Анализируемая копия ДНК массой 2 нанограмма (нг)
комплементарный олигонуклеотидные праймеры ограничивающие участок ДНК
новые дезоксирибонуклеотидтрифосфаты (dNTP = dATP+dTTP+dGTP+dCTP)
фермент TaqДНК-полимераза (остается активной при 100 гр.Цельсия) обеспечивает достраивание З'-конца второй цепи ДНК согласно принципу комплементарности.
Среда буфер: калий, магний, сульфат аммония
консольвенты – вещества поддерживающие ДНК в одноцепочечном состоянии (DMSO)
доводят до нужного объема деионизированной водой
Цикл:
Денатурация (97-98 градусов)
– это переход ДНК из двухнитевой формы в однонитевую при разрыве водо-
родных связей между комплементарными парами оснований под воздействием высоких температур
Отжиг (гибридизация на специфических последовательностях) от 52-70℃ зависит от того каким локусом становится – отжиг
58℃
- это присоединение праймеров к одноцепочечной ДНК-мишени. Праймеры подбирают так, что они ограничивают искомый фрагмент и комплементарны противоположным цепям ДНК. Отжиг происходит в соответствии с правилом комплементарности Чаргаффа. Если это условие не соблюдено, то отжига праймеров не происходит.
Элонгация (синтез) - 72℃
После отжига праймеров Taq-полимераза начинает достраивание второй цепи ДНК с 3'-конца праймера.
1 цикл: 5:1:1
29 циклов: 0,5:1:1
Последний: 0,5:1:7
Последующие повторы приводят к множественной амплификации ДНК в процессе количество копий увеличивается с одной до 10^9
Накопление нужного фрагмента идет по экспоненте, где n – число циклов 2n-2n
Праймер – одноцепочечный искусственно синтезируемый фрагмент ДНК Длина 20-30 нуклеотидов, содержит C и G не более 65%, прямой и обратный праймер не должны содержать длинных последовательностей комплементарных друг другу (иначе возможно образование петель и димеров), ориентирутся так, чтобы синтез протекал между ними
Должен быть специфичными. Особое внимание уделяют 3'-концам праймеров, так как именно с них Taq-полимераза начинает достраивать комплементарную цепь ДНК. Если их специфичность недостаточна, то
высока вероятность, что в пробирке с реакционной смесью будут происходить процессы неспецифического связывания, и синтеза фрагментов различной длинны, отличных от искомых. Часть праймеров и дНТФ расходуется на синтез неспецифической ДНК, что приводит к значительной потере чувствительности.
Виды ПЦР: реал-тайм, гнездовая, аллель специфичная, метил- чувствительная
Применение: диагностика инф.заболеваний, наследственных и онкологических заболеваний, научные исследования, определение родства,
криминалистика, в пищевой промышленности