Глава V. Токсикологическая характеристика энергена

5.1. Оценка токсичности энергена на клеточном уровне

Оценка безвредности энергена для животных проведена на клеточном и организменном уровнях. При исследовании биологической активности и безвредности препарата на клеточном уровне использовали Paramecium caudatum (Бузлама В.С., 1998), на организменном – белых мышей и крыс.

Для оценки биоцидного действия препарата его вносили в среду с инфузориями, которые находились в стационарной фазе роста клеток, в концентрациях от 1·10^-1 до 1·10^-7 мг/мл среды. После 24-часовой инкубации определяли гибель клеток.

Установлено, что препарат не проявляет биоцидного действия в заданных разведениях и в указанных дозах нетоксичен для одноклеточных организмов (таблица 4).

Таблица 4. Биоцидное действие энергена

Группа, фаза роста, фактор влияния	Индекс биологической активности объекта в разведениях, мг/мл
	1· 10-1	1· 10-2	1· 10-3	1· 10-4	1· 10-5	1· 10-6	1· 10-7
Контроль	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000
Стационарная фаза, биоцидное действие	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000	1,000
Стационарная фаза, повреждающее действие	1,000	1,000	1,000	1,138	1,012	1,000	1,000
Экспоненциальная фаза, интенсивность размножения	1,143	1,291	1,506	1,403	1,120	1,020	1,000

Для оценки влияния препарата на устойчивость парамеций к повреждающему воздействию гипертоническим раствором натрия хлорида использовали культуру инфузорий в стационарной фазе роста (12-18 дней), контактирующую с различными концентрациями препарата в течение 24 часов.

Установлено, что индекс биологической активности препарата в разведениях 1·10^-1, 1·10^-6 и 1·10^-7 не оказывает существенного влияния на устойчивость инфузорий к изменению осмолярности среды, а в концентрациях 1·10^-4 составил 1,138, что указывает на защитное влияние препарата на инфузории при дополнительном действии на них неблагоприятного фактора, в данном случае 15% раствора хлорида натрия.

При изучении влияния препарата на интенсивность размножения в опыте использовали парамеции в экспоненциальной фазе роста (7-10 дней). Препарат вносили в среду с парамециями в концентрации от 1· 10^-1 до 1· 10^-7 мг/ мл.

В результате проведенных исследований установлено, что препарат повышает интенсивность размножения клеток, на что указывает индекс интенсивности размножения: 1,143; 1,219; 1,506; 1,403; 1,120; 1,020; 1,000.

Максимальная интенсивность размножения (МИР) парамеций происходит при применении энергена в концентрации 1·10^-3, что проявляется повышением МИР в 1,5 раза по сравнению с контролем.

Таким образом, препарат нетоксичен для клеток Paramecium caudatum. Выявлено наличие защитного действия его на культуру парамеций в стационарной фазе роста при повреждающем воздействии. Кроме того, он оказывает выраженное стимулирующее воздействие на интенсивность размножения клеток парамеций (в экспоненциальной фазе роста). Установлено наличие дозозависимости стимулирующего и защитного действия энергена.

Поскольку гуминовые препараты являются композицией из гуминовых кислот и солей, они не являются строго индивидуальными веществами. В литературе нет конкретных данных о токсичности какого-либо стандартизированного безбаластного препарата с определенным содержанием действующего вещества. Принимая во внимание, что энерген – безбалластный препарат с определенным содержанием действующего вещества, мы провели оценку его токсикологических свойств.

Оценку токсичности энергена проводили в соответствии с ГОСТ 12.1.007 «Вредные вещества, требования Госфармакопеи» (2-е издание, выпуск 2, с.182-183 и Методическими рекомендациями по токсико-экологической оценке лекарственных средств, применяемых в ветеринарии (РАСХН, 1998).