Стерилизация облучением

УФ-лучи. Лампы ультрафиолетового излучения используют для обез­зараживания воздуха лечебных учреждений, бактериологических бок­сов и лабораторий, а также для стерилизации жидкостей с помощью особых аппаратов.

Стерилизации ионизирующим излучением подвергаются в меди­цинской и микробиологической промышленности разнообразные объекты: лекарственные средства, перевязочные материалы, шелк, хирургические перчатки, одноразовые шприцы, пластмассовые труб­ки для внутривенного введения и многие другие материалы.

Применение ионизирующей радиации имеет ряд преимуществ пе­ред тепловой стерилизацией. При стерилизации с помощью ионизиру­ющего излучения температура стерилизуемого объекта поднимается незначительно, в связи с чем такие методы называют холодной сте­рилизацией. При стерилизации в больших масштабах может быть соз­дан конвейер. Материалы стерилизуют в упакованном виде. Имеется два вида оборудования для облучения - гамма-установки с кобальтом-60 и ускорители электронов.

Химическая и физико-химическая стерилизация

Химическую стерилизацию применяют для обработки рук хирурга, операционного поля пациента, хирургических инструментов и перча­ток, анестезирующих масок. Применяют некоторые дезинфицирующие средства, хлоргексидин и многие другие вещества.

Газовую стерилизацию проводят с помощью таких веществ, как окись этилена, метилбромид, окись пропилена, формальдегид, глютаральдегид, бета-пропиолактан, озон и другие. Такие вещества вво­дят в небольшое замкнутое пространство (автоклав, специальный кон­тейнер), куда предварительно помещают стерилизуемые объекты. Га­зовая стерилизация - более сложный процесс, чем стерилизация с по­мощью высокой температуры и требует более строгого контроля.

Для упаковки объектов применяют материал, через который легко проходят газ и влага, но не проходят мелкая пыль и микроорганизмы. Лучше всего применять прозрачные полимерные пленки, через которые можно видеть предметы, не нарушая целостности упаковки. При прове­дении биологического контроля газовой стерилизации применяются ма­териалы, содержащие лиофилизированные живые культуры золотисто­го стафилококка, кишечной палочки и споры сенной палочки.

После стерилизации для удаления газа камеры продувают сте­рильным воздухом, а затем выдерживают стерилизованный материал в течение нескольких суток. Проводится контроль остаточной кон­центрации газа в материале, так как газы токсичны,

Физико-химические методы — это сочетание физических и хими­ческих воздействий на микроорганизмы, например, действие дезин­фицирующего вещества и нагревания.

Методы частичного обеспложивания

Кипячение - применяется для обработки шприцев, игл, инструмен­тов. Стерилизацию проводят в течение 30 минут в специальных стери­лизаторах для инструментов, в воду для устранения ее жесткости и по­вышения температуры кипения рекомендуется добавить 1-2% бикарбо­ната натрия. При кипячении споры бактерий не погибают, поэтому для стерилизации питательных сред этот способ не применяется. Подлежа­щие кипячению инструменты подвергаются обработке специальными мющими растворами для удаления крови и т.п.

Пастеризация. Метод был предложен Пастером для частичного обеспложивания жидкостей, теряющих свои качества под действием высокой температуры. Применяется для обработки вина, молока, дру­гих пищевых продуктов. При прогревании жидкости при 50-60°С в те­чение 30 минут, 70-80°С 5-10 минут и 90°С 2 минуты погибает большин­ство бесспоровых микробов. Споры остаются живыми. Поэтому во избежание их прорастания пастеризованный продукт необходимо хра­нить в холодильнике.

Фильтрование - освобождение жидкостей от микробов, применяется в тех случаях, когда материал не может быть подвергнут нагреванию. Фильтры должны быть настолько мелкопористыми, чтобы задерживать микробы. Бактериальные фильтры изготавливаются из мелкопористых веществ в виде фарфоровых свечей, асбестовых пластинок Зейтца или мембранных фильтров. Фильтрование производят, создавая с помощью насоса разрежение в приемнике. Перед употреблением фильтрующее устройство должно быть простерилизовано. Вирусы проходят через бак­териальные фильтры, поэтому метод фильтрования можно отнести к ме­тодам частичного обеспложивания. Этот метод используют не только для стерилизации питательных сред и растворов, но и для того, чтобы освободить от микробов токсины, антибиотики, бактериофаги, вирусы.

Как стерилизовать стеклянную посуду?

Сухожаровой шкаф, 160-170С 2ч

Простые питательные среды.

Автоклавирование 120С 1 атм. в течение 20-40 минут

Питательные среды, содержащие углеводы.

Дробная стерилизация текучим паром, или автоклавированнию при 0,5 атм

Стерилизация дробными методами проводится при таких температурах, при которых споровые формы не гибнут. Как же достигается стерильность при этих методах?

Прорастание спор и их последующая гибель

Перечислите методы, применяемые для контроля процесса стерилизации.

Микробиологический контроль объектов, подвергшихся стерилизации, проводится постоянно.

Контроль работы аппаратуры для стерилизации осуществляется несколькими способами:

1. Персонал должен строго соблюдать установленный режим стерилизации, который обеспечивает гибель микробов.

2. Соответствующей службой должен регулярно проводиться технический контроль аппаратуры для стерилизации.

3. Косвенно о поддержании определенной температуры при стерилизации можно судить по изменению окраски химических индикаторов, которые помещают на поверхность и в глубину стерилизуемого объекта. Создана комплексная система оперативного контроля критических параметров паровой и воздушной стерилизации с помощью индикаторов серий «МедИС», «СТЕРИКОНТ», «СТЕРИТЕСТ», «ИНТЕСТ», «ФАРМАТЕСТ», «СВИДЕТЕЛИ». Индикаторы серий «МедИС» и «СТЕРИКОНТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой или воздушной стерилизации в камере стерилизатора (снаружи стерилизуемых упаковок). Индикаторы серии «СТЕРИТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой и воздушной стерилизации внутри стерилизуемых упаковок. Индикаторы серии «ИНТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой и воздушной стерилизации как в камере стерилизатора, так и внутри стерилизуемых упаковок. Индикаторы серии «ФАРМАТЕСТ» предназначены для контроля всех критических параметров паровой или воздушной стерилизации как в камере стерилизатора, так и внутри стерилизуемых флаконов с растворами и питательными средами. Индикаторы серии «СВИДЕТЕЛИ» предназначены для визуального отличия упаковок, прошедших стерилизацию, от нестерилизованных и исключения риска смешения потоков стерилизованных и не стерилизованных изделий.

Преимущества индикаторов:

– чёткий, контрастный цветовой переход облегчает визуальный контроль и повышает его точность;

– на каждом индикаторе напечатан эталон конечного цвета индикаторной метки, который она приобретает при соблюдении параметров стерилизации;

– липкий слой на обратной стороне индикатора облегчает его закрепление на стерилизуемых упаковках и подклеивание в журнал контроля.

4. Микробиологический контроль стерилизации проводится с помощью посевов кусочков стерилизуемого материала, смывов с предметов, подвергшихся стерилизации на среды, позволяющие обнаружить аэробные и анаэробные бактерии, грибы (сахарный бульон, тиогликолевая среда, среда Сабуро). Отсутствие роста после 14 дней инкубации в термостате свидетельствует о стерильности предмета. Кроме того, для контроля процесса стерилизации применяются тест-культуры спор Bacillus stearothermophilus (для контроля работы паровых стерилизаторов) и Bacillus licheniformis B-6 (для воздушных стерилизаторов). Тест-культуры помещают в камеры для стерилизации и после её окончания высевают на питательные среды с последующей инкубацией в термостате.

Для сохранения стерильности предметы должны иметь упаковку, не допускающую микробного загрязнения. С этой целью применяют полимерную плёнку, бумагу, фольгу, биксы, металлические пеналы, флаконы.

Фильтрование: в каких случаях применяется, что представляют собой фильтры, условия фильтрования; от каких микроорганизмов не освобождается профильтрованная жидкость?

Фильтрование - освобождение жидкостей от микробов, применяется в тех случаях, когда материал не может быть подвергнут нагреванию. Фильтры должны быть настолько мелкопористыми, чтобы задерживать микробы. Бактериальные фильтры изготавливаются из мелкопористых веществ в виде фарфоровых свечей, асбестовых пластинок Зейтца или мембранных фильтров. Фильтрование производят, создавая с помощью насоса разрежение в приемнике. Перед употреблением фильтрующее устройство должно быть простерилизовано. Вирусы проходят через бак­териальные фильтры, поэтому метод фильтрования можно отнести к ме­тодам частичного обеспложивания. Этот метод используют не только для стерилизации питательных сред и растворов, но и для того, чтобы освободить от микробов токсины, антибиотики, бактериофаги, вирусы.

Как простерилизовать питательную среду, содержащую белки?

Текучим паром 100С 20-30 минут 3 дня подряд

Пастеризация: режим, для чего применяется, хранение пастеризованных продуктов. Стерильны ли пастеризованные продукты?

Пастеризация. Метод был предложен Пастером для частичного обеспложивания жидкостей, теряющих свои качества под действием высокой температуры. Применяется для обработки вина, молока, дру­гих пищевых продуктов. При прогревании жидкости при 50-60°С в те­чение 30 минут, 70-80°С 5-10 минут и 90°С 2 минуты погибает большин­ство бесспоровых микробов. Споры остаются живыми. Поэтому во избежание их прорастания пастеризованный продукт необходимо хра­нить в холодильнике.

Принципиальная схема устройства термостатов и их применение в микробиологической практике.

Каковы особенности ферментных систем бактерий? Как регулируется продукция ферментов у бактерий? Какие группы ферментов различают в зависимости от механизма, которым регулируется продукция фермента? Какое практическое значение имеет изучение ферментативной активности бактерий?

Для бактерий, в силу их малых размеров, характерна высокая сте­пень саморегуляции продукции ферментов. В этом отношении фермен­ты можно разделить на конститутивные и адаптивные. Конститутив­ные ферменты продуцируются клеткой постоянно. Адаптивные фер­менты, в свою очередь, подразделяются на индуцируемые и ингибируемые. Продукция индуцируемых ферментов происходит в присутствии субстрата. Например, ферменты, расщепляющие лактозу, образуются в клетке в только присутствии этого углевода. Продукция ингибируемых ферментов, напротив, подавляется присутствием в среде конеч­ного субстрата в достаточно большой концентрации (например, трип-тофана).

Многие патогенные бактерии, кроме ферментов обмена, выделя­ют ферменты, являющиеся факторами вирулентности. Например, та­кие ферменты, как гиалуронидаза, коллагеназа, дезоксирибонуклеаза, нейраминидаза способствуют проникновению и распространению патогенного микроба в организме.

Способность бактерий продуцировать определенные ферменты -признак настолько постоянный, что его используют для идентифика­ции, то есть определения вида бактерий. Определяют сахаролитические свойства (ферментацию углеводов) и протеолитические свойства (фер­ментацию белков и пептона).

Методы изучения сахаролитической и протеолитической активности бактерий. Дифференциально-диагностические среды: перечислите, назовите основные составные части и применение. На какое изменение среды реагирует индикатор в этих средах?

Для определения протеолитической активности микробы засева­ют уколом в столбик желатина и после 3-5 суток инкубирования при комнатной температуре отмечают характер разжижения желатина: в виде воронки, гвоздя, чулка или в виде опрокинутой елки. Протеолитическую активность определяют также по образованию продуктов разложения белка: индола, сероводорода, аммиака. Для их определения засевают микроорганизмы в мясо-пептонный бульон, и между горлыш­ком пробирки и ватной пробкой помещают индикаторные бумажки, исключая их контакт со средой. При образовании индола бумага, про­питанная насыщенным раствором щавелевой кислоты, приобретает розовый цвет; в присутствии сероводорода бумага, пропитанная аце­татом свинца, чернеет; при образовании аммиака красная лакмусо­вая бумажка синеет.

Для определения сахаролитических свойств микробов применяют дифференциально-диагностические среды такие, как среды Гисса, среда Олькеницкого, среда Эндо, среда Левина, среда Плоскирева.

По какому признаку дифференцируются бактерии на средах Эндо, Левина, Плоскирева? Каким свойством должны обладать бактерии, чтобы образовать на этих средах окрашенные колонии? Если бактерии образуют бесцветные колонии, что это означает?

Среды Эндо, Левина, Плоскирева в чашках Петри применяются для дифференцировки бактерий кишечной группы по их способности сбраживать лактозу. Эти среды содержат питательный агар, лактозу и индикатор, изменяющий свой цвет в кислой среде - индикатор рН. Если посеять на такую среду бактерии, которые сбраживают лактозу, на­пример кишечную палочку, то в результате сбраживания лактозы об­разуется кислота, и индикатор изменит свой цвет в кислой среде. По­этому колонии кишечной палочки на таких средах будут окрашенны­ми соответственно цвету индикатора: на среде Эндо и среде Плоски­рева - в красный цвет, на среде Левина - в черно-синий. Колонии бак­терий, не сбраживающих лактозу, таких как сальмонеллы и палочки дизентерии, будут бесцветными.

Среды Гисса их состав и применение. Что такое «пёстрый» или «цветной» ряд?

Среды Гисса (среды "пестрого ряда") готовятся на основе пептон-ной воды или полужидкого мясо-пептонного агара. Содержат какой-либо один углевод или многоатомный спирт и индикатор. При росте на среде Гисса микроба, сбраживающего данный субстрат с образо­ванием кислоты и газа, среда изменит цвет, в полужидкой среде по­явятся пузырьки и разрывы в толще агара, в жидкой среде - пузырек газа в стеклянном поплавке. При сбраживании субстрата только до кислоты происходит лишь изменение цвета среды.

Среда Олькеницкого, её состав; как производится посев и как отмечают на этой среде ферментацию разных углеводов, образование сероводорода?

Применяются также комбинированные среды, содержащие не один углевод, а два или три, например, среда Олькеницкого. Одна пробирка этой среды заменяет скошенный агар и среды Гисса с лактозой, глю­козой и сахарозой. После стерилизации в расплавленном виде среду в пробирке скашивают так, чтобы получился столбик и скошенная часть. Посев производится штрихом по скошенной части и уколом в столбик. При сбраживании лактозы или сахарозы изменяется цвет всей среды, при сбраживании одной глюкозы изменяется цвет только столбика. Образование газа определяется по наличию пузырьков в столбике ага­ра. При выделении микробами аммиака цвет среды не меняется. Образование сероводорода проявляется почернением в столоике агара

Что представляют собой микротест-системы для определения ферментативной активности микробов; как производят посев и как учитывают результаты?

Диагностические микротест-системы (МТС), типа API-20-Е (для энтеробактерий), API-32-Gr+, ID32 GN, Enterotube и другие. Они представляют собой полистироловые пластины с лунками, или планшеты, в которых содержатся стерильные дифференциально-диагностические среды или только субстраты и индикаторы. Стерилизацию МТС проводят ультрафиолетовым облучением. Существует два основных типа таких систем. Это индивидуальные системы, рассчитанные на идентификацию одной культуры. К ним относятся тест-системы ПБДЭ, ПБДС (Россия), системы API (Франция) и многие другие. Второй тип систем основан на использовании многорядных планшетов, позволяющих одновременно проводить идентификацию нескольких культур. К системам этого типа относятся тест-системы фирмы Lachema (Чехия), ММТ Е (Россия), Enterotube II (США) и др. В каждую ячейку засевают взвесь культуры бактерий определённой густоты. В контрольные ячейки наливают физиологический раствор. Инкубация тест-систем проводится в обычных термостатах или в специальных термостатируемых устройствах, входящих в комплект автоматизированных систем, где учёт результатов и их интерпретация осуществляется автоматически с помощью компьютера (Vitek, BioMerieux, Франция). Результат учитывают после 3–4-часовой инкубации в термостате визуально или при использовании автоматизированной компьютерной системы по изменению цвета индикатора. Микротест-системы особенно удобны при массовых бактериологических исследованиях в практических лабораториях.

Что такое СИБ; как используется эта система, как производится посев и учёт результатов?

Системы индикаторные бумажные (сиб) представляют собой наборы бумажных дисков для выявления самых разнообразных ферментов бактерий. Диски пропитаны субстратом (углеводами, аминокислотами, цитратом, ацетатом, малонатом и другими веществами), а также содержат индикатор. Полную петлю исследуемой культуры или каплю густой микробной взвеси вносят в стерильный физиологический раствор (в некоторых случаях в забуференный: рн 5,4-5,6) либо в 1% пептонную воду и помещают в эту пробирку соответствующий диск. В контрольные пробирки культуру бактерий не вносят. Для определения сероводорода диск помещают в пробирку на поверхность мпа, засеянного уколом, что позволяет одновременно определить подвижность. После инкубации в термостате оценивают результаты тестов по изменению цвета среды и диска. Утилизация вещества приводит к изменению цвета индикатора. Во всех пробирках учитывают предварительный результат в тот же день и окончательный – через восемнадцать–двадцать четыре часа. Имеются наборы, которые содержат от десяти до тридцати тест-бумажек.

Укажите основные объекты внешней среды, которые подвергаются санитарно-бактериологическому исследованию. Микробиоценоз, определение понятия. Перечислите и дайте характеристику межвидовых взаимоотношений в микробиоценозах.

Воздух, вода, почва, пищевые продукты

Микробиоценоз - сообщество популяций разных микроорганиз­мов, обитающих в определенном биотопе

Какие показатели определяются при бактериологической оценке объектов внешней среды? Санитарно-показательные микроорганизмы: определение понятия. Какими свойствами должны обладать санитарно-показательные микроорганизмы? Перечислите санитарно-показательные микроорганизмы для воздуха, воды, почвы.

Характеризуя микрофлору почвы, воды и воздуха, целесообразно придерживаться определенного плана:

1) постоянная микрофлора данной среды;

2) значение данной среды как фактора передачи возбудителей за­болеваний;

3) определение микробной флоры.

При исследовании объектов внешней среды методами санитарной микробиологии определяются количественные показатели - общее ко­личество микроорганизмов в определенном объеме. Важной задачей исследования является обнаружение патогенных микробов и их ток­синов. Однако непосредственное их выявление представляет значи­тельные трудности. Причина в том, что патогенные микроорганизмы встречаются во внешней среде непостоянно, обычно в небольших ко­личествах, их трудно культивировать на питательных средах, некоторые из них вообще не культивируются на искусственных средах. Поэтому возможное загрязнение внешней среды патогенными микробами опре­деляют по косвенному показателю - обнаружению санитарно-показа-тельного микроорганизма.

В качестве санитарно-показательных выбирают те микробы, ко­торые постоянно и в больших количествах содержатся в тех выделе­ниях человека, которые для данной среды наиболее опасны. Сроки их выживания во внешней среде должны совпадать примерно со сроками выживания патогенных микробов. Санитарно-показательные мик­роорганизмы не должны интенсивно размножаться во внешней среде и должны легко обнаруживаться при лабораторном исследовании.

Санитарно-показательные микроорганизмы воды: БГКП (Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes), Streptococcus faecalis, Bacillus anthracis, Streptococcus faecium.

Санитарно-показательные микроорганизмы почвы: БГКП (Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes), Streptococcus faecalis, клостридии (Clostridium perfringens, Cl. sporogenes, Cl. botulinum), термофильные бактерии (Lactobacillus lactis, Str. Thermophilus), Proteus vulgaris.

Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus haeraolyticus.

Микрофлора воды: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воды. Методика определения общего микробного числа воды. Показатели фекального загрязнения воды, методы их определения. Укажите предельно допустимые показатели для питьевой воды.

Санитарно-показательные микроорганизмы воды: БГКП (Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes), Streptococcus faecalis, Bacillus anthracis, Streptococcus faecium.

Вода открытых водоемов, подобно почве, является естественной средой обитания многих видов бактерий, грибов, вирусов, простей­ших. В воде обитают также различные виды микробов, принимающих участие в круговороте веществ в природе и способствующих самоочи­щению воды благодаря разложению органических соединений. Харак­тер микрофлоры воды зависит от многих причин, и в особенности от загрязнения стоками ливневых, фекальных и промышленных нечистот. По мере удаления от населенных пунктов число микробов постепенно уменьшается. Наиболее чистыми являются воды глубоких артезианс­ких скважин и родников.

Вода имеет эпидемиологическое значение как фактор передачи ин­фекций. Наблюдались водные эпидемии холеры, брюшного тифа, лептоспирозов и других инфекционных болезней.

Санитарно-гюказательными микроорганизмами для воды являют­ся бактерии группы кишечной палочки (БГКП), принадлежащие к раз­ным родам семейства энтеробактерий. Санитарно-микробиологическое состояние воды оценивается по следующим показателям:

1) микробное число - общее количество бактерий в 1 мл воды;

2) коли-титр - наименьший объем воды в миллилитрах, в котором обнаруживаются БГКП;

3) коли-индекс - количество БГКП в 1 литре воды;

4) кроме того, в воде определяют наличие патогенных и условнопатогенных микроорганизмов: энтерококков, сальмонелл, холерного вибриона, энтеровирусов.

В соответствии с ГОСТом на питьевую водопроводную воду, мик­робное число ее должно быть не более 100, коли-титр должен быть не ниже 300, коли-индекс - не более 3.

Микрофлора воздуха: постоянная микрофлора, источники загрязнения. Показатели для санитарно-бактериологической оценки воздуха, методы их определения.

Санитарно-показательные микроорганизмы воздуха: Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Streptococcus haeraolyticus.

1. Естественная седиментация — так называемый чашечный метод Коха с пассивным осаждением микробов на поверхность плотной питательной среды за определенное время, обычно 5-10 мин. Метод прост, но не позволяет выявить микробный аэрозоль малой

дисперсности.

2. Принудительная седиментация микроорганизмов из воздуха с использованием специальных приборов — импакторов типа прибори Кротова (микробы осаждают на поверхность плотных питательных сред) и импинджеров типа прибора Дьяконова (при продувании воздуха микробы поступают в жидкие питательные среды). Эти метлы наиболее надежны, так как позволяют дать количественную характеристику загрязнения воздуха микроорганизмами и изучить их видовой состав.

3. Фильтрационный метод — воздух продувают через воду или мембранные фильтры с последующим мерным высевом в питательные среды (редко используют). Критериями оценки санитарно-микробиологического состояния воздуха закрытых помещений медицинских учреждений являются: общее микробное число (ОМЧ) — количество бактерий в пересчете на 1 м3 воздуха, выросших при посеве на поверхности питательного агара (посевы инкубируют сутки при 37°С, затем еще сутки при температуре около 20°С); индекс санитарно-показательных бактерий — количество в пересчете на 1 м3 воздуха условно-патогенных микробов дыхательных путей — гемолитических стрептококков, золотистого стафилоккока, граммотрицательных бактерий, дрожжеподобных и плесневых грибов.

Микрофлора почвы: постоянная микрофлора, её значение для круговорота веществ в природе. Источники загрязнения почвы патогенными микроорганизмами. Показатели для санитарно-бактериологической оценки.

Санитарно-показательные микроорганизмы почвы: БГКП (Escherichia coli, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes), Streptococcus faecalis, клостридии (Clostridium perfringens, Cl. sporogenes, Cl. botulinum), термофильные бактерии (Lactobacillus lactis, Str. Thermophilus), Proteus vulgaris.

Присутствие в почве определенных концентраций кишечной палочки (Е. coli) и фекального стрептококка (Streptoccocus faecalis) указывает на свежее, бактерий родов Citrobacter и Enterobacter — на несвежее, a Clostridium perfringens — на давнее фекальное загрязнение. Санитарно-микробиологическое исследование почвы с целью предупредительного надзора проводят по расширенному перечню показателей. Определяют кали-индекс — количество бактерий группы кишечной палочки (БГКП), обнаруженных в 1 г почвы, перфрингенс-титр — наименьшую массу почвы в граммах, в которой обнаруживаются особи Clostridium perfringens, общую численность сапрофитных, термофильных и нитрифицирующих бактерий в 1 г почвы.

Для каких заболеваний факторами передачи могут быть вода, воздух, почва?

Некультивируемые формы бактерий: определение понятия, практическое значение.

Некультивируемыми (НФ) называют такие формы микроорганизмов, которые в ответ на действие неблагоприятных факторов прекращают рост на питательных средах, но сохраняют жизнеспособность, а при улучшений условий культивирования возобновляют пролиферацию.

Фактор перехода в некультивируемые формы:

• t- особенно низкая

• концентрация солей

• аэрация среды

• количество питательных веществ

Значение некультивированных форм:

• В такой форме бактерии сохраняются во внешней среде в между эпидемиями.

• При попадании НФБ в макроорганизм они могут ре культивироваться (оживляться), восстанавливают свою патогенность – это объясняет наличие природно-очаговых заболеваний.

Выявление НФБ:

• прямой подсчет числа клеток

• выявление активности ДНК

• генетические методы исследования (ПЦР).

Перечислите физические факторы, которые могут губительно действовать на микробов.

Вегетативные формы бактерии погибают при 60-80°С в течение часа, при 100°С - через 1 минуту. Споры бактерий устойчивы к 100°С в течение нескольких часов. Споры погибают при сухом жаре 160-170°С, пара под давлением 120-134°С.

К низким температурам микроорганизмы более устойчивы. Многие способны переживать замораживание. Но некоторые не переносят температуры ниже 20°С: менингококки, гонококки, возбудители коклюша, сифилиса.

УФ-лучи повреждают геном микробных клеток, что приводит их к гибели. Применяется для обеззараживания воздуха.

γ-излучение губительно действуют на микроорганизмы, хотя смертельные дозы для них выше, чем для животных и растений. Они повреждают все структуры клетки, выбивая электроны и/или атомы из молекул, с образованием свободных радикалов, разрушающих клетку изнутри.

Этиловый спирт в высоких концентрациях (от 50%) дезинфицирующим эффектом – они вызывают денатурацию белков клеточных мембран и гибель клетки. Для обработки кожи подходит спирт от 50% до 70%, 95%-96% используется для стерилизации хирургических инструментов.

Деление микробов по отношению к температуре; температурный оптимум, минимум, максимум.

Для психрофилов оптимальная температура для роста 10-15°С. ми­нимальная 0-5°С, максимальная 25-30°С. Большинство из них свободноживущие и паразиты холоднокровных животных, по есть и патогенные для человека, например, иерсинии, псевдомонады. Они разм­ножаются при температуре бытового холодильника и более вирулентны при низких температурах.

Мезофилы размножаются преимущественно в организме теплок­ровных животных и человека. Оптимальная температура для их роста 30-37°С, максимальная 43-45°С, минимальная 15-20°С. Большинство патогенных микроорганизмов относятся к мезофилам. В окружающей среде они обычно не размножаются, но могут сохраняться живыми.

Для термофилов оптимальная температура для роста 50-60°С, ми­нимальная равна 45°С максимальная 90°С. Термофильные бактерии живут в юрячей воде гейзеров. Они не размножаются в организме человека.

Приведите примеры видов микробов, которые погибают при комнатной температуре. Погибают ли перечисленные виды бактерий при 0⁰С, при 100⁰С: возбудитель столбняка, сибирской язвы, дифтерии, брюшного тифа, ботулизма, анаэробной газовой инфекции, менингококк, гонококк, холерный вибрион, стафилококк.

При комнатной - менингококк, гонококк

При 0 – менингококк, гонококк

При 100 – вегетативные формы, столбняк, сальмонеллы, сибирская язва, дифтерия, холерный вибрион, стафилококки

Более 100 - споры

Как влияет на бактерии высушивание? Что такое лиофильное высушивание, для чего применяется?

Высушивание. Вода необходима для нормальной жизнедеятель­ности микробов, так как питательные вещества поступают в клетку в растворенном виде. При недостатке воды рост микробов прекраща­ется, хотя некоторые их них остаются живыми в течение какого-то вре­мени. Чувствительны к высушиванию менингококки, гонококки, воз­будители сифилиса, коклюша, гриппа; устойчивы стафилококки, воз­будитель туберкулеза. Наиболее устойчивы споры бактерий, так как вода в них находится в связанном состоянии. Для сохранения живых микроорганизмов применяют метод лиофилизации - высушивание под вакуумом из замороженного состояния. Лиофилизированные живые культуры микроорганизмов, вакцины, биопрепараты в течение ряда лет сохраняются, не изменяя своих свойств.

Какие виды лучистой энергии губительно действуют на микробов и применяются на практике? Действие биологических факторов на микробов.

Действие излучений. Ионизирующая радиация - гамма-излучение радиоактивных веществ и электроны высоких энергий - губительно дей­ствуют на микроорганизмы, хотя смертельные дозы для них выше, чем для животных и растений. Ионизирующие излучения применяют для стерилизации одноразовых пластиковых шприцев и посуды, пита­тельных сред, лекарственных препаратов.

Неионизирующие излучения - ультрафиолетовые лучи - повреждают микроорганизмы в большей степени, чем животных и растения. УФ-лучи повреждают геном микробных клеток, что приводит их к гибели. Для обеззараживания воздуха в лечебных учреждениях и в микробио­логических лабораториях применяются бактерицидные лампы ультра­фиолетового излучения.

Назовите дезинфицирующие вещества, наиболее часто применяемые на практике. Механизмы действия дезинфицирующих веществ на микробов. Действие дезинфицирующих веществ на вегетативные формы и споры бактерий.

В какой из концентраций этиловый спирт оказывает более сильное бактерицидное действие: 70 или 96%? Почему?

Дайте определения понятия: нормальная микрофлора организма человека; резидентная микрофлора, транзиторная микрофлора.

Нормальная микрофлора человека, как и животных, представляет собой сложившуюся в процессе длительной эволюции совокупность множества микробиоценозов, заселяющих кожу и слизистые оболочки полостей, сообщающихся с окружающей средой; внутренняя среда здорового организма практически стерильна.

Аутохтонная микрофлора может быть разделена на резидентную (постоянную) и транзиторную (непостоянную).

Резидентная. Типичная, одинакова для большинства особей данного вида. Приспособлена к особенностям определенных анатомических мест – биотопов. Быстро восстанавливается после ее элиминации. Часто может быть антагонистом по отношению к транзиторной и патогенной микрофлоре. При попадании в непривычное для нее анатомическое место может вызывать заболевание.

Транзиторная. Нетипичная, разная для большинства особей данного вида. Не приспособлена к анатомическим местам существования. Не обновляется быстро, может быть заменена на другую микрофлору. Угнетается микробами-антагонистами из состава постоянной микрофлоры. Может вызывать заболевание при наличии для этого нужных условий.

Что такое гнотобионты, для чего они используются?

ГНОТОБИОНТЫ [от греч. Gnotos — известный, определенный и бионт (ы)], безмикробные животные и животные, выращенные в стерильных условиях в период постнатального развития. Обычно Г. Получают путем кесарева сечения и содержат в спец. Боксах, в к-рых отсутствуют микробы (подаются стерильный воздух, пища, вода). Г. Не подвержены воздействию сапрофитной или патогенной микрофлоры воздуха, вследствие этого, в отличие от обычных животных, их реакции на воздействие факторов окружающей среды более выражены.

Как изменяется микрофлора ребёнка после рождения и в течение первого года жизни? Назовите органы и ткани, свободные от постоянной микрофлоры.

Организм ребенка при рождении свободен от микробов, но уже в процессе родов и в первые дни жизни микробы заселяют поверхность тела, ротовую полость, дыхательные пути, кишечник. В дальнейшем при взаимодействии микробов с организмом ребенка, в результате вза­имной адаптации одни микробы будут удалены, другие приживутся. При этом для каждой области организма характерны определенные виды.

Свободны от микрофлоры кровь и внутренние органы, не сооб­щающиеся с внешней средой, такие как мозг, сердце, печень, селезенка и другие. В норме не имеют резидентной микробной флоры такие орга­ны, как матка, мочевой пузырь, легкие.

Характеристика микрофлоры различных биотопов организма: органов дыхания, желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, кожи, глаз, наружного уха.

Микрофлора кожи. На поверхности кожи обитают, главным обра­зом, транзиторные микробы: сарцины, стафилококки, коринебактерии; в глубоких слоях кожи постоянным обитателем является эпидермальный стафилококк. Кожа, в особенности чистая, обладает бактерицидностью благодаря действию выделений потовых и сальных желез.

Полость рта наиболее богата по разнообразию видов бактерий, грибов, простейших, вирусов. Постоянные обитатели способны к адгезии - прикреплению к поверхности зубов или слизистой оболочки. Состав микрофлоры зависит от состояния организма, от состава пи­щи, от гигиены полости рта.

Микрофлора желудка бедна. Несмотря на то, что несколько раз и день в желудок попадает большое количество микробов, многие из них

погибают иод действием желудочного сока. Могут встречаться в не­большом количестве сарцины, дрожжи. При пониженной кислотности желудочного сока число микробов возрастает.

Микрофлора тонкой кишки небогата вследствие бактерицидных свойств кишечного секрета.

Микрофлора толстой кишки наиболее обильна по количеству мик­робов. Состав ее формируется в течение первых месяцев жизни и зави­сит от способа вскармливания. Вскоре после рождения у грудных де­тей, питающихся молоком матери, формируется стабильная кишечная микрофлора, состоящая, в основном, из анаэробных неспоровых грам-положительных Bacterium bifidum и факультативно-анаэробных молоч­нокислых грамположительных Bacterium acidophilum. Эта бифидум-флора является основой микрофлоры толстой кишки здоровых детей первых месяцев жизни. В этом возрасте такие обычные для взрослых бактерии, как кишечная палочка, могут вызвать патологический про­цесс. Поэтому даже лечебные препараты, содержащие живые кишеч­ные палочки (колибактерин, бифпкол) назначаются только после 6-месячного возраста.

У детей, вскармливаемых искусственно, в кишечной флоре, кроме молочнокислых бактерий, встречаются кишечные палочки, ста­филококки, энтерококки, другие микробы, и у таких детей чаще возни­кают кишечные заболевания.

У более старших детей и у взрослых в кишечной микрофлоре так­же преобладают анаэробы: грамположительные бифидумбактерии и грамотрицательные анаэробные бактероиды. На них приходится 96-99% всей микрофлоры. От 1 до 4% составляют факультативные анаэ­робы - кишечные палочки, энтерококки, лактобактерии; на долю оста­точной микрофлоры - стафилококков, протея, дрожжей, клостридий -приходится менее 1%.

Микрофлора толстой кишки, в основном, является полезной для человека. Бактерии, тесно связанные со слизистой оболочкой бла­годаря адгезии (главным образом, бифидо- и лактобактерии), обра­зуют на ее поверхности биологическую пленку, препятствующую раз­множению и проникновению патогенных микробов. Кроме того, мик­робная флора является антагонистом гнилостной микрофлоры, а так­же играет роль в водно-солевом обмене, в превращении пищева­рительных ферментов, в продукции витаминов.

Микрофлора дыхательных путей. Микроорганизмы, содержащие­ся во вдыхаемом воздухе, большей частью погибают в полости носа. Постоянными обитателями здесь являются микрококки, стафилокок­ки, дифтероиды, нейссерии. Трахея и бронхи свободны от постоянной микрофлоры.

Микрофлора конъюнктивы глаза, благодаря бактерицидному дей­ствию лизоцима очень бедна. В небольшом количестве встречаются Corynebacterium xerosis, стафилококки.

Микрофлора мочеполовой системы. В нижней части мочеиспуска-

тельного канала встречаются бактероиды, коринебактерии, микобактерии, кишечные палочки. На наружных половых органах обнаружива­ются микобактерии смегмы, сходные по морфологии с палочками ту­беркулеза, и непатогенные трепонемы, которые следует отличать от возбудителя сифилиса.

Микрофлора влагалища у новорожденных девочек состоит из мо­лочнокислых бактерий, полученных от матери в момент рождения. У девочек до периода полового созревания микрофлора влагалища не­постоянна (в основном, это кокки) и во многом зависит от гигие­нических навыков ребенка. С наступлением половой зрелости созда­ются благоприятные условия для развития грамположительной молочно-кислой бактерии, так называемой палочки Додерлейна. Наличие этой палочки препятствует размножению других микробов. Поэтому следует осторожно использовать антибактериальные средства, к ко­торым чувствительны молочнокислые бактерии.

Различают четыре степени чистоты влагалищного секрета: I сте­пень - реакция среды кислая, в мазке - палочки Додерлейна, клетки плоского эпителия; II степень - реакция близка к нейтральной, в мазке палочки Додерлейна, клетки плоского эпителия, небольшое количество других микробов; III степень - реакция слабощелочная, в мазке пало­чек Додерлейна мало, преобладают кокки, много лейкоцитов; IV сте­пень - палочек Додерлейна нет, много лейкоцитов, кокков, палочек. Неблагоприятное действие на микрофлору влагалища оказывают вос­палительные процессы, аборт, нарушение гормонального состояния (диабет). Во время беременности гормональная перестройка способ­ствует нормализации влагалищной микрофлоры, развитию молочно­кислых бактерий, с которыми встречается новорожденный в процес­се родов.

Микрофлора толстого кишечника – облигатная и факультативная, аэробная и анаэробная.

Микрофлора толстой кишки наиболее обильна по количеству мик­робов. Состав ее формируется в течение первых месяцев жизни и зави­сит от способа вскармливания. Вскоре после рождения у грудных де­тей, питающихся молоком матери, формируется стабильная кишечная микрофлора, состоящая, в основном, из анаэробных неспоровых грам-положительных Bacterium bifidum и факультативно-анаэробных молоч­нокислых грамположительных Bacterium acidophilum. Эта бифидум-флора является основой микрофлоры толстой кишки здоровых детей первых месяцев жизни. В этом возрасте такие обычные для взрослых бактерии, как кишечная палочка, могут вызвать патологический про­цесс. Поэтому даже лечебные препараты, содержащие живые кишеч­ные палочки (колибактерин, бифпкол) назначаются только после 6-месячного возраста.

У детей, вскармливаемых искусственно, в кишечной флоре, кроме молочнокислых бактерий, встречаются кишечные палочки, ста­филококки, энтерококки, другие микробы, и у таких детей чаще возни­кают кишечные заболевания.

У более старших детей и у взрослых в кишечной микрофлоре так­же преобладают анаэробы: грамположительные бифидумбактерии и грамотрицательные анаэробные бактероиды. На них приходится 96-99% всей микрофлоры. От 1 до 4% составляют факультативные анаэ­робы - кишечные палочки, энтерококки, лактобактерии; на долю оста­точной микрофлоры - стафилококков, протея, дрожжей, клостридий -приходится менее 1%.

Микрофлора толстой кишки, в основном, является полезной для человека. Бактерии, тесно связанные со слизистой оболочкой бла­годаря адгезии (главным образом, бифидо- и лактобактерии), обра­зуют на ее поверхности биологическую пленку, препятствующую раз­множению и проникновению патогенных микробов. Кроме того, мик­робная флора является антагонистом гнилостной микрофлоры, а так­же играет роль в водно-солевом обмене, в превращении пищева­рительных ферментов, в продукции витаминов.

Значение нормальной микрофлоры в жизни человека.

И.И. Мечников еще в 1907-1908 годах высказал предположение, что микрофлора организма может быть для человека полезной, вред­ной или безразличной. Как правило, при физиологических условиях, в местах обычного своего обитания, микроорганизмы оказывают поло­жительное действие. Они обладают антагонистическими свойствами по отношению к патогенным микробам; способствуют созреванию им­мунной системы; способствуют пищеварению; синтезируют некоторые витамины.

В то же время при попадании микробов в необычное место оби­тания возможно развитие воспалительного процесса, например, пе­ритонита при ранении в живот и повреждении кишечника. Кроме того, кишечные микроорганизмы продуцируют вредные для человека продук­ты гниения. И, наконец, в процессе эволюционного развития происхо­дит отщепление патогенных вариантов бактерий, например, Е. coli.

Обнаружение какого микроба свидетельствует о фекальном загрязнении?

Дисбиоз (дисбактериоз): определение понятия, в чём выражается, причины возникновения, способы предупреждения и лечения.

Дисбактериоз - это нарушение количественного и качественного

состава нормальной микрофлоры. Причинами дисбактериоза могут быть:

- кишечные заболевания, например дизентерия;

- заболевания иной локализации;

- длительное применение антибиотиков и антисептиков, которые угнетают развитие одних видов микробов и не влияют на другие; в результате наступает бесконкурентное размножение стафилококков, протея, грибов Candida;

- снижение иммунитета, вызванное облучением, лечением иммунодепрессантами.

Чаще всего в клинической практике сталкиваются с дисбактериозом кишечника.

Диагноз дисбактериоза устанавливается бактериологически­ми исследованиями, путем посевов на питательные среды и опре­деления количественных соотношений разных видов микробов.

Дисбактериоз проявляется клинически примерно в половине слу­чаев, в виде кишечных расстройств Нормальная микрофлора ки­шечника, нарушенная из-за лечения антибиотиками, восстанавлива­ется обычно в течение месяца после прекращения лечения.

Для предотвращения и устранения дисбактериоза применяется бак-териотерапия с помощью биологических бактериальных препаратов (ББП), в отношении которых применяются также термины: пробио-тики, эубиотики. ББП содержат живые культуры бактерий: кишечной палочки, бифидобактерий, лактобактерий.

Колибактерин содержит живые Е. coli штамма М-17 - антагониста патогенных энтеробактерий.

Бифидумбакгерин содержит живые бифидумбактерии.

Бификол - сочетание колибактерина и бифидумбактерина

Лактобактерин - живые молочнокислые бактерии.

Препараты выпускаются в лиофилизированном виде, для приме­нения per os или в клизмах. Эффект их состоит в приживлении в кишеч­нике и замещении нормальной микрофлоры до ее восстановления.

Детям до 6-месячного возраста назначают препараты, не со­держащие кишечную палочку. Взрослым же, при нарушении состава аэробных бактерий назначаются колисодсржащие препараты, при на­рушении состава аэробных и анаэробных бактерий - бификол. При наличии язвенного процесса кишечника не назначаются колисодержащие препараты.

ББП применяются также в виде вагинальных суппозиториев и гам-ионов - при нарушении вагинальной микрофлоры.

Следует иметь в виду, что бактерии, входящие в состав ББП, чувстви­тельны к определенным антибиотикам и не могут применяться в сочета­нии с ними. Относительно более устойчивы лактобактерий.

Для нормализации микрофлоры кишечника применяются также бифидогенные средства, благоприятствующие размножению собственных бифидобактерий. К таким препаратам относится лактулоза.

Понятие о пробиотиках, пребиотиках, синбиотиках.

Пробиотики – живые микроорганизмы и вещества микробного происхождения, оказывающие при естественном способе введения позитивные эффекты на физиологические, биохимические и иммунные реакции организма хозяина через стабилизацию и оптимизацию функции его нормальной микрофлоры. Пробиотики получают путём выращивания бактерий на искусственных питательных средах, концентрирования, сушки, стандартизации и изготовления готовых форм в виде порошка или таблеток. В качестве бактерий в пробиотиках используют различные виды бифидумбактерий, лактобактерий и другие микроорганизмы и их комбинации в различных процентных концентрациях (бифидумбактерин, линекс, лактобактерин, биобактон, гастрофарм, колибактерин, бификол, споробактерин, бактисубтил и др.).

Пребиотики – препараты немикробного происхождения, способные оказывать позитивный эффект путём селективной стимуляции роста или усиления метаболической активности нормальной микрофлоры кишечника. К ним относятся лактулоза (дюфалак, лактусан), парааминометилбензойная кислота (ПАМБА), лизоцим, пантотенат кальция, олигосахариды, галакто-олигосахариды. Перечисленные ингредиенты содержатся в молочных продуктах, кукурузных хлопьях, хлебе, бананах, горохе и т.д.

Синбиотики – препараты, полученные в результате рациональной комбинации пробиотиков и пребиотиков.

Назовите препараты, применяемые для устранения дисбиоза; что они содержат, как применяются, механизмы действия; какие препараты рекомендуют применять для детей до 6-месячного возраста и для взрослых? Бифидогенные препараты (пребиотики): назовите основные препараты.

До 6 месяцев – без кишечной палочки

Группа препаратов	Название	Состав	Способ выпуска и хранения
Пробиотики	Бифидумбактерин	Bifidobacterium bifidum (не менее 5 х 108 КОЕ) Лактоза (0,85 г)	Порошок для приема внутрь и местного применения 500 млн КОЕ Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 10 °C
	Линекс	активное вещество: Лебенин® порошок (в 1 г порошка содержится: Lactobacillus acidophilus — 300 мг, Bifidobacterium infantis — 300 мг, Enterococcus faecium — 300 мг, лактоза — 50 мг, крахмал картофельный — 50 мг) - вспомогательные вещества: магния стеарат — 8,4 м оболочка капсулы: метилгидроксибензоат — 0,19 мг; пропилгидроксибензоат — 0,08 мг; титана диоксид (Е171) — 0,98 мг; желатин — до 63 мг	Капсулы для приема внутрь. Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 25 °C
	Аципол	активные вещества: лактобациллы ацидофильные живые (не менее 107 КОЕ) полисахарид кефирного грибка ((0,4±0,1) мг) вспомогательные вещества: красная окись железа; титана диоксид; желатин	Капсулы для приема внутрь. Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 10 °C
	Бификол	Escherichia coli М-17 (не менее 107 КОЕ) Bifidobacterium bifidum (не менее 107 КОЕ)	Лиофилизат для приготовления суспензии для приема внутрь. Хранить в недоступном для детей месте при температуре не выше 10 °C
Пребиотики	Дюфалак	активные вещества: лактулоза (66,7 г) вспомогательное вещество: вода очищенная (до 100 мл)	Сироп для приема внутрь. Хранить в защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре 10 – 25 °C
	Лактусан	Не менее 55% сухих веществ из них: лактулозы - не менее 45% (является изомером лактозы - молочного сахара); галактозы и фруктозы - не более 10%.	Сироп/таблетки для приема внутрь. Хранить в защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре не выше 20°C
	Лизобакт	активные вещества: лизоцима гидрохлорид (20 мг) пиридоксина гидрохлорид (10 мг) вспомогательные вещества: лактоза моногидрат — 155,4 мг; камедь трагакантовая — 10 мг; магния стеарат — 4 мг; натрия сахаринат — 0,5 мг; ванилин — 0,1 мг	Таблетки для рассасывания. Хранить в защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре не выше 25°C
Симбиотики	Биовестин-лакто	Bifidobacterium adolescentis (109 КОЕ/мл); Lactobacillus plantarum (108 КОЕ/мл); бифидогенные факторы и продукты метаболизма бифидо- и лактобактерий	Эмульсия для приема внутрь. Хранить в защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре 2 – 6 °C
	Бифидум-Мульти®	Порошок (Бифидум-Мульти®-1): мальтодекстрин; мультипробиотический комплекс — 6 штаммов бифидобактерий, относящихся к видам B. bifidum, B. breve, B. infantis. Содержание бифидобактерий — не менее 1 × 108 КОЕ/г Капсулы (Бифидум-Мульти®-2): пектин яблочный; инулин; олигофруктоза; мультипробиотический комплекс бифидобактерий — 6 штаммов, относящихся к видам B. bifidum, B. breve, B. longum. Содержание бифидобактерий — не менее 1 × 108 КОЕ/г	Порошок/капсулы для приёма внутрь. Хранить в сухом, защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре 2 – 6 °C
	Ламинолакт	Enterococcus faecium L-3 Морская капуста, овес, растительный белок, фруктовый порошок, сахар	Драже. Хранить в сухом, защищенном от света, недоступном для детей месте при температуре 4 – 10 °C