используют полоску Е-теста, содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной. В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК)(рис.21).

Рисунок 21. Метод Е-тестов

Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например, от 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду (бульон). Затем бактериальную суспензию определенной плотности помещают в бульон с антибиотиком. После инкубации при температуре 37оС в течение 24 часов проводят учет полученных результатов. Наличие роста микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) агара свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика (из серии последовательных разведений), где визуально не определяется бактериальный рост принято считать минимальной ингибирующей

50

(подавляющей) концентрацией (МИК/МПК). Измеряется МИК в мкг/мл (рис. 22).

Рисунок 22. Определение МИК (МПК) антибиотика методом серийных разведений

Критерием чувствительности микроорганизма к антибиотику является величина терапевтического индекса: Т = МИК/К, где К – концентрации антибиотика в крови при введении терапевтических доз препарата. Значение К определяют по таблице (табл. 2). Микроб чувствителен, а антибиотик клинически эффективен при Т<0,3.

51

Микроорганизм считают чувствительным, если у него нет механизмов резистентности к данному антимикробному средству и при лечении стандартными дозами инфекции, вызванным данным микроорганизмом, отмечается хорошая терапевтическая эффективность. Устойчивым к антимикробному средству считается микроорганизм, если он имеет механизмы резистентности к данному препарату и при лечении инфекций, вызванных этим микроорганизмом. Нет клинического эффекта даже при использовании высоких терапевтических доз препарата. Микроорганизм относят к умеренно устойчивым, если по своей чувствительности он занимает промежуточное положение между чувствительными и устойчивыми штаммами и при лечении инфекций, вызванных данным возбудителем, хорошая клиническая эффективность наблюдается только при использовании высоких терапевтических доз препарата.

Тема практического занятия 9. Коллоквиум по темам 1-8.

Вопросы для самоподготовки

1.В чем состоят особенности микробов как объектов изучения микробиологии?

2.Каковы задачи медицинской микробиологии?

3.Для чего в микробиологических лабораториях соблюдается специальный режим работы?

4.Каково место микробов в систематике организмов? В чем состоят различия эукариотов и прокариотов?

5.Какие методы исследования используются в микробиологии?

6.Что такое чистая культура, штамм, клон?

7.Какие типы микроскопов используют для изучения морфологии микробов? Каково назначение иммерсионной системы?

8.Что понимают под тинкториальными свойствами микробов?

9.Для чего предназначены разные типы микроскопов? Каковы их возможности?

10.Как приготовить препарат для микроскопического исследования? Для чего и как проводят фиксацию мазков?

11.В чем состоит принципиальное различие простых и сложных методов окраски микропрепаратов? Приведите примеры.

52

12.Почему метод Грама относятся к дифференцирующим методам окраски? В чем его сущность?

13.Приведите примеры Гр+ и Грбактерий.

14.Какова техника окраски по Граму?

15.Назовите основные формы бактерий.

16.Перечислите структурные элементы бактериальной клетки: обязательные и необязательные.

17.Какова биологическая роль обязательных и необязательных структурных элементов?

18.Какими методами можно выявить те или иные структурные элементы бактерии?

19.В чем состоят особенности питания микробов? Назовите основные типы питания.

20.В каких веществах нуждаются микробы для роста и размножения? Назовите источники этих веществ и энергии.

21.Какие Вы знаете механизмы питания бактерий?

22.Как делят микробы по типам дыхания? В чем состоят их различия?

23.Какие условия нужны для культивирования микробов? Перечислите требования, предъявляемые к искусственным питательным средам для микробов.

24.Для чего предназначены простые и сложные питательные среды (специальные, элективные, дифференциально-диагностические)?

25.Что называют культуральными свойствами микробов?

26.Что такое микробная колония? Как и для чего получают изолированные колонии?

27.Какова схема выделения чистой культуры аэробов?

28.Каковы особенности культивирования и выделения чистых культур анаэробов?

29.Дать определение дезинфекции и стерилизации.

30.Перечислите методы дезинфекции. От чего зависит выбор метода?

31.Перечислите химические группы препаратов для дезинфекции с примерами.

32.Как контролируют эффективность дезинфекции?

33.Что такое асептика?

34.Что понимают под антисептикой? Примеры.

53

35.Перечислите методы стерилизации. От чего зависит выбор метода?

36.Какие материалы можно стерилизовать дробными методами теплового воздействия?

37.Назовите аппаратуру, основные режимы и стерилизуемые материалы при тепловых методах стерилизации.

38.Какие материалы стерилизуют ионизирующим излучением?

39.Что стерилизуют химическим методом?

40.Какие Вы знаете механизмы действия (точки приложения) антибиотиков?

41.В чем и как измеряют биологическую активность антибиотиков? 42.Как классифицируют виды побочного действия антибиотиков? 43.Назовите причины возникновения лекарственной устойчивости микробов и ее возможные механизмы.

44.Как определяют чувствительность микробов к антибиотикам?

45.Что такое МИК? Методы определения МИК.

46.Что является критерием чувствительности микроба-возбудителя к антибиотику? Как его определить? От чего зависит выбор антибиотика для лечения?

ОБЩИЙ МОДУЛЬ ОСНОВЫ ИММУНОЛОГИИ Тема практического занятия 10.Иммунологические реакции: реакция агглютинации, реакция преципитации.

ЦЕЛИ:знать принципы РА, РП и методы постановки, учетные признаки, практическое применение.

Порядок проведения занятия:

1.Вступительное слово преподавателя (цели и задачи) – мин.

2.Объяснение нового материала, методические и организационные указания преподавателя по проведению занятия - мин.

3.Самостоятельная практическая работа студентов под руководством преподавателя, оформление и проверка протоколов – мин.

54

4.Обсуждение полученных результатов, проверка протоколов, подведение итогов практического занятия, заключительное слово преподавателя - мин.

Вопросы для самоконтроля

1.Что называют реакциями иммунитета (серологическими реакциями)?

2.Для чего применяют реакции иммунитета?

3.В чем состоит сущность реакции агглютинации? Каковы ее разновидности, ингредиенты, учетный признак?

4.Чем отличаются развернутая и ориентировочная РА?

5.В чем состоит сущность РП? Каковы ее ингредиенты, учетный признак?

6.Чем отличаются антигены и учетные признаки (феномены) в РА и РП?

7.Дайте краткую характеристику реакции кольцепреципитации, преципитации в капилляре, в агаровом геле.

8.Что обозначает титр преципитирующей сыворотки?

9.Приведите примеры практического использования РП. В чем состоят ее преимущества?

Самостоятельная работа на кафедре

1.Поставить РА на стекле с неизвестной микробной культурой и адсорбированными сыворотками к шигелламФлекснера и Зонне. Определить вид микроба по результатам реакции.

2.Познакомиться с постановкой и учетом развернутой РА при серодиагностике брюшного тифа (определение титра антител к возбудителю заболевания) [демонстрация]. Записать схему и результат.

3.Познакомиться с постановкой и учетом реакции кольцепреципитации, преципитации в капилляре, в агаровом геле

Дополнительный материал

55