35. Исследование лекарственных средств, стерилизуемых в процессе производства: методика исследования, оценка результатов. Исследование на пирогенность.

Отбор образцов для анализа - число образцов из каждой серии от 3 до 40, в зависимости от метода стерилизации, для автоклавированных средств - 10. Для исследования лекарственные средства должны быть приготовлены в виде растворов, суспензий или эмульсий.

Определение антимикробного действия лекарственного средства. Во избежание неправильной оценки результатов анализа необходимо определить однократно для каждого наименования лекарственного средства, обладает ли оно антимикробным действием.

Для определения антимикробного действия из ампулы с лекарственным средством следует внести по 1 мл в 3 пробирки с 10 мл тиогликолевой среды и в 1 пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро. Для контроля в 3 пробирки с тиогликолевой средой и в пробирку с 10 мл жидкой соево-казеиновой среды или среды Сабуро вносится по 1 мл стерильной дистиллированной воды.

Затем во все пробирки следует внести по 0.1 мл микробной взвеси тест - штамма, содержащего 1000 клеток в 1 мл. В пробирки с тиогликолевой средой вносятся штаммы Staphylococcusaureus; Bacillussubtilis; Escherichiacoli; в пробирки с соево-казеиновой средой или средой Сабуро - Candidaalbicans.

Посевы в тиогликолевой среде инкубируют при 30-35°С в течение 2 суток, а на соево-казеиновой среде или среде Сабуро - при 20-25°С в течение 3 суток.

При отсутствии антимикробного действия лекарственного средства в опытных и контрольных пробирках должен наблюдаться рост перечисленных тест - микробов.

В этом случае можно продолжать исследование и провести прямой посев данного лекарственного средства на стерильность.

При наличии антимикробного действия устраняют его. Для этого используют:

• Соответствующие инактиваторы, указанные в частных фармакопейных статьях (например, пара-аминобензойная кислота для сульфаниламидов, пенициллиназа - для пенициллинов и цефалоспоринов).

• При отсутствии соответствующего инактиватора препарат при посеве разводят, увеличивая объём питательной среды до 250 мл

• Если при этом сохраняется антимикробное действие лекарственного средства, для посева используют метод мембранной фильтрации.

Посев лекарственных средств на стерильность (метод прямого посева). Испытуемый препарат, если необходимо, растворяют в соответствующем растворителе и высевают в количествах, указанных в таблице.

Количество испытуемого препарата для посева в зависимости от объёма содержимого единицу (ампул, флаконов), составляющих серию.

* - Если объём содержимого единицы превышает 100 мл, предпочтительнее использовать метод мембранной фильтрации.

Посевы с тиогликолевой средой инкубируют при температуре от 30 до 35°С, а в соево-казеиновой среде или среде Сабуро - от 20 до 25°0С. Продолжительность инкубации посевов в обеих питательных средах составляет 14 суток. Если во всех посевах роста нет, лекарственный препарат стерилен.

Метод мембранной фильтрации. При определении стерильности лекарственных средств, обладающих антимикробным действием, и лекарственных средств, разлитых в ёмкости больше 100 мл, используют метод мембранной фильтрации. Лекарственное средство фильтруют в асептических условиях через 2 мембранных фильтра, затем смывают 3-4 порциями по 100 мл физ. раствора. Каждую мембрану стерильными ножницами разрезают пополам, половину помещают в тиогликолевую среду, половину - в жидкую соево-казеиновую среду или среду Сабуро.

Посевы выдерживают в термостате при тех же температурах в течение 7 суток при ежедневном просмотре. Для контроля полноты смывания другую мембрану разрезают пополам, и по половине мембраны помещают в питательные среды, куда засевают тест - микробы:

Staphylococcus aureus и Candida albicans. Наличие роста этих микробов после инкубации в термостате указывает на полноту смывания. Для контроля стерильности условий фильтрования производят фильтрование растворителя, и фильтры засевают в те же питательные среды.

Испытание на пирогенность проводится путём введения воды или лекарственного средства кроликам с измерением ректальной температуры. При этом строго соблюдаются условия, исключающие возможность повышения температуры тела кроликов от случайных причин. Вода для инъекций или раствор лекарственного средства считается пирогенным, если повышение температуры тела кроликов превышает предельные показатели, указанные в фармакопее.

57. Эшерихии: название по латыни, морфология, отношение к окраске по Граму, питательные среды для культивирования. Физиологическая роль в организме и санитарно-показательное значение. Патогенные представители: факторы вирулентности, вызываемые заболевания, материалы для исследования и методы лабораторной диагностики, препараты для специфической профилактики и лечение.

Название по латыни:

• Gracilicutes

• Enterobacteriaceae

• Escherichia:

• Е. Coli

• E. fergusonii

• E. paracoli

• E. hermannii

• E. vulneris

Возбудитель — кишеч­ная палочка — основной представитель рода Escherichia, семей­ства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.

Морфология и окрашивание:

Е. соlі – мелкие грамотрицательные палочки длиной 2-3 мкм, шириной 0,5-0,7 мкм с закругленными концами, в мазках располагаются беспорядочно; не образуют спор, некоторые штаммы имеют микрокапсулу; перитрихи; кроме жгутиков, иногда обнаруживаются пили.

Культивирование:

Кишечная палочка – факультативный анаэроб; не требовательна к питательным средам, хорошо растет на простых питательных средах при температуре 37ºС и рН среды 7,2.7,4, вызывая диффузное помутнение жидкой среды и образуя обычные колонии на плотных средах. Для диагностики эшерихиозов широко используют дифференциальнодиагностические среды Эндо, Левина и др.

Физиологическая роль и санитарно-показательное значение:

1. Кишечная палочка - представитель нормальной микрофлоры толстой кишки, приносит пользу как антагонист патогенных бактерий и грибов, принимает участие в синтезе витаминов.

2. Е. coli является санитарно-показательным микроорганизмом для определения фекального загрязнения воды, пищевых продуктов, оборудования пищеблоков, рук и спецодежды медицинского персонала и т д. Е.coli при этом расценивается не как возбудитель заболевания, а как показатель загрязнения выделениями человека, которые могут содержать возбудителей кишечных заболеваний.

3. Кишечные палочки как условно-патогенные микроорганизмы у людей с ослабленным иммунитетом могут вызвать гнойно-воспалительные процессы за пределами желудочно-кишечного тракта: пиелиты, циститы, холециститы. У пациентов с выраженным иммунодефицитом может развиться коли-сепсис. Гнойное воспаление ран, постинъекционные абсцессы могут возникнуть в результате заражения извне. Кишечные палочки вызывают пищевые токсикоинфекции при накоплении в большом количестве в пищевом продукте.

4. Энтеропатогенные кишечные палочки вызывают инфекционные острые кишечные заболевания – эшерихиозы. Они возникают как экзогенные инфекции. Источником являются больные люди или бактерионосители, механизм заражения - фекально-оральный. Болеют чаще дети, главным образом в возрасте до 2 лет.