ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ
Меры предосторожности при работе с автоклавами.
Соблюдение следующих правил может свести к минимуму опасности, возникающие при работе с емкостями, находящимися под давлением.
1.Ответственность за использование и регулярное обслуживание следует возложить на подготовленных сотрудников.
2.Программа профилактики должна включать регулярную инспекцию квалифицированным персоналом камеры, герметичности дверец и всех измерительных и контрольных устройств.
3.Пар должен быть насыщенным и не содержать химических веществ (например, ингибиторов коррозии), которые могут контаминировать стерилизуемые предметы.
4.Все материалы, подлежащие автоклавированию, должны быть помещены в контейнеры, обеспечивающие беспрепятственное удаление воздуха и хорошую проводимость тепла; камера должна быть загружена неплотно, чтобы дать пару равномерный доступ ко всем загруженным предметам.
5.Если автоклав не оборудован внутренними предохранительными запорами, препятствующими открыванию двери при повышенном давлении, то в этом случае необходимо предусмотреть возможность открытия дверки только после закрытия основного клапана подачи пара и снижения температура до 80 °C.
6.При автоклавировании жидкостей устройство выпуска пара следует установить на медленный режим, так как жидкости при их выгрузке могут выкипать из-за перегрева.
7.При открывании автоклава оператор должен надеть подходящие перчатки и защитные козырьки, даже если температура упала ниже 80 °C.
8.В ходе обычной проверки эффективности автоклава индикаторы биологической стабильности и термопары должны помещаться в центр каждой загрузки. Для определения правильных циклов функционирования настоятельно рекомендуется проводить регулярный контроль «наихудших случаев» загрузки с использованием термопар и регистрирующих устройств.
9.Дренажный экранирующий фильтр камеры (в случае наличия) следует ежедневно снимать и чистить.
10.Следует обращать особое внимание на то, чтобы выпускной клапан пара не был закрыт бумагой или другими материалами.
Сжигание
Сжигание является полезным методом уничтожения останков животных, а также анатомических и других отходов с предварительной деконтаминацией или без нее (cм. главу 3). Сжигание является альтернативой автоклавированию только в том случае, если мусоросжигатель находится под контролем лаборатории.
Правильное сжигание предполагает необходимость эффективных средств контроля температуры и камеры вторичного сжигания. Многие мусоросжигатели, особенно имеющие только одну камеру сжигания, не подходят для работы с инфекционными материалами, останками животных и предметами из пластмассы. Такие материалы уничтожаются не полностью, в результате чего с исходящим потоком может происходить загрязнение атмосферы микроорганизмами, токсичными химическими веществами и дымом. Тем не менее, существует много конструкций камер сжигания. В идеале, температура в первичной камере должна быть не менее 800 °C, а во вторичной камере – не менее 1000 °C.
Материалы для сжигания, даже если они прошли предварительную деконтаминацию, должны переноситься в мусоросжигатель в мешках, желательно в пласти-
• 92 •
14. ДЕЗИНФЕКЦИЯ И СТЕРИЛИЗАЦИЯ
ковых. Сотрудники, работающие с мусоросжигателем, должны быть надлежащим образом проинструктированы относительно загрузки и контроля температуры. Следует также отметить, что эффективное функционирование мусоросжигателя в значительной степени зависит от правильного сочетания сжигаемых материалов.
В настоящее время многие обеспокоены тем, что существующие и проектируемые мусоросжигатели могут оказывать отрицательное воздействие на окружающую среду, поэтому сейчас проводится работа по улучшению экологических характеристик мусоросжигателей и повышению их эффективности с точки зрения затрат энергии.
Удаление отходов
Удаление лабораторных и медицинских отходов регулируется различными региональными, национальными и международными нормами, поэтому до разработки и осуществления программы по обработке, транспортировке и удалению биологически опасных отходов, следует ознакомиться с самыми последними изданиями документов по этому вопросу. Как правило, с золой, образующейся в мусоросжигателе после сжигания отходов, можно обращаться как с обычными бытовыми отходами и вывозить силами местных служб. Автоклавированные отходы можно сжигать во внешних мусоросжигателях или вывозить на мусорные свалки (см. главу 3).
Дополнительную информацию см. в источниках (13) и (29-39).
• 93 •
15.Основы перевозки инфекционных материалов
Перевозка инфекционных и потенциально инфекционных материалов строго регламентирована национальными и международными нормативными положениями. В этих положениях изложен порядок правильного использования упаковочного материала, а также другие требования к погрузочно-разгрузочным операциям.
Лабораторный персонал должен обращаться с инфекционными материалами в соответствии с применимыми транспортными нормами. Соответствие этим правилам обеспечит:
1.Снижение вероятности нарушения упаковки и утечки и, как следствие
2.Уменьшение воздействия возможных инфекций
3.Повышение эффективности поставок упакованных материалов.
Международные правила перевозки
Правила перевозки инфекционных материалов (любым видом транспорта) основаны на принятых Организацией Объединенных Наций Типовых правилах перевозки опасных грузов (40). Содержащиеся в них рекомендации разработаны Комитетом экспертов Организации Объединенных Наций по перевозке опасных грузов (КЭПОГ). Для придания этим правилам обязательного характера компетентные органы должны включить их в национальное законодательство и международные правила, регулирующие перевозки отдельными видами транспорта (например,
Технические инструкции по безопасной перевозке опасных грузов воздушным транспортом (41) Международной организации гражданской авиации (ИКАО) и
Европейское соглашение о международной дорожной перевозке опасных грузов (ДОПОГ) (42)).
Международная ассоциация воздушного транспорта (ИАТА) ежегодно издает
Руководящие принципы по отгрузке инфекционных веществ (43). Эти принципы должны соответствовать Техническим инструкциям ИКАО в качестве минимального стандарта, но могут налагать дополнительные ограничения. Соблюдение принципов ИАТА является обязательным, если отгрузка осуществляется членами ИАТА.
Поскольку Типовые правила перевозки опасных грузов носят динамичный характер в том плане, что один раз в два года в них вносятся поправки, для ознакомления с применимыми правилами следует обращаться к самому последнему изданию текстов этих правил на национальном и международном уровнях.
Участие ВОЗ в работе КЭПОГ сводится к выполнению консультативных функций. Крупные изменения в правилах перевозки инфекционных веществ были внесены в 13-е издание (2003 г.) Типовых правил ООН (40). Справочную информацию, касающуюся принятых поправок, можно получить в ВОЗ (44).
Международные типовые правилах не имеют целью подменить какие бы то ни было местные или национальные требования. Однако в тех случаях, когда национальные требования отсутствуют, следует применять международные типовые правила.
• 94 •
15. ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ
Важно отметить, что международные перевозки инфекционных веществ также подчиняются национальным правилам, касающимся импорта/экспорта.
Базовый принцип тройной упаковки
Система тройной упаковки, которая применяется для транспортировки инфекционных и потенциально инфекционных материалов, проиллюстрирована на рисунке 11. Эта система упаковки состоит из трех слоев: первичный контейнер, вторичная упаковка и внешняя упаковка.
Первичный контейнер, в котором находится образец, должен быть герметичным и иметь маркировку, указывающую на его содержимое. Он должен быть завернут в достаточное количество абсорбирующего материала, способного поглотить всю жидкость в случае повреждения контейнера или утечки.
Вторичная водонепроницаемая упаковка используется для защиты первичного контейнера (контейнеров). Несколько обернутых первичных контейнеров могут быть помещены в одну вторичную упаковку. Некоторые нормативные тексты содержат положения, регламентирующие ограничение объема и/или веса упакованных инфекционных материалов.
Третий слой служит для защиты вторичной упаковки от физического повреждения во время перевозки. В соответствии с самыми последними правилами должны также представляться бланки данных об образце, письма и другая информация, позволяющая идентифицировать или описать образец или установить личность перевозчика и получателя.
Типовые правила ООН предписывают использование двух различных систем тройных упаковок. Базовая система тройной упаковки применяется к транспортировке разнообразных инфекционных материалов; однако микроорганизмы высокого риска должны перевозиться в соответствии с более строгими требованиями. Для получения более подробной информации об использовании различных упаковок в зависимости от вида перевозимых материалов рекомендуется обратиться к тексту применяемых национальных и/или международных типовых правил.
Процедура обработки пролившегося материала
В случае разлития инфекционного или потенциально инфекционного материала следует применять следующую процедуру чистки.
1.Надеть перчатки и защитную одежду, включая, в случае необходимости, защитные приспособления для лица и глаз.
2.Накрыть пролившийся материал тканевым или бумажным полотенцем, чтобы предотвратить его дальнейшее распространение.
3.Вылить соответствующее дезинфицирующее средство через полотенце на пролившийся материал и прилегающую зону (как правило, для этой цели достаточно 5-процентного раствора гипохлорита натрия, но в случае разлития на борту самолетов следует применять четвертичные аммониевые дезинфицирующие средства).
4.Применять дезинфицирующее средство следует концентрическими кругами, начиная с внешней зоны пролившегося материала и постепенно продвигаясь к центру.
5.По истечении надлежащего периода времени (например, 30 минут), удалите весь материал. При наличии разбившегося стекла или других острых предметов для их сбора используйте совок для мусора или кусок картона и затем положите их в прочный контейнер для последующего уничтожения.
•95 •
ПРАКТИЧЕСКОЕ РУКОВОДСТВО ПО БИОЛОГИЧЕСКОЙ БЕЗОПАСНОСТИ В ЛАБОРАТОРНЫХ УСЛОВИЯХ
Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории А
первичный контейнер |
крышка |
|
(пробирка с материалом |
|
|
для исследований) |
абсорбирующий материал |
|
|
||
вторичная упаковка |
данные об образцах |
|
(водонепроницаемая) |
||
(включая перечень содержимого) |
||
|
||
|
внешняя упаковка |
|
|
знак «Не кантовать» |
|
|
(не обязателен в слу- |
|
|
чае, если объем пер- |
|
|
вичного контейнера не |
|
|
превышает 50 мл) |
|
|
маркировка |
|
|
спецификации ООН |
Упаковка и маркировка инфекционных материалов категории B
|
первичный контейнер |
водонепроницаемая |
(герметичный на случай |
протечек и просеивания) |
|
крышка |
|
|
подставка-держатель |
|
(из пенопласта, губки) |
абсорбирующий |
|
упаковочный |
|
материал |
перечень содержимого |
|
|
|
(данные об образцах) |
вторичная |
твердая внешняя упаковка |
упаковка |
|
(герметичная на |
|
спучай протечек |
надлежащее транспортное |
и просеивания) |
|
|
наименование |
|
упаковочная маркировка |
указания: «Кому» / |
|
«От кого» |
|
Рисунок 11. Примеры систем тройной упаковки
(графическая информация была любезно предоставлена ИATA, Монреаль, Канада).
• 96 •
15.ОСНОВЫ ПЕРЕВОЗКИ ИНФЕКЦИОННЫХ МАТЕРИАЛОВ
6.Очистите и продезинфицируйте участок разлития (в случае необходимости, повторите этапы 2-5).
7.Положите контаминированные материалы в водонепроницаемый, стойкий к проколам контейнер для последующего удаления.
8.После успешной дезинфекции проинформируйте соответствующий орган о том, что участок был деконтаминирован.
• 97 •
ЧАСТЬ V
Введение в биотехнологию
16.Биологическая безопасность и технология рекомбинантной ДНК
Технология рекомбинантной ДНК заключается в соединении генетического материала, полученного из различных источников, и создании таким образом генетически модифицированных организмов (ГМО), возможно, никогда ранее не существовавших в природе. На первых этапах работы молекулярные биологи выражали опасения по поводу того, что такие организмы могут обладать непредсказуемыми и нежелательными свойствами, которые могут представлять биологическую опасность за стенами лабораторий. Эти опасения легли в основу научной конференции, состоявшейся в 1975 г. в Асиломаре, шт. Калифорния, США (45). На этой встрече были обсуждены вопросы безопасности и предложены первые руководящие принципы в области технологии рекомбинантной ДНК. Дальнейшие научные исследования на протяжении более чем 25 лет показали, что при проведении надлежащей оценки риска и принятии соответствующих защитных мер генная инженерия может быть безопасной.
Технология рекомбинантной ДНК или генная инженерия была впервые использована для клонирования сегментов ДНК в бактериальных организмах в целях повышенной экспрессии специфических генных продуктов, необходимых для дальнейших исследований. Молекулы рекомбинантной ДНК были также использованы для создания ГМО, таких как трансгенных и «нокаутных» (с выключенными генами) животных, а также трансгенных растений.
Технология рекомбинантной ДНК уже оказала огромное влияние на биологию и медицину и, возможно, окажет еще большее воздействие теперь, когда синтезирована нуклеотидная последовательность полного человеческого генома. Десятки тысяч генов не известного до сих пор предназначения будут изучены на основании использования технологии рекомбинантной ДНК. Генная терапия может стать общепринятой при лечении определенных заболеваний и вполне вероятно, что с использованием технологий генной инженерии будут созданы новые векторы для переноса генов. В современном сельском хозяйстве может также значительно возрасти роль трансгенных растений, выведенных на основании технологии рекомбинантной ДНК.
Эксперименты в области создания и использования ГМО должны проводиться после проведения оценки риска с точки зрения биологической безопасности. Патогенные свойства таких организмов и любые потенциальные опасности, связанные с ними, могут быть не известны и не описаны должным образом. В этой связи необходимо оценить особенности организма-донора, свойства последовательностей ДНК, предназначенных для переноса, особенности организма-реципиента и свойства окружающей среды. Эти данные должны содействовать определению уровня биологической безопасности, требуемого для безопасного обращения с создаваемым ГМО, и установлению необходимых систем биологической и физической изоляции.
Соображения биологической безопасности для биологических систем экспрессии
Биологические системы экспрессии состоят из векторов и клеток-хозяев. В целях эффективности и безопасности в процессе их использования они должны соот-
• 101 •