Основы культивирования вирусных штаммов в биотехнологическом произв

3.Ферменты вирионов.

4.Вам необходимо изучить бляшкообразующую активность вируса для определения его титра в культуре тканей, а также для изучения морфологии формируемых репродуцирующимся вирусом бляшек. Укажите состав агарового покрытия или покрытия из кар- бокси-метилцеллюлозы, используемый для изучения бляшкообразующей активности. Какой состав покрытия используется для клонирования вируса?

Вариант 3

1.Обзор живых систем (естественно-восприимчивые и лабораторные животные, куриные эмбрионы, культура клеток) для культивирования вирусов.

2.Достоинства и недостатки серологических реакции и область их возможного применения в вирусологии.

3.Строение и жизненный цикл вируса СПИДа. Этапы заражения клетки вирусом СПИДа.

4.Для определения концентрации вируса в исходном материале вам необходимо провести титрование вируса в культурах клеток

ирассчитать титр вируса. Укажите расчет титра вируса по методу Рида – Менча и методу Кербера.

Вариант 4

1.Культура клеток: классификация, особенности, преимущество перед другими живыми системами в биотехнологии. Диплоидные культуры клеток.

2.Культивирование, очистка и титрование парамиксовиру-

сов.

3.Опишите особенности противовирусного иммунитета.

4.Вам необходимо поставить реакцию биологической нейтрализации. Какие варианты постановки реакции биологической нейтрализации вы знаете? Рассчитайте основные этапы метода нейтрализации в культуре клеток или на животных.

31

Вариант 5

1.Особенности принципа организации вирионов вирусов: морфология, типы симметрии, размер, простые и сложные вирусы.

2.Перевиваемые культуры клеток.

3.Краткая характеристика свойств вируса герпеса. Лабораторная диагностика. Особенности поражения вирусом простого герпеса нервной системы.

4.Для определения титра вируснейтрализующих антител вам необходимо поставить реакцию биологической нейтрализации. Какой вариант постановки реакции наиболее адекватен в этом случае? Укажите его основные этапы.

Вариант 6

1.Характеристика структурных компонентов вириона (геном, белки (структурные и неструктурные), углеводы, липиды) и их функции.

2.Практическое использование вирусных мутантов.

3.Типы взаимодействия вируса с клеткой. Фазы репродукции вирусов.

4.Вам необходимо поставить реакцию биологической нейтрализации для определения индекса нейтрализации. Укажите основные этапы этого варианта биологической нейтрализации. Какова особенность метода биологической нейтрализации, регистрируемой по подавлению бляшкообразующей активности вирусов?

Вариант 7

1.Основные принципы современной таксономии и номенклатуры вирусов, их научное и практическое значение.

2.Действие спиртов и дезинфектантов на вирусы.

3.Культивирование вирусов. Достоинства и недостатки методов культивирования вирусов.

4.В вирусологической лаборатории на курином эмбрионе получен вирус, дающий реакцию гемагглютинации. На основании какой серологической реакции можно провести идентификацию вируса гриппа?

32

Вариант 8

1.Этапы репродукции вирионов. Внутриклеточные формы вируса. Исходы вирусной инфекции на уровне клетки.

2.Методы консервации вирусов.

3.Типы культур клеток.

4.Какие вирусы используются в производстве природного интерферона. Дать краткую характеристику каждого.

Вариант 9

1.Методы уничтожения, инактивации вирусов.

2.Питательные среды и их классификация. Требования, предъявляемые к питательным средам.

3.Общий принцип серологических реакций и их отличие друг от друга.

4.Классификация противовирусных вакцин. Принципы получения и контроля живых и инактивированных вакцин.

Вариант 10

1.Классификация факторов противовирусного иммунитета. Неспецифические факторы: основные виды и их значение в противовирусном иммунитете.

2.Молекулярные сплит-вакцины.

3.Дезинфекция. Методы. Дезинфицирующие препараты, механизм действия.

4.Как можно обнаружить наличие вируса? Какие биологические объекты возможно применить для накопления вируса и как следует провести выявление (индикацию) вирусов?

3.2. Оформление реферата

Тема реферата принимается в зависимости от последней цифры шифра зачетной книжки студента:

–при цифре шифра 1 номер темы реферата 1;

–при цифре шифра 2 номер темы 2;

–при цифре шифра 3 номер темы 3 и т.д.;

–при цифре шифра 9 номер темы 9;

–при цифре шифра 0 номер темы 10.

33

Тематика рефератов

1.Значение вирусов для решения общебиотехнологических проблем.

2.Вирус гриппа. Методы диагностики. Принципы получения вакцин против гриппа.

3.Контаминация клеточных линий микроорганизмами.

4.Криоконсервация культивируемых клеток.

5.Общий принцип серологических реакций и их отличие друг от друга.

6.Рациональные подходы к математическому планированию экспериментов по увеличению выхода биомассы вирусов.

7.Аппаратура для промышленного культивирования бактерий

ивирусов.

8.Генетические методы исследования (ПЦР, ДНК-зонд) и их использование в вирусологии.

9.Молекулярно-генетические методы анализа полиморфизма

генов.

10.Молекулярно-генетические методыанализа экспрессиигенов.

Содержаниерефератадолжно датьответ на следующие вопросы:

1.Современное состояние выбранной темы реферата.

2.Пути и направления решения проблем выбранной темы.

Для написания реферата студент самостоятельно подбирает литературу на выбранную тему, используя периодические издания: «Биотехнология», «Основы вирусологии» и другие, а также монографии, сборники научных трудов, тезисы докладов научных конференций и др.

Используемая литература должна быть издана за последние пять лет. Не рекомендуется пользоваться для написания реферата учебниками и учебными пособиями.

Объем реферата в пределах 15–20 с компьютерного текста с приложением таблиц, графиков, диаграмм, подтверждающих текст. Реферат выполняется грамотно и аккуратно на одной стороне листа

34

А4 составлением полей: левое поле 30 мм, правое, верхнее и нижнее – 25 мм. Высота шрифтатекста 12, заголовок– 14, интервал – 2.

На титульном листе реферата в верхней части пишется: «Пермский национальный исследовательский политехнический университет», ниже – Кафедрахимии и биотехнологии. В середине листа– тема реферата по дисциплине «Основы культивирования вирусных штаммов в биотехнологическом производстве»/«Основы вирусологии». В нижней части титульного листа указывается фамилия и инициалы студента и шифр зачетной книжки, а также ученое звание, фамилия и инициалы проверяющего реферат. В конце титульного листа пишется: г. Пермь и год написания реферата. В конце реферата приводится список использованной литературы с указанием издательства и года издания.

35

СПИСОК РЕКОМЕНДУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология

ииммунология / Мед. информ. а-во. – М., 2005. – 736 с.

2.Волкова Л.В. Биотехнология природного альфа-интерферона

илекарственные формы на его основе: учеб. пособие. – Пермь: Издво Перм. гос. техн. ун-та, 2008. – 161 с.

3.Вопросы общей вирусологии: учеб. пособие для вузов / И.Н. Жилинская [и др.]. – СПб.: Изд-во Санкт-Петерб. гос. мед. акад. им. И.И. Мечникова, 2007. – 374 с.

4.Кривошеина Ю.С., Воробьева А.А. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. – М.: Мастерица, 2004. – 204 с.

5.Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология: учеб. для вузов. – 3-е изд., испр. идоп. –

СПб.: СпецЛит, 2002. – 591 с.

6.Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. / А.А. Воробьева [и др.]. – М.: Мастерство: Высш. шк., 2001. – 224 с.

7.Основы медицинской бактериологии, вирусологии и иммунологии: учеб. пособие для вузов / Г.М. Шуб [и др.]. – М.: Логос, 2003. – 263 с. – (Учебник XXI века).

8.Павлович С.А. Основы вирусологии: учеб. пособие для вузов. – Минск: Вышэйш. шк., 2001. – 192 с.

9.Прозоркина Н.В., Рубашкина Л.А. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии: учеб. пособие. – Ростов н/Д: Феникс, 2002. – 412 с. – (Среднее профессиональное образование).

10.Спиер Р.Е., Гриффитс Дж.Б. Биотехнология клеток животных. – М.: Агропромиздат, 1989. – Т. 2. – 512 с.

11.Троценко Н.И., Белоусова Р.В., Преображенская Э.А. Практикум по ветеринарной вирусологии: учеб. пособие для вузов. – 2-е изд., перераб. и доп. – М.: Колос, 2000. – 272 с.

12.Периодические журналы «Вопросы вирусологии», «Лабораторное дело».

36

ПРИЛОЖЕНИЕ

Рис. 1. Первичная культура эмбриональных клеток мышей

Клетки HeLa Клетки L Рис. 2. Перевиваемые линии клеток

37

+++: 75 % пораженной ткани ++++: 100 % пораженной ткани

Рис. 3. Оценка степени цитопатогенного действия вируса на клеточную линию СПЭВ

38

Рис. 4. Индикация репродукции вируса в культуре ткани по цитопатическому действию (ЦПД)

Рис. 5. Реакция агглютинации

39

Рис. 6. Схематическое изображение строения яйца на 12-й день развития зародыша: 1 – зародыш, 2 – желточный мешок, 3 – аллантоисная полость, 4 – амниотическая полость, 5 – внезародышевая полость, 6 – белочный мешок, 7 – хлорионаллантоисная оболочка, 8 – воздушное пространство, 9 – подскорлупная оболочка

Рис. 7. Схематический разрез куриного эмбриона на 11–16-й день инкубации

40