metodichka_1

скопии. Подвижность можно определить по характеру роста бактерий в полу-

жидком агаре.

ПИЛИ (ворсинки, фимбрии) – тонкие нити белковой природы, покры-

вающие поверхность бактериальных клеток. Не выполняют двигательную функцию. Различают пили первого и второго типа.

Пили первого (общего) типа имеются у большинства бактерий. Осущест-

вляют прикрепление (адгезию) бактерий к определенным клеткам организма.

Адгезия является начальной стадией любого инфекционного процесса.

Пили второго типа, F-пили (конъюгативные или половые) есть у бакте-

рий, имеющих специальную плазмиду. Их количество невелико – 1-3 на клетку.

Половые пили представляют собой длинные пустые трубочки и выполня-

ют следующие функции:

-участвуют в передаче генетического материала от одной клетки к другой при конъюгации бактерий;

-являются рецепторами для адсорбции специфических вирусов бактерий –

бактериофагов.

Жгутики и пили у бактерий

9

Конъюгация у бактерий

4. Спорообразование у бактерий.

СПОРООБРАЗОВАНИЕ – это способ сохранения вида в неблагоприят-

ных условиях внешней среды, но не способ размножения. Споры устойчивы к высокой температуре, УФ-облучению, радиации, действию химических ве-

ществ, поэтому могут сохраняться в почве десятки лет (споры возбудителей си-

бирской язвы и столбняка). Споры круглой или овальной формы могут распо-

лагаться в клетке центрально, субтерминально (ближе к концу палочки) и тер-

минально (на конце палочки). Спора образуется в цитоплазме в течение 18-20

часов. Прорастание спор в вегетативные клетки начинается при их попадании в благоприятные условия и длится 4-5 часов.

Стадии спорообразования:

1. Подготовительная. В цитоплазме бактерий образуется уплотненный участок,

не имеющий свободной воды, называемый «спорогенной зоной». В ней содер-

жится нуклеоид.

2. Стадия предспоры. Вокруг спорогенной зоны образуется оболочка из двой-

ной ЦПМ.

3. Между двумя ЦПМ формируется кортекс, состоящий из пептидогликана. 4.

Стадия созревания. С внешней стороны наружной ЦПМ образуется оболочка

10

споры с повышенным содержанием солей кальция и липидов. Затем вегетатив-

ная часть клетки лизируется, освобождая спору.

Споры устойчивы во внешней среде за счет:

-низкого содержания воды, которая находится в связанном состоянии;

-наличия многослойной оболочки с повышенным содержанием солей кальция и липидов.

Споры обнаруживают в бактериальной клетке специальной окраской по методу Ожешко (спора окрашивается в ярко-красный цвет, вегетативная часть бактерии – в синий), или с помощью фазово-контрастной микроскопии.

Спорообразующие бактерии:

Bacillus anthracis

Clostridium perfringens

Clostridium tetani

Clostridium botulinum

ПРАКТИЧЕСКАЯ РАБОТА

1. Окраска препарата по Бурри-Гинсу для выявления капсул. Смешивают каплю взвеси микробов с каплей туши и при помощи стекла со шлифованным краем готовят мазок, затем высушивают и фиксируют. На остывшее стекло наливают фуксин Пфейффера (1-2 минуты), промывают водой, высушивают и микроско-

пируют. В результате окраски бактерии окрашиваются в красный цвет, а неок-

рашенные (бесцветные) капсулы контрастно выделяются на черно-розовом фо-

не.

2. Окраска препарата по Нейссеру для выявления зерен волютина. На фиксиро-

ванный мазок наносят уксуснокислый метиленовый синий (1 минута), промы-

вают водой, затем наносят раствор Люголя (30 секунд), промывают водой и до-

крашивают хризоидином (10-15 секунд). Затем промывают водой, высушивают

11

и микроскопируют. В результате окраски бактерии приобретают нежно-желтый цвет, а зерна волютина – темно-синий.

3. Приготовление и окраска препарата по Цилю-Нильсену для выявления ки-

слотоустойчивых (вакцинный штамм туберкулезных палочек (BCG)) и кисло-

топодатливых (стафилококки) микроорганизмов.

Окраска по Цилю-Нильсену:

-на фиксированный мазок положить полоску фильтровальной бумаги, затем нанести небольшое количество карболового фуксина Циля;

-нагреть мазок над пламенем спиртовки 2-3 раза до появления пара, не доводя до кипения;

-снять бумагу, дать препарату остыть и погрузить его в стаканчик с 5% раство-

ром серной кислоты 2-3 раза (для обесцвечивания);

-мазок промыть водой и докрасить метиленовым синим 3-5 минут.

Врезультате окраски вакцинный штамм туберкулезных бактерий приобре-

тает красный цвет, а стафилококки – синий.

4 Окраска препарата по Ожешко для выявления спор.

При обычных способах окраски споры не прокрашиваются, оставаясь бес-

цветными внутри окрасившихся вегетативных клеток. Поэтому для размягче-

ния оболочки, или «протравливания», их обрабатывают 0,5% раствором соля-

ной кислоты. Затем препарат окрашивают по методу Циля-Нильсена, в резуль-

тате окраски споры приобретают рубиново-красный цвет, а вегетативные клет-

ки – синий.

5. Окраска препарата по Романовскому-Гимзе для выявления нуклеоида.

Препарат фиксируют метиловым спиртом, наносят краситель Романовского-

Гимзы (краситель представляет собой смесь двух красок – азура и эозина в рав-

ных частях), через 20-30 минут краску сливают, промывают препарат дистил-

лированной водой, высушивают и микроскопируют.

12

В результате окраски нуклеоид приобретает фиолетовый цвет и располага-

ется диффузно в цитоплазме, окрашенной в бледно-розовый цвет.

6. Окраска препарата по Морозову для выявления жгутиков.

Препарат фиксируют раствором ледяной уксусной кислоты 1 минуту, промы-

вают водой, наносят дубящий раствор танина, промывают водой и обрабаты-

вают препарат при подогревании раствором азотнокислого серебра 1-2 минуты,

промывают водой, высушивают и микроскопируют.

В результате окраски жгутики приобретают светло-желтый цвет, а клетки темно-коричневый.

7. Провести микроскопию мазков Klebsiella pneumoniaе в окраске по Бурри-

Гинсу для выявления капсул, Bacillus mesentericus в окраске по Романовскому-

Гимзе для выявление нуклеоида, Corynebacterium diphtheriaе в окраске по Нейссеру для выявления зерен волютина, Bacillus mesentericus в окраске по Морозову для выявления жгутиков, Bacillus anthracis в окраске по Ожешко для выявления спор, смеси культур вакцинных штаммов туберкулезных палочек

(BCG) и стафилококков в окраске по Цилю-Нильсену для выявления кислото-

устойчивых и кислотоподатливых бактерий.

8. Зарисовать поля зрения.

13

14